玉門市2014-2018年羊布魯氏菌病血清學(xué)調(diào)查分析

楊東玲，薛慧文

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070；2.甘肅省玉門市動物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 玉門 735211）

布魯氏菌?。˙rucellosis）又稱布氏桿菌病，是由布魯氏菌屬的細(xì)菌侵入機(jī)體引起的以流產(chǎn)和發(fā)熱為特征的一種變態(tài)反應(yīng)性人畜共患性傳染病。布魯氏菌病的易感宿主目前已知有60多種，如家禽、家畜以及野生動物等都可以是布魯氏菌病的宿主，動物感染布魯氏菌病后會在動物與動物之間傳播，造成廣泛性的發(fā)病狀態(tài)或者帶菌狀態(tài)[1]。直接或者間接接觸患病動物及其流產(chǎn)分娩時的分泌物、胎盤胎衣、乳汁、皮毛，食用被布魯氏菌污染的食物以及實驗室接觸等方式也可以被感染。布魯氏菌感染后主要引起雌性動物流產(chǎn)和雄性動物不育等典型癥狀，人感染后則會出現(xiàn)波狀熱、虛弱、乏力、關(guān)節(jié)疼痛等癥狀，嚴(yán)重者會喪失勞動能力和生育能力。布魯氏菌病的傳播介質(zhì)很多，可經(jīng)過皮膚、黏膜、呼吸道及消化道等途徑進(jìn)行傳播[2]。另外，患病公畜的精液中也含有大量的布病原菌，交配時經(jīng)生殖道進(jìn)行傳播。經(jīng)常接觸動物的飼養(yǎng)工、擠奶工、剪毛工等養(yǎng)殖人員，在自身防護(hù)措施不夠或有明顯可見傷口且抵抗力低下、清洗消毒不徹底的情況下，動物身體上攜帶的布魯氏菌就可以感染到人類[3]。人類之間的感染和傳播一般很罕見，至目前未見報道。

近年來，由于動物流通加快，異地活畜交易頻繁，引種防病檢疫意識缺乏，部分農(nóng)戶未經(jīng)申報盲目調(diào)入攜帶或感染布魯氏菌的動物，形成傳染源，致使該市布魯氏菌病死灰復(fù)燃。為了解玉門市的羊布魯氏菌病分布情況和流行特征，對玉門市12鄉(xiāng)鎮(zhèn)和2個農(nóng)墾團(tuán)場的所有存欄羊只進(jìn)行了隨機(jī)抽樣，通過血清學(xué)抗體檢測，掌握該市羊布魯氏菌病感染情況及分布情況，為有效控制疫情提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 以玉門市轄區(qū)內(nèi)12個鄉(xiāng)鎮(zhèn)和2個農(nóng)墾團(tuán)場為單位，按照全市不少于2萬份，每個鄉(xiāng)鎮(zhèn)和農(nóng)墾團(tuán)場不少于1 500份的既定抽樣監(jiān)測數(shù)量，選擇羊只存欄200只以上規(guī)模養(yǎng)殖戶定點(diǎn)采樣，隨機(jī)挑選散養(yǎng)戶按養(yǎng)殖比例采集血樣樣品。采集未經(jīng)布魯氏菌疫苗免疫羊只血液樣品69 804份，采集經(jīng)布魯氏菌疫苗免疫羊只血液樣品1 250份的與經(jīng)疫苗免疫血清。

由于樣本容量大，為確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，將12鄉(xiāng)鎮(zhèn)和2個農(nóng)墾團(tuán)團(tuán)場按照地理位置及地域特點(diǎn)分為四個片區(qū)，即沿山鄉(xiāng)鎮(zhèn)（昌馬鄉(xiāng)、清泉鄉(xiāng)、赤金鎮(zhèn)）、城郊鄉(xiāng)鎮(zhèn)（玉門鎮(zhèn)、下西號鄉(xiāng)、黃閘灣鄉(xiāng)、柳河鄉(xiāng)、六墩鄉(xiāng)）、偏遠(yuǎn)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（花海鎮(zhèn)、柳湖鄉(xiāng)、獨(dú)山子鄉(xiāng)、小金灣鄉(xiāng)）、農(nóng)墾團(tuán)場（黃花、飲馬），實行分批次分區(qū)域采樣，冷藏箱保存，當(dāng)天送檢，全血由各鄉(xiāng)鎮(zhèn)和農(nóng)墾團(tuán)場畜牧獸醫(yī)站提供，檢測工作在玉門市動物疫病預(yù)防控中心國家生物安全二級實驗室完成。

1.1.2 診斷試劑 布魯氏菌琥紅平板凝集試驗用抗原、布魯氏菌試管凝集試驗用抗原，布魯氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、布魯氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陽性血清。試劑均由制標(biāo)單位哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司生產(chǎn)，由甘肅省酒泉市畜牧獸醫(yī)局按年度統(tǒng)一配發(fā)。

1.2 儀器設(shè)備

0.5%石炭酸生理鹽水、潔凈玻璃板、成品的琥紅平板凝集反應(yīng)紙、凝集試驗管（三分管）、比濁管、試管、1 ml滅菌吸管、45～50 μl移液器、試管架、燒杯、牙簽（供攪拌用）、酒精燈、火柴、離心管、離心機(jī)、恒溫箱或生化培養(yǎng)箱等。

1.3 方法

根據(jù)省級和市級布魯氏菌病抽樣監(jiān)測方案，結(jié)合玉門市的實際情況，通過血清學(xué)檢測開展布魯氏菌病監(jiān)測工作。血清學(xué)監(jiān)測方法采用琥紅平板凝集試驗（RBT）進(jìn)行篩選試驗，篩選試驗陽性樣品再用試管凝集試驗（SAT）進(jìn)行確診試驗。試驗的操作方法和判定標(biāo)準(zhǔn)均按照《動物布魯氏菌病診斷技術(shù)》（GB/T18646-2002）規(guī)定進(jìn)行[4]。

1.3.1 琥紅平板凝集試驗（RBT） 首先用離心機(jī)分離血清，將成品的琥紅平板凝集反應(yīng)紙上各格標(biāo)記受檢血清號，并加相應(yīng)血清30 μl，最后一格加入40 μl生理鹽水作對照。然后用滴管吸取均勻懸浮的抗原液，在每一格受檢血清旁垂直滴加抗原液30 μl，在3 min內(nèi)用牙簽類小棒攪動血清和抗原充分混合，一個小格用一個牙簽。在試驗中設(shè)置陰陽性對照，第一格加入布魯氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陰性血清，第二格加入布魯氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陽性血清，最后一格加入40 μl生理鹽水作為對照組。最后結(jié)果判定，在陰、陽性血清對照成立的條件下，對被檢血清進(jìn)行判定，受檢血清在3 min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者判為陽性（+），無凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性（-）。

1.3.2 試管凝集試驗（SAT） 首先制備0.5%石炭酸的10%鹽溶液作為抗原和血清的稀釋液，其次稀釋待檢血清，取5支凝集試管排列于試管架上，每份血清用4支凝集試管，依次標(biāo)記檢驗編碼，第1管加1.15 ml稀釋液，第2～4管各加入0.5 ml稀釋液，然后用1 ml移液器取被檢血清0.1 ml，加入第1管內(nèi)，并混合均勻，充分混勻后以該移液器吸取混合液0.25 ml棄去；取0.5 ml混合液加入第2管，用該移液器如前述方法混合；再吸第2管混合液0.5 ml至第3管，如此倍比稀釋至第4管，從第4管棄去混勻液0.5 ml。第5管為稀釋液對照管。稀釋完畢后，將0.5 ml 20倍稀釋的抗原加入已稀釋好的各血清管中，并振搖均勻，此時血清稀釋倍數(shù)依次變?yōu)?：25、1：50、1：100、1：200；設(shè)陰性血清、陽性血清和抗原對照，陰性血清的稀釋和加抗原的方法與受檢血清同，陽性血清須稀釋到原有滴度，加抗原的方法與受檢血清同， 抗原對照：1：20稀釋抗原液5 ml，再加0.5 ml稀釋液，觀察抗原是否有自凝現(xiàn)象。

每次試驗按照國家標(biāo)準(zhǔn)方法制備5支比濁管作為判定的標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)，將試管靜置于37～40℃恒溫箱中24 h，參照比濁管，取出并觀察試驗管，按各試管上層液體清亮度判讀記錄結(jié)果。結(jié)果判定，凝集反應(yīng)程度分為五級：a)++++菌體完全凝集，100%下沉，管底形成大片凝集物，上層液體100%清亮；b）+++菌體幾乎完全（約75%）凝集，管底的片狀凝集物較小而薄，上層液體75%清亮；c）++菌體顯著（約50%）凝集，管底出現(xiàn)凝集環(huán)，液體50%清亮；d）+僅有少部分細(xì)菌凝集，管底可見有稀疏、點(diǎn)狀的凝集物，液體25%清亮；e）—液體均勻混濁，無沉淀凝集物。

2 結(jié)果與分析

2.1 2014-2016年玉門市未經(jīng)免疫羊布魯氏菌病抗體檢測結(jié)果及分析

2014-2016年共抽樣監(jiān)測69 804只羊，檢出陽性樣品數(shù)4 304只，陽性率為6.17%，2015年整體陽性率略微下降，2016年猛然增長至8.19%，2014-2016年玉門市羊布魯氏菌病呈爆發(fā)式增長。這其中規(guī)模場和散養(yǎng)戶的抽檢數(shù)量都在減少，規(guī)模場的陽性數(shù)和陽性率在下降，且下降幅度明顯，但全市的羊布魯氏菌陽性率呈上升，說明全市布病疫情主要發(fā)生于分散養(yǎng)殖戶[5]。詳見表1。

2.2 2017-2018年玉門市經(jīng)布魯氏菌S2株弱毒疫苗免疫羊抗體檢測結(jié)果及分析

2016年10月份開始，玉門市將羊布魯氏菌病疫苗免疫列入重大動物疫病強(qiáng)制免疫計劃，采用統(tǒng)一配備下發(fā)的豬株布氏菌病弱毒活疫苗(S2株)對全市除種公羊外的所有基礎(chǔ)母羊、懷孕母羊、新生羔羊及育肥羊進(jìn)行羊布魯氏菌病口服給藥免疫。2017-2018年共抽樣監(jiān)測經(jīng)布魯氏菌S2株疫苗免疫6個月以上的羊血清樣品1 250份，檢出陽性樣品4份，4份陽性均為種公畜血清，陽性率由2014年的5.48%降至2018年的0.29%，經(jīng)疫苗免疫控制布魯氏菌病取得了較好的效果（見表2）。

2.3 2014-2018年全市各鄉(xiāng)鎮(zhèn)和農(nóng)墾團(tuán)場羊布魯氏菌病血清學(xué)檢測結(jié)果及分析

本次調(diào)查中，五年時間共調(diào)查了包括規(guī)模養(yǎng)殖場在內(nèi)的1 151戶71 054只羊，其中羊存欄200只以上規(guī)模（養(yǎng)殖小區(qū)）55個，實現(xiàn)全覆蓋檢測，散養(yǎng)戶1 096戶，占到玉門市羊散養(yǎng)戶9.75%。2014年抽檢規(guī)模養(yǎng)殖場共9 204只羊，檢出布魯氏菌病陽性羊302只，其中有31只是種公羊，六墩鄉(xiāng)4個養(yǎng)殖場中的1個養(yǎng)殖場出現(xiàn)陽性羊54只，其余3個養(yǎng)殖場未檢出陽性羊，花海鎮(zhèn)、赤金鎮(zhèn)、下西號鄉(xiāng)、清泉鄉(xiāng)、柳河鄉(xiāng)、小金灣的規(guī)模養(yǎng)殖場未檢出陽性羊。2015年抽檢規(guī)模養(yǎng)殖場共9 000只羊，共檢出布魯氏菌病陽性羊170只，其中有玉門鎮(zhèn)、下西號鄉(xiāng)、黃閘灣鄉(xiāng)、飲馬農(nóng)場、黃花農(nóng)場的養(yǎng)殖場全部檢出陽性羊，其他鄉(xiāng)鎮(zhèn)未檢出陽性羊。2016年抽檢規(guī)模場共9 002只，共檢出陽性羊22只，玉門鎮(zhèn)、下西號鄉(xiāng)、黃閘灣鄉(xiāng)、黃花農(nóng)場、飲馬農(nóng)場均檢出陽性羊，其他鄉(xiāng)鎮(zhèn)未檢出陽性羊。2017年抽檢全市規(guī)模場檢出布病陽性畜3只，花海鎮(zhèn)一個種羊場檢出2只種公畜，玉門鎮(zhèn)一個種羊場檢出1只種公畜，其他鄉(xiāng)鎮(zhèn)未檢出陽性畜，2018年檢出陽性羊1只，來自飲馬農(nóng)場的散養(yǎng)戶（見圖1）。

表1. 2014-2016年玉門未經(jīng)免疫羊布魯氏菌病檢測結(jié)果

表2. 2017-2018年玉門市經(jīng)免疫羊布魯氏菌病檢測結(jié)果

圖1. 2014-2018年玉門市各鄉(xiāng)鎮(zhèn)和農(nóng)墾團(tuán)場羊布病檢測結(jié)果柱狀圖

圖1反映出，玉門市的布病陽性數(shù)呈現(xiàn)出了明顯的點(diǎn)狀分布特征，以靠近城市中心、交通條件便利、活畜交易頻繁的鄉(xiāng)鎮(zhèn)和農(nóng)墾團(tuán)場出現(xiàn)陽性數(shù)目居多，偏遠(yuǎn)鄉(xiāng)鎮(zhèn)和沿山鄉(xiāng)鎮(zhèn)的陽性數(shù)較少。玉門市2013年至2016年的人間布魯氏菌疫情情況及感染布病新增病例數(shù)的分布情況也印證了這一結(jié)果，即羊布病陽性率高的地區(qū)，人感染布病的新增病例數(shù)也較高，人間布魯氏菌病感染率的趨勢跟隨動物布魯氏菌病疫情的變化而變化，畜間陽性率越高，人間布魯氏菌病也呈現(xiàn)逐年升高[6]。

2.4 2014-2018年玉門市規(guī)模養(yǎng)殖場及散養(yǎng)戶布病檢測結(jié)果及分析

玉門市散養(yǎng)戶的羊布病陽性率明顯高于規(guī)模戶的羊陽性率，且散養(yǎng)戶的羊只布病陽性率在逐年升高，在2016年達(dá)到峰值，規(guī)模場的陽性率卻在逐年下降，這可能是由于規(guī)模養(yǎng)殖場一旦檢測發(fā)現(xiàn)陽性畜，便及時采取撲殺焚燒深埋方式處理凈化，消滅了傳染源，切斷了傳播途徑，迅速控制了疫情。玉門散養(yǎng)戶較多，養(yǎng)殖的羊只所占比例較大，專業(yè)技術(shù)人員缺乏，撲殺補(bǔ)助較低，加上養(yǎng)殖戶有養(yǎng)殖效益、經(jīng)濟(jì)價值等方面的思想顧慮，給撲殺凈化滅源工作帶來了很大的困難，造成散養(yǎng)戶陽性率逐年升高。詳見表3和圖2。

表3. 2014-2018年玉門市規(guī)模場及散養(yǎng)戶布病檢測結(jié)果

圖2. 2014-2018年玉門市規(guī)模養(yǎng)殖場和散養(yǎng)戶羊布病檢測結(jié)果柱狀圖

3 討論

檢測數(shù)據(jù)分析表明，異地調(diào)引和活畜交易進(jìn)入玉門市的母畜及種用公畜是畜間布魯氏菌病爆發(fā)的主要來源，異地調(diào)運(yùn)和交易多在5、6、7、8月份進(jìn)行，春末夏初為發(fā)病的高峰季節(jié)，呈點(diǎn)狀暴發(fā)流行。從地域性看，發(fā)病率農(nóng)墾團(tuán)場（黃花農(nóng)場、飲馬農(nóng)場）＞城郊鄉(xiāng)鎮(zhèn)（玉門鎮(zhèn)、下西號鎮(zhèn)、黃閘灣鎮(zhèn)、柳河鎮(zhèn)）＞移民鄉(xiāng)鎮(zhèn)（六墩鄉(xiāng)、獨(dú)山子鄉(xiāng)、小金灣鄉(xiāng)）＞偏遠(yuǎn)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（花海鎮(zhèn)、昌馬鄉(xiāng)、赤金鎮(zhèn)、清泉鄉(xiāng)）；從養(yǎng)殖規(guī)模上看，散養(yǎng)戶的發(fā)病率明顯高于規(guī)模養(yǎng)殖場的發(fā)病率；從年齡分布看，性成熟動物的陽性率明顯高于幼齡動物；從養(yǎng)殖畜別上看，母畜的易感性明顯高于公畜，公畜多以隱形感染或帶菌狀態(tài)為主，母畜多是通過交配感染了病原。

導(dǎo)致玉門市羊布魯氏菌病的暴發(fā)和地方流行的原因可能有：一是2010年政府加大了對畜牧養(yǎng)殖業(yè)的投入，以肉羊養(yǎng)殖業(yè)為代表的畜牧業(yè)迅速發(fā)展，外地引種及活畜交易頻繁，養(yǎng)殖戶布病防控檢疫意識不強(qiáng)，經(jīng)引種、交易將外源性布魯氏菌病引入該市；二是玉門市肉羊養(yǎng)殖管理粗放，養(yǎng)殖水平低下，多以圈舍簡陋的散養(yǎng)和草場放牧為主，規(guī)模化、標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)殖還沒有全部實現(xiàn)，對于布病的防控措施無法全部落實到位；三是由于牛羊的經(jīng)濟(jì)價值逐年升高，撲殺補(bǔ)助資金過低，出于收支盈利的考慮，散養(yǎng)戶普遍存在畏難隱瞞不報心理，發(fā)現(xiàn)布病動物寧可出售轉(zhuǎn)讓也不報告，造成布病的零散傳播。

采用疫苗免疫防控布病初步取得了的明顯效果，玉門市現(xiàn)階段布魯氏菌病流行病學(xué)的發(fā)病率介于10%～0.2%之間，且主要集中在種公畜。為確保與玉門市畜牧養(yǎng)殖業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展和公共衛(wèi)生安全，提出以下防制措施：一是采用疫苗免疫預(yù)防和檢疫撲殺凈化相結(jié)合的方式是現(xiàn)階段以及今后布魯氏菌病防控的有效手段。對所有生產(chǎn)母畜進(jìn)行疫苗免疫，減少因流產(chǎn)造成的經(jīng)濟(jì)損失，形成免疫保護(hù)屏障，對種公畜及幼年畜實施實驗室監(jiān)測，淘汰凈化陽性種畜，撲殺無害化處理陽性畜[7]；二是加強(qiáng)引種及種用動物的布病檢疫，引入動物必須經(jīng)檢疫合格隔離飼養(yǎng)1個月經(jīng)監(jiān)測健康無疫后混群飼養(yǎng)[8]；三是推行標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)?；B(yǎng)殖，轉(zhuǎn)變養(yǎng)殖方式，提高管理防疫水平，強(qiáng)化從業(yè)者責(zé)任；四是利用融媒體等平臺宣傳科普布病防控知識，提高養(yǎng)殖戶和公眾的防病和公共衛(wèi)生安全意識；五是政府加大對布病防控的財政投入力度，提高免疫和撲殺補(bǔ)助補(bǔ)貼，解決廣大養(yǎng)殖戶的后顧之憂，從而控制零散發(fā)病率。

肉?？谘兹绾畏乐危?/p>

肉?？谇火つ€或潰瘍，洗口后可用碘甘油（5%碘酒1份，甘油9份）或10%磺胺甘油涂抹，每日2次。也可用青霉素1 000國際單位加適量蜂蜜混勻后，涂患部。已化膿出血的，將獸用冰硼散用紙筒吹入患處，每天1～2次3天可以治愈。

用1%食鹽水，或2%～3%硼酸液，或2%～3%碳酸氫鈉溶液沖洗口腔，一日2～3次?？谇挥袗撼舻模?.1%高錳酸鉀液洗口，唾液分泌旺盛，用1%明礬溶液或鞣酸溶液防治。

觀察肉牛體溫，如果體溫升高，不能采食時，靜脈注射10%～25%葡萄糖液l 000～1 500 ml，結(jié)合青霉素或磺胺制劑即可，每天兩次。