HPLC法測定鹽酸普羅帕酮片的含量

1.湖北科技學(xué)院，湖北 咸寧 437100；2.軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院，北京 100850

鹽酸普羅帕酮為ⅠC類鈉通道阻滯抗心律失常藥，臨床上使用廣泛，主要適應(yīng)癥為陣發(fā)性室上性心動過速、心房顫動和心房撲動和室性早搏與室性心動過速以及預(yù)激綜合征[1-4]。2015版《中國藥典》中規(guī)定采用紫外分光光度法測定鹽酸普羅帕酮片的含量[5]，也有文獻(xiàn)采用滴定法進(jìn)行鹽酸普羅帕酮的含量測定。筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)，采用高效液相色譜法進(jìn)行鹽酸普羅帕酮片的含量測定。本方法準(zhǔn)確、簡便、重復(fù)性及專屬性良好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200 高效液相色譜儀；電子分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)；PB-10酸度計(jì)(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)。

1.2 試藥 乙腈為色譜純(賽默飛世爾科技(中國)有限公司)；磷酸氫二鉀為分析純(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；磷酸(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；水為娃哈哈純凈水；鹽酸普羅帕酮對照品(中國食品藥品檢定研究院)；鹽酸普羅帕酮片(規(guī)格為50 mg，批號：170928、171002、171008，自制)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜柱 安捷倫C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙睛-0.015 mol/L磷酸氫二鉀溶液(pH2.5)=35∶65；流速: 1.0 mL/min；檢測波長：248 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品儲備液 稱取鹽酸普羅帕酮對照品約50 mg置100 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2 對照品溶液 精密量取對照品儲備液5 mL于50 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。

2.2.3 供試品溶液 取鹽酸普羅帕酮片20片于研缽中研細(xì)，精密稱取適量細(xì)粉(相當(dāng)于含鹽酸普羅帕酮50 mg)，置100 mL容量瓶中，加適量流動相溶解后稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5 mL于50 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。

2.2.4 空白溶液 按處方組成和工藝制備不含鹽酸普羅帕酮的空白片，并按2.2.3中供試液的方法配制空白溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性考察 按2.1項(xiàng)的色譜條件，分別精密量取對照品溶液、供試品溶液、空白溶液10 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖。在此條件下，鹽酸普羅帕酮保留時(shí)間約為10 min，供試品溶液色譜圖在對照品溶液保留時(shí)間處有相同色譜峰，且與相鄰峰分離度符合要求，而空白溶液在主峰位置無干擾。色譜圖如圖1所示。

2.3.2 線性關(guān)系考察 精密量取對照品儲備液2、4、5、6、7.5 mL，分別置于50 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。按照2.1項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，以峰面積(Y)對濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程:Y=12.388X-12.473(r=0.9998)。結(jié)果表明，在20～75 μg/mL范圍內(nèi)，鹽酸普羅帕酮峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn) 取對照品溶液(50 μg/m)，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積RSD為0.28%，表明儀器精密度良好，所選色譜條件穩(wěn)定。

2.3.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號的樣品(批號170928)，平行制備6份供試品溶液，按照2.1項(xiàng)的色譜條件，分別進(jìn)樣測定。結(jié)果RSD為0.24%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液在室溫條件下放置，按照2.1項(xiàng)的色譜條件，測定0、2、6、8、12和24 h 時(shí)的峰面積，結(jié)果RSD為 0.57%，表明鹽酸普羅帕酮供試品溶液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6 回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取鹽酸普羅帕酮對照品50 mg，置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備溶液。分別精密量取0.8、1.0和1.2 mL，每種體積各取3份，置10 mL量瓶中,并按處方比例加入其余輔料，加流動相適量，振搖，稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另精密量取儲備溶液1.0 mL，加流動相定容至10 mL，作為對照品溶液。按照2.1項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為100.24%，RSD為0.719%。見表1。

表1 鹽酸普羅帕酮回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=9)

2.4 樣品含量測定 取三批樣品按照2.2.3項(xiàng)配制供試品溶液，按照2.1項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算含量。結(jié)果顯示含量符合要求。見表2。

表2 鹽酸普羅帕酮含量測定結(jié)果 (n=3)

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 用流動相溶解適量的鹽酸普羅帕酮制成溶液，在200～400 nm內(nèi)進(jìn)行紫外全波長掃描。結(jié)果紫外掃描圖譜顯示，鹽酸普羅帕酮在248 nm處有最大吸收，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[6-7]報(bào)道的鹽酸普羅帕酮質(zhì)量分析的方法，大部分均選擇在248 nm波長處測定，因此選248 nm為檢測波長。

3.2 色譜條件的選擇 本方法采用的色譜條件為安捷倫C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙睛-0.015 mol/L磷酸氫二鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)至pH2.5)=35∶65; 柱溫：30 ℃ 。柱溫時(shí)影響液相色譜分析的重要因素，當(dāng)改變柱溫時(shí)，對主藥出峰時(shí)間和峰型影響較大[8-9]，經(jīng)反復(fù)調(diào)試，選定最佳柱溫為30 ℃ 。該色譜條件專屬性好，靈敏度高，峰型好，主峰出峰時(shí)間約為10 min。

綜合上述，本方法用于鹽酸普羅帕酮的含量測定，相較紫外分光光度法專屬性高，準(zhǔn)確度和重復(fù)性好，簡便、快速，對于鹽酸普羅帕酮的質(zhì)量檢測有一定的參考意義。