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    牛細(xì)管精液冷凍溫度曲線與凍精質(zhì)量的研究

    2019-06-12 01:15:24田素香
    中國(guó)乳業(yè) 2019年5期
    關(guān)鍵詞:細(xì)管凍精液氮

    文/田素香 方 妍 陳 佳

    (光明牧業(yè)有限公司;上海奶牛育種中心有限公司)

    冷凍精液作為一種特殊的商品,對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量要求愈來愈高。當(dāng)前評(píng)定種公牛精液品質(zhì),主要依據(jù)國(guó)標(biāo)《牛冷凍精液的要求》(GB4143-2008)對(duì)采精量、原精活力、精子密度、精子凍后活力、精子畸形率五項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。種公牛由于個(gè)體間存在差異,使以上各項(xiàng)指標(biāo),尤其是凍后活力出現(xiàn)較大差異。在實(shí)際操作中,發(fā)現(xiàn)有的生產(chǎn)性能良好和外貌優(yōu)秀的公牛,由于精子抗凍性差等原因被淘汰。為提高牛精液的冷凍效果,提高制作冷凍精液的每頭牛各批冷凍精液之間的穩(wěn)定性,在制作冷凍精液的過程中,需研究冷凍溫度曲線的變化。

    1 材料和方法

    1.1 精液

    采自本站種公牛鮮精。

    1.2 稀釋液配制

    按量稱取所需藥品,加超純水至100 mL,溶解后過濾,75 ℃消毒30 min,降溫至40 ℃以下。加入新鮮卵黃、滅菌甘油和青、鏈霉素充分混勻后備用。

    1.3 分裝方法

    操作需在4 ℃冰柜中進(jìn)行,四針頭分裝機(jī)將漏斗中的精液利用負(fù)壓真空的原理通過軟管和針頭吸入0.25 mL塑料細(xì)管內(nèi),繼而封口打印,完成分裝。電腦控制的先進(jìn)打印系統(tǒng)同時(shí)打印牛只信息,確保所有凍精的可追溯性。

    1.4 平衡

    分裝后放入冰箱,在4 ℃中平衡2.5~4.0 h。

    1.5 冷凍

    將細(xì)管平置于冷凍箱內(nèi),每架盛放175 支細(xì)管,液氮熏蒸時(shí)間為7 min,然后浸入液氮中冷凍。

    1.6 活力檢查

    活力0.40以上為合格,畸形率評(píng)定按國(guó)標(biāo)《牛冷凍精液的要求》(GB4143-2008)進(jìn)行。

    2 精液冷凍溫度曲線

    精液冷凍溫度曲線包括以下幾個(gè)方面。

    2.1 始凍溫度

    精液冷凍前、冷凍容器中冷凍面的溫度。

    2.2 熱平衡溫度

    精液和冷凍面接觸后,精液一邊溫度下降一邊放熱,使冷凍面溫度回升,當(dāng)二者溫度一致并在短暫時(shí)間內(nèi)維持不變的溫度。

    表1 冷凍精液降溫速率表

    2.3 入氮溫度

    冷凍細(xì)管精液和冷凍箱體溫度呈同步速度迅速下降,達(dá)-140 ℃以下時(shí),將細(xì)管凍精迅速投入-196 ℃液氮中長(zhǎng)期保存。

    2.4 降溫控制

    公牛精液冷凍過程降溫控制如表1 所示。

    3 適宜的冷凍面曲線

    冷凍精液的實(shí)質(zhì)是精液與冷源環(huán)境進(jìn)行能量交換的過程,精液在冷凍過程中放出一定的能量后,由液相變化到固相。產(chǎn)生相變的原因是精液與其所處環(huán)境之間存在著極大的溫度差(-196~4 ℃)。冷凍過程中它們各自向相反的方向擴(kuò)散,進(jìn)行能量交換,直到溫度差等于零,達(dá)到能量平衡為止。其能量交換的極限值是熱擴(kuò)散平衡時(shí)的溫度,此時(shí),精液溫度擴(kuò)散的速度與精液凍結(jié)相變的速度保持一致。

    精液的冷凍過程中,首先是精液溫度的變化,精液由冷凍前的平衡溫度呈直線下降,是一個(gè)散熱過程,要求快速通過-60~0 ℃的危險(xiǎn)溫度區(qū)。當(dāng)下降溫度達(dá)到凝固點(diǎn)時(shí),精液便隨著降溫梯度由液態(tài)變?yōu)楣虘B(tài)。其次是冷凍面溫度變化,選用鋁板、氟板、銅網(wǎng)作為凍制精液的冷凍面,當(dāng)精液放入后溫度上升到最高點(diǎn),即為精液下降溫度與冷凍面上升溫度達(dá)到一致,稱為熱平衡,冷凍面溫度由上升轉(zhuǎn)為下降,達(dá)到-140 ℃呈曲線變化。制作冷凍精液要求冷凍面快速達(dá)到-110~-80 ℃適宜的熱平衡溫度區(qū),然后迅速下降到-140 ℃,方可能獲得解凍后精子活力高的優(yōu)質(zhì)精液。

    4 精液冷凍工藝所采用的冷凍面溫度曲線

    精液冷凍、解凍后活力與凍結(jié)時(shí)間有關(guān),上海奶牛育種中心有限公司采用法國(guó)卡蘇先進(jìn)的電腦編制程序的冷凍器來冷凍精液,其凍后精子活力比用液氮蒸氣法冷凍后的精子活力要高,而且精子存活時(shí)間更長(zhǎng)。這是因?yàn)椴僮髡唠y以控制液氮蒸汽法的初始冷凍溫度和液氮水平,同時(shí)冷凍量和冷凍速度也會(huì)影響冷凍溫度。公牛精液(最終甘油濃度5.0%~5.6%)冷凍過程降溫控制如表1、圖1。

    圖1 牛冷凍精液的冷凍面溫度曲線

    5 冷凍方法

    目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的牛冷凍精液劑型主要是微型的(0.25 mL)。細(xì)管精液均勻的放置在冷凍架上,放入冷凍容器內(nèi),以液氮為冷源,通過液氮熏蒸降溫、冷凍。

    如有遇到細(xì)管數(shù)不多的情況,為提高冷凍效果可在下面冷凍架上放置廢棄細(xì)管,避免液氮直接觸碰細(xì)管精液。

    6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    每次冷凍后的細(xì)管隨機(jī)抽樣,2010年和2011年的檢測(cè)結(jié)果分別為:平均活力為0.415和0.409;平均畸形率為13.7%和1 4.5%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析凍精解凍后活力、畸形率差異顯著(P<0.01)(表2、3、4)。

    表2 細(xì)管精液產(chǎn)量、平均活力和畸形率情況

    表3 種公牛每月平均畸形率 單位:%

    表4 種公牛每月平均解凍活力 單位:%

    7 討論

    增加細(xì)管生產(chǎn)數(shù)量會(huì)影響凍精品質(zhì),導(dǎo)致畸形率增加。提高凍精質(zhì)量的關(guān)鍵在于合理使用牛只,精心飼養(yǎng),細(xì)致管理,具體措施如下。

    7.1 種公牛日糧調(diào)配相當(dāng)重要,這對(duì)保證種公牛有旺盛的性欲及優(yōu)質(zhì)的精液是必要的。

    7.2 90%以上的牛只跛行是由蹄病或趾病造成的,建議舍飼的公牛每年進(jìn)行1~2 次常規(guī)修蹄。

    7.3 種公牛要經(jīng)常運(yùn)動(dòng),可加強(qiáng)肌肉、韌帶及骨骼的健康,保證公牛行動(dòng)活潑、性欲旺盛、精液品質(zhì)優(yōu)良、同時(shí)防止種公牛過肥。

    7.4 嚴(yán)格控制采精頻率,從而保證公牛的射精量和精子活力。

    7.5 夏季高溫高熱應(yīng)做好防暑降溫工作,科學(xué)養(yǎng)牛。C

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