• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    ‘保羅蘭’睡蓮花粉離體萌發(fā)及花粉管生長的研究

    2019-06-11 06:23:20毛立彥唐毓瑋謝振興龍凌云黃秋偉陸祖正於艷萍丁麗瓊
    西南農(nóng)業(yè)學報 2019年5期
    關鍵詞:亞屬花粉管睡蓮

    毛立彥,唐毓瑋,謝振興,龍凌云,黃秋偉,陸祖正,於艷萍,蘇 群,丁麗瓊*

    (1.廣西壯族自治區(qū)亞熱帶作物研究所,廣西 南寧 530001;2.廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學院 花卉研究所,廣西 南寧 530007)

    【研究意義】睡蓮NymphaeaL.是睡蓮科睡蓮屬植物的總稱,屬于多年生草本植物[1],花態(tài)多樣,花色艷麗,具有觀賞價值,主要用于城市水景綠化。睡蓮屬植物主要以生態(tài)學為基礎進行分類,可分為Nymphaea、Anecphya、Brachyceras、Hydrocallis、Lotos等5個亞屬[2-5]。其中,Brachyceras亞屬睡蓮的種、變種和栽培品種甚多[6],是重要的種質(zhì)資源,對其花粉的研究對雜交育種的成敗具有指導意義?!厩叭搜芯窟M展】Brachyceras亞屬睡蓮‘保羅蘭’Nymphaea‘Paul Stetson’適宜廣西的氣候環(huán)境,群體花期長達10個月以上,目前在廣西武宣縣小規(guī)模種植?;ǚ鄣幕盍κ侵富ǚ劬哂忻劝l(fā)和生長發(fā)育的能力[7-8],鑒定花粉生活力的方法主要有花粉離體培養(yǎng)法、染色法(如I2-KI染色、TTC染色),花粉離體培養(yǎng)法是最準確的鑒定花粉活力的方法[9-11]。關于睡蓮花粉離體培養(yǎng)的研究報道較少,趙其龍等[12]對Lotos亞屬的柔毛齒葉睡蓮花粉萌發(fā)的研究發(fā)現(xiàn),最適宜的離體培養(yǎng)基是60 mg/L蔗糖+15 mg/L H3BO3。5 %蔗糖+15 mg/L H3BO3+20 mg/L CaCl2+1 %瓊脂為Nynphaea亞屬睡蓮花粉離體萌發(fā)的最佳培養(yǎng)基[13]。楊夢飛等[14]采用離體培養(yǎng)法測定了不同亞屬睡蓮的花粉活力,其中埃及藍睡蓮(Brachyceras亞屬)在各個組分的培養(yǎng)液中均無法萌發(fā)。睡蓮花粉活力的研究可為睡蓮雜交親和性,新品種培育,基因庫的保存等研究提供參考依據(jù)[15-16]?!颈狙芯壳腥朦c】目前,有關測定‘保羅蘭’Nymphaea‘Paul Stetson’花粉在不同培養(yǎng)基中的萌發(fā)率和花粉管長度,觀測花粉管的生長過程的研究較少報道?!緮M解決的關鍵問題】旨在篩選出適宜Nymphaea‘Paul Stetson’睡蓮花粉萌發(fā)的培養(yǎng)基,為睡蓮的花粉活力檢測和的雜交育種的親本選擇提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    試驗材料為廣西壯族自治區(qū)亞熱帶作物研究所的睡蓮種質(zhì)資源圃的‘保羅蘭’睡蓮Nymphaea‘Paul Stetson’。

    1.2 試驗方法

    共種植‘保羅蘭’睡蓮25株,株距2 m,在花蕾時期做套袋處理,避免昆蟲攜帶花粉干擾試驗。‘保羅蘭’睡蓮具有早上綻放,夜間閉合的特性,花開后第2天再開時,于早上8:00-9:00采摘花粉成熟的花朵帶回實驗室內(nèi),從每朵花中選擇3枚成熟的花藥,將其中的花粉均勻抖落在干燥培養(yǎng)皿中并混勻,等待檢測。

    1.3 測定項目及方法

    1.3.1 離體培養(yǎng)基最佳組分 采用雙因素試驗篩選最佳培養(yǎng)基[17]。培養(yǎng)基用水為雙蒸餾水,蔗糖設置3個濃度梯度:0、100和200 g/L;H3BO3設置3個濃度梯度0、20和40 mg/L,共9個處理?;ǚ垭x體培養(yǎng)4 h后進行鏡檢,根據(jù)9個處理的培養(yǎng)基培養(yǎng)效果,確定蔗糖和H3BO3的較佳配比,在此基礎上分別加入0、20、60和100 mg/L的CaCl2,進一步對比花粉萌發(fā)率,探討CaCl2對花粉活力的影響,并篩選出最佳的培養(yǎng)基。

    1.3.2 花粉的收集與離體萌發(fā) 在含有700 μl液體培養(yǎng)基的1 mL離心管中加入適量新鮮花粉,置于30 ℃培養(yǎng)室中,光照條件下自然培養(yǎng)6 h,每隔1 h觀測1次。將離心管搖勻,用移液槍吸取50 μl花粉液滴在載玻片上,進行鏡檢。

    1.3.3 花粉萌發(fā)率統(tǒng)計以及花粉管長度測定 每個玻片隨機選取7個不重復的視野,每個視野花粉數(shù)量不少于40粒,以花粉管長度大于花粉粒直徑視為萌發(fā)。使用Image-Pro Plus 6.0進行花粉粒的計數(shù)以及測量花粉管的長度。

    萌發(fā)率(%)=(視野內(nèi)萌發(fā)花粉數(shù)/視野內(nèi)花粉總數(shù))×100

    1.3.4 花粉離體培養(yǎng)的最佳時間 鏡檢最佳培養(yǎng)基培養(yǎng)1、2、3、4、5和6 h的花粉,分析花粉萌發(fā)率和花粉管生長的趨勢,確立最佳的培養(yǎng)時間。

    1.4 統(tǒng)計分析

    試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2013 進行統(tǒng)計與制圖,采用SPSS 18.0進行雙因素方差分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同濃度的蔗糖和H3BO3對花粉離體萌發(fā)的影響

    9組花粉離體培養(yǎng)基的試驗結(jié)果如表1所示,花粉離體萌發(fā)率非常低,均不足10 %,在僅有蔗糖或僅有H3BO3處理的單因素作用下,花粉管生長有限,平均長度不足60 μm。100 g/L蔗糖+20 mg/LH3BO3的培養(yǎng)基中,睡蓮花粉的萌發(fā)率較高,達到8.34 %;100 g/L蔗糖+40 mg/L H3BO3的培養(yǎng)基中,睡蓮花粉管的平均長度較長,達到179.9 μm。

    表1 蔗糖和H3BO3對花粉萌發(fā)率和花粉管生長的影響

    表2 H3BO3和蔗糖的主體間效應檢驗結(jié)果

    表3 LSD比較結(jié)果(主效應Sucrose)

    注:*表示均值差值在0.05級別上顯著,**表示均值差值在0.01級別上顯著。

    Note:,* mean difference is significant at 0.05 level, ** mean difference is significant at 0.01 level.

    表4 LSD比較結(jié)果(主效應H3BO3)

    注:*表示均值差值在0.05級別上顯著,**表示均呈差值在0.01級別上顯著。

    Note: * mean difference is significant at 0.05 level, ** mean difference is significant at 0.01 level.

    采用SPSS 18.0進行不同濃度的蔗糖和H3BO3處理對花粉萌發(fā)率影響的雙因素方差分析,如表2所示,不同濃度的蔗糖或H3BO3處理對花粉的離體萌發(fā)存在極顯著的影響(P<0.01,下同),并且2個因素的交互作用極顯著。

    表5 H3BO3和CaCl2對花粉萌發(fā)率和花粉管生長的影響

    表6 H3BO3和CaCl2主體間效應檢驗結(jié)果

    再進一步采用LSD檢驗法進行多重比較,主效應分析結(jié)果表明,在試驗范圍內(nèi),100 g/L的蔗糖處理適宜花粉萌發(fā),與0及200 g/L的蔗糖處理之間均存在極顯著差異,200 g/L的蔗糖處理存在抑制作用(表3);0 mg/L H3BO3的處理與20、40 mg/L H3BO3的處理之間均存在極顯著差異,20與40 mg/L H3BO3的處理之間無顯著差異。H3BO3的加入能顯著促進花粉的萌發(fā),20和40 mg/L的H3BO3的處理均適宜睡蓮花粉的萌發(fā)(表4)。

    2.2 不同H3BO3和CaCl2的濃度對花粉萌發(fā)的影響

    根據(jù)蔗糖、H3BO3的主效應分析結(jié)果(表3、表4),進一步進行H3BO3和CaCl2處理的雙因素試驗,硼酸濃度設置2個水平:20、40 mg/L,CaCl2濃度設置4個水平:0(CK)、20、60及100 mg/L。試驗結(jié)果如表5所示。采用SPSS 18.0進行不同濃度的H3BO3和CaCl2處理對花粉萌發(fā)率影響的雙因素方差分析(表6),不同濃度的H3BO3或CaCl2處理對花粉的離體萌發(fā)存在極顯著的影響,并且兩個因素存在極顯著的交互作用。

    再進一步采用LSD檢驗法對不同濃度的CaCl2處理進行簡單的主效應分析(表7),在不同H3BO3濃度的水平上,對CaCl2進行簡單主效應分析,結(jié)果表明:CaCl2能促進花粉的萌發(fā),在試驗范圍內(nèi),20 mg/L的CaCl2處理較適宜花粉的離體萌發(fā),在不同濃度的H3BO3水平上,與0、60和100 mg/L的CaCl2的處理均存在極顯著的差異,在20 mg/L H3BO3的水平上,隨著CaCl2濃度的增高,促進花粉萌發(fā)的效果逐步減弱。

    2.3 離體萌發(fā)過程中花粉萌發(fā)率及花粉管長度的變化情況

    如圖1所示,花粉萌發(fā)率在1~4 h內(nèi)快速上升,從11.30 %±1.24 %上升至20.66 %±0.56 %,4~6 h時,萌發(fā)率相對平穩(wěn),維持在20 %左右?;ǚ酃艿钠骄L度在培養(yǎng)1~2 h時迅速增長,從97.84 μm上升至145.22 μm,2~4 h時,花粉管平均長度不變,4 h以后花粉管平均長度略有下降。綜上所述,最佳的鏡檢時間可以設置為4 h。

    表7 LSD比較結(jié)果(主效應CaCl2)

    注:CaCl2單位為mg/L,*表示均值差值在0.05級別上較顯著,**表示均呈差值在0.01級別上顯著。

    Note: CaCl2unit mg/L, * means that difference is significant at 0.05 level, ** means that difference is significant at 0.01 level.

    圖1 培養(yǎng)時間對花粉萌發(fā)和花粉管生長的影響Fig.1 Effect of culture times on pollen germination and pollen tube growth

    在鏡檢中觀察到,睡蓮的花粉粒呈圓形(圖2-a),直徑大約25~50 μm,一粒睡蓮花粉通常只萌發(fā)出一束花粉管(圖2-b)。萌發(fā)的初始階段,花粉粒的一側(cè)會凸起,突起物透明(圖2-c)。隨后突起部位不斷伸長,形成花粉管。隨著花粉管的伸長,花粉粒中的內(nèi)含物逐步進入花粉管,花粉管漸漸填充滿內(nèi)含物(圖2-d)。在下一個階段的生長過程中,內(nèi)含物均勻分布在花粉粒和花粉管之中,此外還會出現(xiàn)以下幾種情況;花粉粒變透明,花粉管中部和末端充滿內(nèi)含物;內(nèi)含物分別集中分布在花粉管各個部分,透明與不透明的部分界限鮮明(圖2-f)。此外,花粉萌發(fā)過程中,花粉管還會出現(xiàn)細小、扭曲的現(xiàn)象(圖2-e)。

    3 討 論

    3.1 培養(yǎng)基組分和花粉萌發(fā)及花粉管生長的關系

    適宜濃度的蔗糖對睡蓮花粉萌發(fā)有明顯的促進作用,蔗糖是花粉萌發(fā)和花粉管生長主要的營養(yǎng)物質(zhì),同時也是花粉代謝和跨膜運輸?shù)奶荚碵18]。10 %的蔗糖能有效促睡蓮花粉萌發(fā),過高濃度會產(chǎn)生抑制。楊夢飛等[14]的研究也得到同樣的結(jié)果,10 %的蔗糖濃度適用于睡蓮花粉的離體培養(yǎng)。李佛蓮等[8]對山玉蘭花粉的研究表明,蔗糖濃度高于10 %會抑制山玉蘭花粉的萌發(fā),5 %蔗糖是最適宜耐寒睡蓮花粉萌發(fā)的濃度。鄧衍明等[20]的研究表明,在BK培養(yǎng)基[19]中添加8 %蔗糖最適宜花粉管的萌發(fā),而薄殼山核桃花粉萌發(fā)的最佳蔗糖濃度為20 %~30 %[18]。因此,不同植物的花粉離體萌發(fā)適宜的蔗糖濃度不同,這可能與不同植物花粉對蔗糖濃度形成的滲透壓的適應能力不同有關。在今后的睡蓮花粉研究中,可以將試驗對象擴展至其它亞屬的睡蓮花粉,以進一步探討不同亞屬的睡蓮花粉對蔗糖濃度的適應能力的差異性。

    a.睡蓮花粉在蒸餾水中培養(yǎng)4 h的狀態(tài);b.睡蓮花粉在培養(yǎng)基中培養(yǎng)4 h的狀態(tài);c.睡蓮花粉萌發(fā)的初始階段;d.睡蓮花粉管開始伸長,內(nèi)含物質(zhì)進入花粉管;e.花粉管扭曲異常;f.花粉管伸長后,內(nèi)含物在花粉管的分布情況a. The condition of pollen in distilled water for 4 hours; b. The condition of pollen in medium for 4 hours; c. The initial stage of pollen germination; d. pollen tube begins to elongate and inclusion enters pollen tube; e. Abnormal distortion of pollen tube; f. Distribution of inclusions in pollen tube after elongation of pollen tube 圖2 花粉萌發(fā)及花粉管生長的動態(tài)變化Fig.2 The dynamic changes of pollen germination and pollen tube growth

    H3BO3能刺激并增加花粉對糖類的吸收、運轉(zhuǎn)和代謝[21],參與花粉管頂端細胞壁合成,對花風管中果膠的合成有著重要作用[22],使酸性果膠轉(zhuǎn)變呈酯化果膠,而酯化果膠存在于花粉管頂端,有助于提高花粉管頂端的延展性[8]。硼離子對質(zhì)外體結(jié)合鈣離子和游離鈣離子有影響,可以增加細胞內(nèi)的游離鈣離子,使其達到啟動花粉萌發(fā)的最佳濃度[23]。硼離子的加入能有效促進Nymphaea‘Paul Stetson’睡蓮花粉的萌發(fā)和花粉管的生長,20 mg/L的硼離子更適宜睡蓮花粉的萌發(fā),在10 %蔗糖+20 mg/L CaCl2的基礎上,花粉萌發(fā)率達到20.66 %。

    Ca2+是花粉萌發(fā)、花粉管生長不可缺少的,外源施加的Ca2+能促進花粉的萌發(fā)[23],Bednarska[24]通過在培養(yǎng)基中加入Ca2+通道阻塞劑發(fā)現(xiàn)花粉萌發(fā)受到抑制,證明了Ca2+對花粉萌發(fā)的影響。楊夢飛等[14]的試驗中,培養(yǎng)基未加入Ca2+,除埃及白睡蓮外,其余睡蓮花粉萌發(fā)率均不到10 %,這與本試驗的結(jié)果較一致。在濃度適宜的蔗糖、H3BO3的培養(yǎng)基中,補充少量的外源Ca2+能顯著提高Nymphaea‘Paul Stetson’睡蓮花粉的萌發(fā)率,過高的Ca2+會造成Ca2+中毒,反而抑制花粉的萌發(fā)[25]。龔明和曹宗巽[26]研究結(jié)果認為,Ca2+能啟動花粉萌發(fā)和調(diào)節(jié)花粉管生長。本研究結(jié)果表明,Nymphaea‘Paul Stetson’睡蓮花粉在缺少Ca2+的培養(yǎng)基中,萌發(fā)率非常低,隨著Ca2+的加入,萌發(fā)率大幅度提高。

    3.2 花粉管的生長情況

    4 h以前,睡蓮花粉萌發(fā)率會隨著培養(yǎng)時間顯著增加,4 h以后趨于穩(wěn)定,花粉管長度在培養(yǎng)2 h以前迅速增加,2 h后達到一個相對穩(wěn)定的水平,此結(jié)果與楊夢飛等[14]的研究結(jié)果基本一致。

    試驗中所觀察到的睡蓮花粉?;蚧ǚ酃苤械膬?nèi)含物質(zhì)可能是生殖核及營養(yǎng)核或微絲骨架[27]。游韓莉等[28]研究發(fā)現(xiàn)花粉在離體萌發(fā)過程中,營養(yǎng)核和生殖核會陸續(xù)進入到花粉管內(nèi),微絲骨架排列與花粉細胞核的移動存在一定的關系,隨著花粉的萌發(fā),微絲骨架逐漸聚集,推動營養(yǎng)核和生殖核向花粉管內(nèi)移動?;ǚ酃苤械募毎诵袨榧盎ǚ酃軆?nèi)的微絲骨架的分布是一個復雜的過程[29],對此次試驗中觀察到的花粉中的內(nèi)含物質(zhì)需要進一步進行熒光標記,才能進行更準確和深入的研究分析。

    4 結(jié) 論

    最適合‘保羅蘭’睡蓮的花粉離體萌發(fā)的培養(yǎng)基為10 %蔗糖+20 mg/L或40 mg/L H3BO3+20 mg/L CaCl2,花粉離體萌發(fā)率為15.76 %~20.66 %,花粉管生長長度為139.28~141.11 μm,最佳鏡檢時間為4 h。

    猜你喜歡
    亞屬花粉管睡蓮
    Nadorcott 柑桔無核化處理對組培花粉管生長的影響
    你好,睡蓮
    睡蓮盛放
    中國慈善家(2021年5期)2021-11-19 18:38:58
    細胞質(zhì)膜AHAs維持花粉管的生長和受精(2020.5.20 Plant Biotechnology Journal)
    庫蠓屬6亞屬翅形變化分析與親緣關系
    睡蓮
    藍豬耳花粉管在雌蕊生長途徑中鈣的分布特征
    生物學雜志(2018年4期)2018-08-15 11:21:32
    睡蓮
    睡蓮5個亞屬花、葉、塊莖和基因組大小比較
    重金屬對梨花粉萌發(fā)及生長有影響
    中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产亚洲精品一区二区www| 日本wwww免费看| 中国美女看黄片| 亚洲熟妇熟女久久| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲精品国产区一区二| av电影中文网址| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 女人被狂操c到高潮| bbb黄色大片| 日韩大码丰满熟妇| 真人一进一出gif抽搐免费| 午夜福利免费观看在线| 十八禁网站免费在线| 在线永久观看黄色视频| 丁香欧美五月| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久香蕉精品热| 国产成+人综合+亚洲专区| 中文字幕av电影在线播放| 女人被狂操c到高潮| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 69精品国产乱码久久久| 制服诱惑二区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 久久久精品欧美日韩精品| 成年人免费黄色播放视频| 深夜精品福利| 一进一出好大好爽视频| 久久狼人影院| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲成人免费av在线播放| 97碰自拍视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 女同久久另类99精品国产91| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 老司机在亚洲福利影院| 欧美乱色亚洲激情| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 桃色一区二区三区在线观看| 一级,二级,三级黄色视频| 日韩人妻精品一区2区三区| 满18在线观看网站| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲avbb在线观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 在线观看舔阴道视频| 精品国产亚洲在线| 国产在线观看jvid| 午夜免费观看网址| 日韩视频一区二区在线观看| 1024视频免费在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 国产精品一区二区免费欧美| 欧美不卡视频在线免费观看 | 黄色视频不卡| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 在线视频色国产色| 在线观看一区二区三区激情| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久久久亚洲av毛片大全| 成人国产一区最新在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 免费在线观看影片大全网站| 黄色 视频免费看| 少妇粗大呻吟视频| 国产成人欧美| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲国产看品久久| 午夜福利欧美成人| 亚洲成人精品中文字幕电影 | av在线天堂中文字幕 | 久久精品亚洲av国产电影网| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲五月天丁香| 国产精品成人在线| 国产av又大| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产成人av教育| 成年女人毛片免费观看观看9| 精品日产1卡2卡| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 男女高潮啪啪啪动态图| 制服人妻中文乱码| 国产激情欧美一区二区| 窝窝影院91人妻| 中文字幕高清在线视频| 脱女人内裤的视频| 色综合婷婷激情| 国产熟女xx| 亚洲专区字幕在线| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 手机成人av网站| 国产精品亚洲一级av第二区| 黄色 视频免费看| 国产亚洲精品第一综合不卡| 搡老岳熟女国产| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产亚洲欧美在线一区二区| 91av网站免费观看| 亚洲五月天丁香| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产av精品麻豆| 极品教师在线免费播放| 成在线人永久免费视频| 免费在线观看完整版高清| 长腿黑丝高跟| 男女床上黄色一级片免费看| 黑丝袜美女国产一区| 日韩视频一区二区在线观看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 久久精品人人爽人人爽视色| 99国产综合亚洲精品| 高清黄色对白视频在线免费看| 69av精品久久久久久| 青草久久国产| 欧美日韩视频精品一区| 首页视频小说图片口味搜索| 正在播放国产对白刺激| 韩国av一区二区三区四区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲av成人一区二区三| 国产成+人综合+亚洲专区| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 免费日韩欧美在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 亚洲精品在线美女| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 91麻豆精品激情在线观看国产 | 亚洲精品国产一区二区精华液| 高清av免费在线| 国产av一区在线观看免费| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 看黄色毛片网站| 又黄又粗又硬又大视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 99re在线观看精品视频| 久久久国产欧美日韩av| 精品一区二区三卡| 岛国视频午夜一区免费看| 黄色视频,在线免费观看| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 精品免费久久久久久久清纯| 久久精品成人免费网站| 午夜精品久久久久久毛片777| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 美女扒开内裤让男人捅视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 午夜日韩欧美国产| 欧美人与性动交α欧美软件| 欧美日韩av久久| 自线自在国产av| 波多野结衣高清无吗| 亚洲自拍偷在线| 久久中文看片网| 亚洲av电影在线进入| 亚洲黑人精品在线| 99国产综合亚洲精品| 757午夜福利合集在线观看| 国产欧美日韩一区二区三| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲黑人精品在线| 国产有黄有色有爽视频| 老鸭窝网址在线观看| 后天国语完整版免费观看| 久久这里只有精品19| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久青草综合色| 搡老熟女国产l中国老女人| 曰老女人黄片| 18禁观看日本| 国产主播在线观看一区二区| 一进一出好大好爽视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产精品av久久久久免费| 丝袜人妻中文字幕| 男人操女人黄网站| 少妇的丰满在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 水蜜桃什么品种好| av天堂在线播放| 欧美午夜高清在线| 极品教师在线免费播放| 18美女黄网站色大片免费观看| 一级作爱视频免费观看| 久久久国产一区二区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 9色porny在线观看| 成人精品一区二区免费| 曰老女人黄片| 国产99白浆流出| 在线观看免费视频日本深夜| 久久久久亚洲av毛片大全| 久热这里只有精品99| 99国产综合亚洲精品| 成人黄色视频免费在线看| 国产精品 欧美亚洲| 日韩大尺度精品在线看网址 | 国产精品久久久久成人av| 妹子高潮喷水视频| 久久亚洲精品不卡| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产麻豆69| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲国产精品合色在线| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 淫秽高清视频在线观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 十分钟在线观看高清视频www| 国产在线精品亚洲第一网站| 曰老女人黄片| 亚洲美女黄片视频| 亚洲av成人av| 麻豆av在线久日| 热99re8久久精品国产| 高潮久久久久久久久久久不卡| 热99国产精品久久久久久7| 国产亚洲av高清不卡| 搡老岳熟女国产| 天天添夜夜摸| 一区在线观看完整版| 亚洲成国产人片在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久香蕉精品热| 国产又色又爽无遮挡免费看| 99精国产麻豆久久婷婷| 久久久国产成人免费| 免费av中文字幕在线| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 男人操女人黄网站| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 精品国产国语对白av| 黄色 视频免费看| 他把我摸到了高潮在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产精品久久久av美女十八| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 日日夜夜操网爽| 成人特级黄色片久久久久久久| 一区二区日韩欧美中文字幕| 极品教师在线免费播放| 久99久视频精品免费| 黑人欧美特级aaaaaa片| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 美女大奶头视频| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 久久久久九九精品影院| 国产片内射在线| 欧美日韩av久久| 国产成人系列免费观看| 成人免费观看视频高清| 久久久国产成人免费| 9色porny在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 一a级毛片在线观看| www.999成人在线观看| 亚洲精华国产精华精| 午夜成年电影在线免费观看| 国产成+人综合+亚洲专区| 成人国产一区最新在线观看| 十八禁网站免费在线| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲国产精品999在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 欧美久久黑人一区二区| 丰满饥渴人妻一区二区三| 免费av毛片视频| 一级,二级,三级黄色视频| 精品欧美一区二区三区在线| 精品久久久精品久久久| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲久久久国产精品| 青草久久国产| 9色porny在线观看| 午夜两性在线视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 老司机福利观看| 精品福利观看| 在线观看一区二区三区| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 黑丝袜美女国产一区| 操美女的视频在线观看| 国产1区2区3区精品| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 老司机在亚洲福利影院| 99re在线观看精品视频| av超薄肉色丝袜交足视频| 国产精品永久免费网站| 日韩精品中文字幕看吧| 国产成人系列免费观看| 精品福利永久在线观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 不卡av一区二区三区| 国产又爽黄色视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲av电影在线进入| 操出白浆在线播放| 精品久久久久久久久久免费视频 | 国产av一区二区精品久久| cao死你这个sao货| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 村上凉子中文字幕在线| 日本免费a在线| 极品人妻少妇av视频| 看片在线看免费视频| 日韩免费av在线播放| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久久久久九九精品影院| 国产人伦9x9x在线观看| 国产亚洲av高清不卡| 在线免费观看的www视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| av视频免费观看在线观看| 国产成人精品无人区| 桃色一区二区三区在线观看| 超碰成人久久| 久久亚洲精品不卡| 久久久久九九精品影院| 久久人妻av系列| 成人特级黄色片久久久久久久| 欧美黑人欧美精品刺激| 91国产中文字幕| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 久久久久久大精品| 女警被强在线播放| 亚洲欧美一区二区三区久久| 久久欧美精品欧美久久欧美| 色综合站精品国产| 人人妻人人澡人人看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产一区在线观看成人免费| 国产精品久久视频播放| 国产精品电影一区二区三区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 91av网站免费观看| 黄色丝袜av网址大全| 国产一区二区三区视频了| 久久精品人人爽人人爽视色| 日本vs欧美在线观看视频| 热99国产精品久久久久久7| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 一区在线观看完整版| 99国产精品99久久久久| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久99久视频精品免费| 亚洲av成人一区二区三| 久久狼人影院| av超薄肉色丝袜交足视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久久久亚洲av毛片大全| 亚洲av熟女| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产有黄有色有爽视频| 十八禁人妻一区二区| xxxhd国产人妻xxx| 韩国精品一区二区三区| 亚洲一码二码三码区别大吗| www.熟女人妻精品国产| 免费在线观看影片大全网站| 免费观看人在逋| 久久影院123| 午夜免费成人在线视频| av网站免费在线观看视频| 国产成人av激情在线播放| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 精品免费久久久久久久清纯| 色尼玛亚洲综合影院| 国产精品综合久久久久久久免费 | 久久欧美精品欧美久久欧美| 18禁美女被吸乳视频| 伦理电影免费视频| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲av电影在线进入| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久人妻熟女aⅴ| av天堂久久9| 嫩草影视91久久| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲情色 制服丝袜| 精品人妻1区二区| 免费看十八禁软件| 在线国产一区二区在线| 亚洲第一av免费看| 久久九九热精品免费| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲免费av在线视频| 亚洲五月色婷婷综合| 久久久久久久午夜电影 | 丝袜在线中文字幕| 亚洲七黄色美女视频| 国产激情欧美一区二区| 男女下面进入的视频免费午夜 | 久久青草综合色| 国产深夜福利视频在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 国产高清国产精品国产三级| av天堂在线播放| 久久精品成人免费网站| 看片在线看免费视频| 国产真人三级小视频在线观看| 国产精华一区二区三区| 香蕉久久夜色| 久久天堂一区二区三区四区| 国产麻豆69| 久久香蕉精品热| 黄频高清免费视频| 91老司机精品| 99国产极品粉嫩在线观看| 18美女黄网站色大片免费观看| 一区二区三区国产精品乱码| 一区二区日韩欧美中文字幕| 最新在线观看一区二区三区| 成人av一区二区三区在线看| 一级,二级,三级黄色视频| 色尼玛亚洲综合影院| 男男h啪啪无遮挡| 18禁国产床啪视频网站| 操美女的视频在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 免费观看人在逋| 麻豆一二三区av精品| 免费在线观看完整版高清| 大码成人一级视频| 久久久久久人人人人人| 国产成人影院久久av| 成人永久免费在线观看视频| 岛国视频午夜一区免费看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲av熟女| 看黄色毛片网站| 国产精品免费一区二区三区在线| 精品欧美一区二区三区在线| 悠悠久久av| 一边摸一边抽搐一进一小说| 老司机亚洲免费影院| 淫秽高清视频在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 男女下面进入的视频免费午夜 | 国产精品乱码一区二三区的特点 | 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲欧美精品综合久久99| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久精品亚洲av国产电影网| 女性被躁到高潮视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲精品国产色婷婷电影| 精品久久久久久,| 成人手机av| 麻豆成人av在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 一区二区三区国产精品乱码| 在线免费观看的www视频| 欧美中文综合在线视频| 99国产极品粉嫩在线观看| av福利片在线| 国产99白浆流出| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 亚洲av美国av| 国产精品永久免费网站| 国产xxxxx性猛交| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲成人免费电影在线观看| 交换朋友夫妻互换小说| 国产伦一二天堂av在线观看| 久久香蕉国产精品| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 90打野战视频偷拍视频| 日日夜夜操网爽| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 久久伊人香网站| 久久狼人影院| 成年女人毛片免费观看观看9| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美乱码精品一区二区三区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产一区二区三区综合在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 在线观看一区二区三区| 精品日产1卡2卡| 免费少妇av软件| 国产97色在线日韩免费| 亚洲伊人色综图| 精品熟女少妇八av免费久了| 麻豆久久精品国产亚洲av | 水蜜桃什么品种好| 最近最新中文字幕大全免费视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 俄罗斯特黄特色一大片| 黑人操中国人逼视频| 大陆偷拍与自拍| 精品久久久精品久久久| 国产免费现黄频在线看| 免费观看精品视频网站| 一二三四社区在线视频社区8| 午夜免费鲁丝| 亚洲久久久国产精品| 看免费av毛片| 国产黄a三级三级三级人| 日韩大尺度精品在线看网址 | 美女高潮到喷水免费观看| 一级毛片女人18水好多| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产精品一区二区免费欧美| 精品国产美女av久久久久小说| 黑人猛操日本美女一级片| 国产主播在线观看一区二区| 日本三级黄在线观看| 精品国产美女av久久久久小说| 久久伊人香网站| 欧美午夜高清在线| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| www.精华液| 精品国产美女av久久久久小说| 成人影院久久| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲情色 制服丝袜| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 精品久久久久久久久久免费视频 | 国产成人影院久久av| 久久香蕉精品热| 国产av又大| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 18禁观看日本| 热99re8久久精品国产| av中文乱码字幕在线| e午夜精品久久久久久久| 在线视频色国产色| 99久久综合精品五月天人人| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久精品国产清高在天天线| 天堂影院成人在线观看| 午夜福利一区二区在线看| 夫妻午夜视频| 午夜免费观看网址| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲熟妇熟女久久| 一区二区三区国产精品乱码| 国产免费现黄频在线看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 免费日韩欧美在线观看| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 青草久久国产| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 无人区码免费观看不卡| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久久国产成人精品二区 | 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲成人免费av在线播放| 高清av免费在线| 亚洲精品一二三| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 久久精品影院6| 精品卡一卡二卡四卡免费| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| www日本在线高清视频| 1024视频免费在线观看| 不卡一级毛片| 午夜老司机福利片| 天天影视国产精品| 搡老乐熟女国产| 国产午夜精品久久久久久| 咕卡用的链子| 大型av网站在线播放| 麻豆成人av在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产深夜福利视频在线观看| 性少妇av在线| avwww免费| 久久影院123| 五月开心婷婷网| 欧美性长视频在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看 |