實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)對(duì)結(jié)核的診斷價(jià)值

陳啟斌

（云南省昭通市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 云南 昭通 657000）

在我國(guó)當(dāng)前臨床中，對(duì)結(jié)核病患者的早期臨床診斷，所主要使用的方法以及病原菌的陽(yáng)性診斷率存在較大不同。實(shí)時(shí)熒光定量檢驗(yàn)診斷方法，整體操作相對(duì)較為簡(jiǎn)單，且具備較高的靈敏度[1]。由此本次研究回顧性分析本院80例結(jié)核病患者，探討實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)診斷結(jié)核病患者臨床價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析于2018年1月—12月期間本院收治的80例結(jié)核病患者作為本次研究對(duì)象，所有患者的年齡均為22～65歲，平均年齡為（45.29±3.24）歲，包括48例男性患者和32例女性患者，所有患者的病程均為0.3個(gè)月～8個(gè)月，平均病程為（3.5±0.8）個(gè)月。所有納入本次研究的患者均符合結(jié)核病的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，且排除存在心臟、肝腎系統(tǒng)類重要器官病癥的患者。

1.2 方法

對(duì)患者行實(shí)時(shí)熒光定量檢查以及涂片抗酸染色法檢查。

實(shí)時(shí)熒光定量檢驗(yàn)方法：首先完成對(duì)患者DNA的提取，使用醫(yī)用試管將患者的痰液標(biāo)本收集之后，在標(biāo)本中加入濃度為4%的NaOH，搖晃試管直至均勻放置常溫下20min。等待患者的痰液標(biāo)本產(chǎn)生了相應(yīng)的液化，將1ml的混合液完成5min的離心處理，之后去除上清液，將離心管內(nèi)部的沉淀物質(zhì)取出。之后在其中加入1ml的生理鹽水完成5Min的再次離心，將沉淀物取出之后，將其中加入50l的DNA提取液，搖晃均勻置于100℃環(huán)境中10min，再次完成5min的離心，放置零下20℃待檢測(cè)。

其次就是完成PCR檢測(cè)，通過取出如上等同的患者痰液樣品，完成上清液去除之后，添加2l置于PCR反應(yīng)管內(nèi)部，完成1min的離心。將其放置于儀器的樣品槽內(nèi)部，處于93℃置于2min，處于55℃以下至45s，然后置于65℃以下1min，來回循環(huán)10次。將其放置于儀器的樣品槽內(nèi)部，在93℃以下放置30s至55℃以下45s時(shí)間，來回循環(huán)30次。完成陰性質(zhì)控品的陽(yáng)性定量參考，通過依照FQ-PCR的軟件闕值，從中得出呈現(xiàn)對(duì)比增長(zhǎng)的數(shù)值擴(kuò)增曲線。如果該條曲線的Ct數(shù)值在36以下即為陽(yáng)性，反之如果超出40即為陰性。如果曲線Ct數(shù)值處于36～40之間，則完成重復(fù)檢測(cè)之后仍然處于36～40之間，那么判斷結(jié)果是陰性。

涂片抗酸染色法檢查：通過將患者的痰液標(biāo)本涂片進(jìn)行收集之后，等待其干燥后固定實(shí)施Z-N染色，之后靜待染色結(jié)果。陰性片標(biāo)準(zhǔn)為：必須瀏覽300個(gè)視野，未檢出抗酸桿菌。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

通過使用SPSS18.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，通過使用χ2檢驗(yàn)，以樣本值的P＜0.05代表存在顯著差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

通過對(duì)患者行涂片抗酸染色法檢測(cè)，陽(yáng)性檢測(cè)共計(jì)為33例41.25%，對(duì)患者行實(shí)時(shí)熒光定量檢驗(yàn)，陽(yáng)性檢測(cè)共計(jì)為69例86.25%，實(shí)時(shí)熒光定量檢驗(yàn)診斷方法檢驗(yàn)率，相較涂片抗酸染色法檢測(cè)明顯較高（P＜0.05）。并且實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)診斷方法的靈敏度診斷率達(dá)到了76例95.00%，而涂片抗酸染色法檢測(cè)靈敏度則僅為68例85.00%，靈敏度診斷率同樣存在顯著差異（P＜0.05），見表。

表 患者檢測(cè)指標(biāo)對(duì)比相較[n（%）]

3.討論

結(jié)核病在當(dāng)前臨床醫(yī)學(xué)中屬于一種，由于患者發(fā)聲結(jié)核分枝桿菌所誘發(fā)的病癥，該病屬于傳染性疾病，尤為常見的病癥就是肺結(jié)核病。該病主要的傳染途徑就是呼吸道感染，通常以唾液、飛沫的傳染方式尤為常見。在我國(guó)當(dāng)前主要是依照患者的既往病史、影像學(xué)檢查以及實(shí)驗(yàn)室檢查等方法[2-3]，完成對(duì)該病的臨床綜合性判斷。實(shí)驗(yàn)室的具體檢查方法相對(duì)較多，可以通過使用痰標(biāo)本培養(yǎng)、痰液涂片抗酸染色法以及本次研究所使用的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)診斷方法。而實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)診斷方法，是現(xiàn)如今臨床中所新興的一種診斷方法，具備了較為簡(jiǎn)單的手術(shù)操作特點(diǎn)，同時(shí)還能夠確保診斷方法的高效性。通常要想完成這一實(shí)驗(yàn)過程，往往需要在3h之內(nèi)就可以全部完成，很大程度的將患者的實(shí)驗(yàn)室檢查所耗費(fèi)時(shí)間有所減短，提高了整體的診斷效率。

綜上所述，結(jié)合本次研究結(jié)果可知：通過對(duì)結(jié)核病患者行實(shí)時(shí)熒光定量檢驗(yàn)方法診斷，可以取得顯著的診斷率，具備較高的靈敏性和特異度，可以及早為結(jié)核病患者的早期治療提供臨床依據(jù)，在一定程度上對(duì)患者的治療預(yù)后起到直接影響，可以在臨床中推廣應(yīng)用。