誘導(dǎo)痰細(xì)胞計(jì)數(shù)在慢性阻塞性肺疾病急性加重患者中的臨床價(jià)值

段生琛 范國輝 高 揚(yáng) 朱光發(fā)

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是以持續(xù)性氣流受限為主要特征的常見呼吸系統(tǒng)疾病。感染是引起慢性阻塞性肺疾病加重的重要原因之一，而中性粒細(xì)胞聚集及活化是慢性氣道炎癥的重要環(huán)節(jié)。誘導(dǎo)痰細(xì)胞分類檢測具有無創(chuàng)、安全、可靠和操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，是反映氣道炎癥狀態(tài)和評估藥物治療效果的重要手段。本研究旨在通過分析慢性阻塞性肺疾病急性期（acute exacerbation chronic obstructive pulmonary disease，AECOPD）患者誘導(dǎo)痰細(xì)胞學(xué)分類情況，觀察不同病因的氣道炎癥患者痰中細(xì)胞分類的變化。

資料與方法

1.研究對象 收集2017年5月至2018年3月，就診于我院呼吸科門診收入院的確診AECOPD患者共37例。其中男性共25例，女性12例，平均年齡59歲。其診斷符合2014年AECOPD診治中國專家共識[1]，無合并其他呼吸系統(tǒng)疾病。所有入選患者均簽署知情同意書。

2.誘導(dǎo)痰及痰液處理方法 （1）誘導(dǎo)痰：①誘導(dǎo)前10 min讓患者吸入喘樂寧（沙丁胺醇?xì)忪F劑）；②向患者詢問癥狀、肺功能（通氣和激發(fā)實(shí)驗(yàn)）結(jié)果及詳細(xì)解釋檢測步驟和注意事項(xiàng)l③讓患者用清水漱口、擤鼻；④超聲霧化儀以4.5%的高滲氯化鈉液為患者霧化，每隔5 min休息一下；⑤患者用清水漱口，將唾液盡量吐盡，咳出痰液至消毒平皿；⑥誘導(dǎo)過程如果痰量達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)（標(biāo)本痰量＞0.3 g，口腔上皮細(xì)胞比例＜5%）或累計(jì)時(shí)間達(dá)30 min，均可終止誘導(dǎo)；⑦在誘導(dǎo)期間須動(dòng)態(tài)觀察患者是否有氣促、胸悶以及呼吸困難等不適癥狀，并向患者詢問，以確定是否繼續(xù)。

（2）痰液處理：①用平口鑷挑選痰栓或痰的黏稠部分放入塑料試管中；②加入痰液4倍體積的0.1%DTT（二硫代蘇糖醇），充分混勻痰混合物（可用漩渦震蕩器震蕩數(shù)秒，忌震蕩時(shí)間過長破壞細(xì)胞）；③37℃電熱恒溫水箱水浴15～30 min，其間適當(dāng)手動(dòng)震蕩加速痰液混勻（2～3次）；④用尼龍濾網(wǎng)（300目）過濾痰混勻液；⑤將痰濾液2 000 r/min，離心7 min；⑥倒去上清，震蕩器混勻試管中剩余沉渣，手動(dòng)涂片，風(fēng)干；⑦涂片行瑞氏-姬姆薩染色：染液A染色60 s，加入B液，洗耳球緩慢吹勻，染色2 min，清水緩慢沖洗，風(fēng)干。油鏡鏡下對400個(gè)非上皮細(xì)胞進(jìn)行分類。計(jì)數(shù)400個(gè)以上非上皮細(xì)胞進(jìn)行分類。

3.實(shí)驗(yàn)方法 收集患者基本信息，以及血常規(guī)、FENO、IgE、肺功能等指標(biāo)。將誘導(dǎo)痰結(jié)果分為4類[2-4]，第一類為單純中性粒細(xì)胞為主型，定義為中性粒細(xì)胞百分比≥60%，同時(shí)滿足嗜酸粒細(xì)胞百分比＜3%；第二類為單純嗜酸粒細(xì)胞為主型，定義為嗜酸粒細(xì)胞百分比≥3%，同時(shí)滿足中性粒細(xì)胞百分比＜60%；第三類為混合型，中性粒細(xì)胞百分比≥60%且嗜酸粒細(xì)胞百分比≥3%；第四類為其他類型，即中性粒細(xì)胞百分比＜60%且嗜酸粒細(xì)胞百分比＜3%。比較各類型患者的各項(xiàng)指標(biāo)區(qū)別。

4.統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)采用雙人雙錄入并使用SPSS 22.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間均數(shù)比較行方差分析，組間兩兩比較采用LSD法；非連續(xù)性變量用例數(shù)（百分比）表示，檢驗(yàn)使用卡方檢驗(yàn)或Fisher精確概率法；痰細(xì)胞計(jì)數(shù)與肺功能的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1.我們共對37例患者進(jìn)行了痰誘導(dǎo)，成功率100%。中性粒細(xì)胞為主型患者共24例，占64.9%；嗜酸粒細(xì)胞為主型共5例，占11%；混合型患者共18例，占38%；其他型患者0例。表1可看出，三組之間基本信息，包括年齡、性別、近1年內(nèi)吸煙、過去1年內(nèi)住院次數(shù)，以及發(fā)病天數(shù)、入院前是否使用抗菌藥物、規(guī)律吸入激素患者比例均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1）。

表1 三組患者基本信息比較[，n（%）]

表1 三組患者基本信息比較[，n（%）]

項(xiàng)目中性粒細(xì)胞為主型（n=24）嗜酸粒細(xì)胞為主型（n=5）混合型（n=8） P值年齡/歲 59.33±4.1 60.4±5.2 57.13±8.3 0.050男性 19（79.2） 2（40.0） 4（50.0） 0.115 BMI/（kg/cm2） 23.57±0.86 24.44±2.07 24.79±1.90 0.254近1年內(nèi)吸煙 6（25） 3（60.0） 2（25.0） 0.281過去1年內(nèi)住院次數(shù) 2.0±0.181 1.8±0.2 1.75±0.164 0.228發(fā)病天數(shù)/d 17.29±4.08 21.6±10.1 8.4±2.21 0.387入院前應(yīng)用過抗生素 22（91.7） 4（80.0） 6（75.0） 0.442規(guī)律吸入激素 12（50.0） 1（20.0） 5（62.5） 0.321

2.實(shí)驗(yàn)室指標(biāo) 三組間噬酸性粒細(xì)胞總數(shù)差異較大，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）。進(jìn)一步分析顯示，嗜酸粒細(xì)胞為主型和混合型的噬酸性粒細(xì)胞總數(shù)均顯著高于中性粒細(xì)胞為主型的患者（均P＜0.01）。白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比、HGB、PLT及IgE在三組之間均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表2）。

3.37例患者的誘導(dǎo)痰嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)百分比及痰中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)百分比與肺功能相關(guān)性分析痰中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)百分比與FEV1%呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.377，P=0.025），說明患者的FEV1%隨著痰中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)百分比升高而降低；痰嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)百分比與患者吸入支氣管擴(kuò)張劑后改善率呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.411，P=0.007），提示肺功能的改善率隨痰嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)百分比升高而降低。其他未見顯著關(guān)聯(lián)（表3）。

表2 三組實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)比較（）

表2 三組實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)比較（）

項(xiàng)目中性粒細(xì)胞為主型（n=24）嗜酸粒細(xì)胞為主型（n=5）混合型（n=8） P值WBC/（×109/L） 7.44±0.78 6.57±0.51 7.15±0.65 0.616 NEU/（×109/L） 5.25±0.73 3.83±0.40 4.74±0.61 0.632 EO/（×109/L） 0.15±0.03 0.46±0.08 0.46±0.14 0.001 HB/（G/L） 135.3±2.9 144.0±5.6 132.3±11.0 0.542 PLT/（×109/L） 245.8±15.2 207.2±13.1 259.4±18.4 0.382總IgE/（IU/mL） 83.3±33.5 95.0±61.8 588.4±451.0 0.594 FENO/（ppb） 27.42±3.61 14.00±5.03 45.50±15.06 0.142

表3 肺功能與37例患者的誘導(dǎo)痰細(xì)胞計(jì)數(shù)百分比相關(guān)分析

討論

AECOPD最常見的原因是上呼吸道病毒感染和氣管-支氣管感染，其發(fā)病與氣道炎癥加重有關(guān)。氣道炎癥最終導(dǎo)致氣道壁組織結(jié)構(gòu)破壞增厚、基底膠原沉積、平滑肌增生肥大、分泌物閉塞氣道等病理改變。目前臨床上單純依靠癥狀、肺功能來對氣道炎癥的種類做出判斷與痰細(xì)胞檢測的符合率只有62%[4]，通過觀察痰細(xì)胞的比例可以更準(zhǔn)確地了解患者的氣道炎癥類型和程度，從而可以降低因癥狀不典型所導(dǎo)致的誤診和漏診率。我們認(rèn)為COPD是一種中性粒細(xì)胞浸潤為主的炎癥，而越來越多的研究證實(shí)，除了中性粒細(xì)胞型，COPD還存在嗜酸性粒細(xì)胞型[5]，尤其在急性發(fā)作期患者氣道內(nèi)的嗜酸性粒細(xì)胞升高明顯。從我們研究中可以看出，另外有11%患者以嗜酸粒細(xì)胞為主型，而38%患者以混合型為主。說明AECOPD患者細(xì)胞類型多樣，而痰嗜酸細(xì)胞增多的患者應(yīng)對激素有很好的效果。

另外痰嗜酸粒細(xì)胞及混合型為主的患者，血嗜酸粒細(xì)胞總數(shù)較中性粒細(xì)胞為主的患者高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與Gao等[6]的研究符合。如果患者不能成功誘導(dǎo)痰，血嗜酸粒細(xì)胞總數(shù)升高有一定意義。但在我們的研究中，血中性粒細(xì)胞總數(shù)在各組直接無差別，可能與我們樣本數(shù)較少有關(guān)。

痰中性粒細(xì)胞百分比越高的患者FEV1%越低，而痰嗜酸粒細(xì)胞增高的患者氣道改善率越差，這個(gè)結(jié)果與Tsikrika等[3]對在支氣管擴(kuò)張患者的試驗(yàn)中類似。說明不論中性粒細(xì)胞或是嗜酸粒細(xì)胞，均對肺功能產(chǎn)生了不良的影響。

綜上所述，誘導(dǎo)痰細(xì)胞分類檢測具有無創(chuàng)、安全、可靠和操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，是反映氣道炎癥狀態(tài)和評估藥物治療效果的重要手段。AECOPD患者的誘導(dǎo)痰細(xì)胞分類不全是以中性粒細(xì)胞為主型；痰嗜酸粒細(xì)胞及混合型為主的患者，血嗜酸粒細(xì)胞總數(shù)較中性粒細(xì)胞為主的患者高，具有一致性；而不論中性粒細(xì)胞或是嗜酸粒細(xì)胞，均對肺功能產(chǎn)生了不良的影響。