香杞平脂咀嚼片的制備工藝優(yōu)化與質(zhì)量評(píng)價(jià)

陸敏，常曉婕，張文晉，劉寧，2，楊佳美，劉艷華，2，馬學(xué)琴，2，楊建宏，2，余建強(qiáng)，2，李鳳梅，2，*

（1.寧夏醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，寧夏 銀川 750004；2.寧夏回藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心，寧夏回醫(yī)藥協(xié)同創(chuàng)新中心，寧夏藥物創(chuàng)新與仿制藥研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，寧夏 銀川 750004）

高血脂癥是一種常見(jiàn)而多發(fā)的代謝性疾病，是引起心腦血管疾病的重要危險(xiǎn)因素，常見(jiàn)于中老年人[1]。中醫(yī)學(xué)上無(wú)高血脂癥的病名，認(rèn)為高血脂癥為本虛標(biāo)實(shí)，屬“血瘀”、“痰濁”范疇，臨床辨證多歸于肝腎虧虛、脾虛痰濁、氣滯、血瘀[2]，治療時(shí)大多采用補(bǔ)益肝腎、健脾益氣、滋陰養(yǎng)血、活血化瘀、清熱通便、消食化痰之藥。從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)觀點(diǎn)看，中藥的降脂作用主要從抑制膽固醇的吸收、調(diào)節(jié)血脂代謝、促進(jìn)膽固醇排泄來(lái)體現(xiàn)[1]。由于治療高血脂的大多是為化學(xué)藥物，雖然服用后起效快，但對(duì)身體具有損傷，而如果采用食療的方式，雖然起效緩慢但通過(guò)長(zhǎng)期食用，能夠起到防治高血脂的作用[3]。

咀嚼片系指于口腔中咀嚼或吮服使片劑溶化后吞服，在胃腸道中發(fā)揮作用或經(jīng)胃腸道吸收發(fā)揮全身作用的片劑[4]。它是一類可在口腔內(nèi)嚼碎后咽下的片劑，大小一般與普通片劑相同，可根據(jù)需要制成不同形狀的異形片[5]。具有口感好，服用方便，溶出迅速，吸收快，生物利用度較高等優(yōu)點(diǎn)。研究表明，胡蘆巴[6-7]莖葉及種子的水提物和醇提物均有顯著的降血脂的作用。枸杞[8]可明顯降低血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）和低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）。仙人掌[9]干粉和浸出液，可降低高脂血癥小鼠血清TC、TG和LDL-C 含量，明顯升高高密度脂蛋白含量。本研究使用單因素試驗(yàn)優(yōu)化并篩選最佳處方，為了有效控制制劑質(zhì)量，采用高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）法測(cè)定香杞平脂咀嚼片中主藥胡蘆巴中提取物胡蘆巴堿的含量。

本研究將具有降血脂作用且具有寧夏地方特色的3種天然植物：枸杞、葫蘆巴及仙人掌進(jìn)行科學(xué)配伍，并通過(guò)單因素考查試驗(yàn)，優(yōu)化制備工藝，研制成長(zhǎng)期應(yīng)用具有良好降血脂功效的健康食品—“香杞平脂咀嚼片”。本研究首次將枸杞、葫蘆巴和仙人掌結(jié)合，制備香杞平脂咀嚼片，將寧夏地方特色資源優(yōu)勢(shì)轉(zhuǎn)化為經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢(shì)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

枸杞提取物、葫蘆巴提取物、仙人掌提取物、甘露醇等制劑使用輔料均為食品級(jí)別：鑫鑫食化有限公司；胡蘆巴堿對(duì)照品：上?？祈樕锟萍加邢薰荆灰译妫ㄉV純），其余試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

YP202N 單沖壓片機(jī)：上海中南醫(yī)藥機(jī)械有限公司；WFO-700W 送風(fēng)定溫干燥箱：上海愛(ài)朗儀器有限公司；島津HPLC 儀[配有LC-20AT 泵、檢測(cè)器SPD-20A、自動(dòng)進(jìn)樣器 SIL-20A、InerSustain 色譜柱（4.6 mm×25 mm，5 μm）等]：島津（中國(guó)）有限公司；KQ-500E 型超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司。AL104 電子天平：梅特勒-拖利多儀器上海有限公司。

1.3 制備工藝研究

1.3.1 制備工藝路線

香杞平脂咀嚼片制備工藝路線圖，見(jiàn)圖1。

圖1 香杞平脂咀嚼片制備工藝路線圖Fig.1 Preparation process diagram of xiang qi lower blood lipids chewable tablet

1.3.2 填充劑種類的篩選

試驗(yàn)分別選用甘露醇、α-乳糖、甘露醇：α-乳糖（質(zhì)量比 1∶1）、甘露醇：α-乳糖（質(zhì)量比 2∶1）為填充劑，使用14 目篩制粒，干燥，整粒，壓片（機(jī)器壓力為12 kg），考察片的口感、片劑外觀、吸濕性和硬度為指標(biāo)，篩選填充劑。

1.3.3 填充劑用量的篩選

用甘露醇做填充劑，按輔料用量分別為原料藥的0.5 倍、1 倍、2 倍和 3 倍，分別使用 14 目篩制粒，干燥，整粒，壓片（機(jī)器壓力為12 kg），以口感、片外觀和硬度為指標(biāo)，篩選出最佳用量。

1.3.4 甜味劑的篩選

以甜菊糖作為甜味劑，分別按0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%的質(zhì)量進(jìn)行制粒（14 目篩），干燥，整粒，壓片（機(jī)器壓力為12 kg），通過(guò)矯味效果確定用量。

1.3.5 酸味劑的篩選

以檸檬酸為酸味劑，分別按0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%的質(zhì)量進(jìn)行制粒（14 目篩），干燥，整粒，壓片（機(jī)器壓力為12 kg），考察矯味效果，確定用量。

1.3.6 香精種類的篩選

香精選擇為薄荷香精和橘子香精，分別按照加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%薄荷香精、1%桔子香精和0.5%薄荷香精加上0.5%桔子香精，分別使用14 目篩制粒，干燥，整粒，壓片（機(jī)器壓力為12 kg），考察矯味效果，確定種類。

1.3.7 香精用量的篩選

以薄荷香精加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%進(jìn)行分別制粒（14 目篩），干燥，整粒，壓片（機(jī)器壓力為12 kg），考察矯味效果，確定薄荷香精用量。

1.3.8 潤(rùn)濕劑的篩選

分別以75%、80%、85%、90%、95%乙醇溶液進(jìn)行制軟材，分別使用14 目篩制粒，干燥，整粒，壓片（機(jī)器壓力為12 kg），通過(guò)以軟材黏度、過(guò)篩情況、片外觀和硬度為指標(biāo)，篩選出最佳潤(rùn)濕劑。

1.4 胡蘆巴堿的含量測(cè)定

1.4.1 色譜條件

色譜柱 InerSustain C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈：H3PO4溶液（10∶90，體積比）；流速為1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：265 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。理論塔板數(shù)按胡蘆巴堿峰計(jì)算不應(yīng)低于4 000。

1.4.2 溶液的制備

對(duì)照品溶液的制備[10]：精密稱取胡蘆巴堿對(duì)照品0.003 3 g，加50%甲醇溶解并定容于10 mL 容量瓶，搖勻，作為貯備溶液。精密量取對(duì)照品貯備液1 mL 至5 mL 容量瓶中，加50%甲醇定容，搖勻，即得66 mg/L的對(duì)照品溶液。

供試品溶液的制備[11-12]：取香杞平脂咀嚼片20 片，精密稱定，研細(xì)。取藥粉約1.5 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，加入50%的甲醇30 mL，密塞，振搖，超聲處理50 min，放冷，過(guò)濾至50 mL 容量瓶中。錐形瓶用約10 mL 50%甲醇沖洗，洗液一并濾入容量瓶中。加50%甲醇定容至刻度，搖勻。溶液用0.45μm 微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.4.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

按色譜條件，分別將各溶液進(jìn)樣瓶放入進(jìn)樣盤中，設(shè)置程序，各進(jìn)樣 10 μL，記錄色譜圖[12-13]。

1.4.4 線性關(guān)系考察

精密量取對(duì)照品貯備液 0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，分別置于5 mL 量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得不同濃度的對(duì)照品溶液。根據(jù)1.4.1 的色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，以胡蘆巴堿溶液濃度（X）（mg/L）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4.5 精密度試驗(yàn)

取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5 次，每次進(jìn)樣10 μL，按上述1.4.1 的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。

1.4.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批香杞平脂咀嚼片5 份，精密稱定，按照“1.4.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按1.4.1 下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。

1.4.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取“1.4.6”中的1號(hào)供試品，在20℃下放置0、2、4、6、8、12 h 后分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。

1.4.8 加樣回收率試驗(yàn)

取供試樣品藥粉6 份，各約1.5 g，精密稱定，各加入濃度為0.450 mg/mL 的對(duì)照品溶液1 mL，按“1.4.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液，按1.4.1 的色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算得回收率。

1.5 樣品含量的測(cè)定

取3 批樣品粉末各1.5 g，每批3 份，精密稱定，測(cè)定樣品中葫蘆巴堿含量，結(jié)果用平均值表示。

2 結(jié)果與討論

2.1 制備工藝

2.1.1 填充劑的確定

咀嚼片常用填充劑為蔗糖、糊精、乳糖、甘露醇等。蔗糖味甜，制出的片劑光滑，但易吸濕，且不適用于糖尿病人[13]，而糊精口感較差，故本試驗(yàn)分別選用甘露醇、α-乳糖、甘露醇∶α-乳糖（質(zhì)量比 1∶1）、甘露醇∶α-乳糖（質(zhì)量比 2∶1）為填充劑，結(jié)果見(jiàn)表1 與圖2。

表1 不同填充劑對(duì)咀嚼片的影響Table 1 The influence of different fillers on chewable tablets

圖2 藥粉與不同填充劑的混合物的吸濕率Fig.2 Moisture absorption rate of mixture of materials and different fillers

表1表示甘露醇制備出的片硬度適中，更適合老人和小孩服用；圖2 顯示此原料的吸濕性強(qiáng)，在使用甘露醇作為填充劑的時(shí)候其吸濕性大大減小，所以本研究采用甘露醇作為填充劑。

2.1.2 填充劑用量的確定

以甘露醇做填充劑，以口感、片外觀和硬度為指標(biāo)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 甘露醇用量對(duì)咀嚼片的影響Table 2 Effect of mannitol dosage on chewable tablets

綜合各項(xiàng)指標(biāo)，輔料與原料質(zhì)量比為1∶1 時(shí)，口感和硬度均較適中，確定填充劑與原料藥的質(zhì)量比為1∶1 時(shí)效果較好。

2.1.3 甜味劑的確定

常用甜味劑包括天然的和合成的兩大類。天然的甜味劑有蔗糖、單糖漿、蜂蜜、山梨醇、甘露醇、甜菊糖等；合成的甜味劑有糖精鈉、阿斯巴甜和甜蜜素。本試驗(yàn)選擇天然甜味劑-甜菊糖。它具有高甜度、低熱能的特點(diǎn)，其甜度是蔗糖的200 倍～300 倍，熱值僅為蔗糖的1/300。是一種可替代蔗糖非常理想的甜味劑，常作為保健甜味添加劑。通過(guò)矯味效果確定最終用量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 甜味劑用量對(duì)咀嚼片口感的影響Table 3 Effect of the dosage of sweetener on the taste of chewable tablets

因?yàn)樗幬锉旧碛幸欢ǖ奶鹞?，所以加入甜菊糖如果量過(guò)大，會(huì)產(chǎn)生甜膩感，效果不佳。將甜菊糖用量調(diào)至0.1%后，甜味適度，掩蓋苦味能力最佳，矯味效果好。

2.1.4 酸味劑的確定

檸檬酸是最為常用的酸味劑，且安全可靠易于獲得，本研究采用檸檬酸作為酸味劑，通過(guò)矯味情況確定最終用量。檸檬酸用量為0.2%時(shí)酸味不夠，0.4%時(shí)酸味一般。將檸檬酸用量調(diào)至0.3%時(shí)，酸度合適，與甜菊糖混合效果最佳，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 酸味劑用量對(duì)咀嚼片口感的影響Table 4 Effect of the dosage of sour agent on the taste of chewable tablets

2.1.5 香精的確定

采用橘子香精和薄荷香精中的一種或復(fù)配進(jìn)行掩味，通過(guò)矯味情況確定最終用量，結(jié)果見(jiàn)表5、表6。

表5 不同香精對(duì)咀嚼片口感的影響Table 5 Effects of different flavors on the taste of chewable tablets

表6 薄荷香精用量對(duì)咀嚼片口感的影響Table 6 Effect of the amount of mint flavor on the taste of chewable tablets

綜上所述，在使用薄荷香精用量在0.3%的時(shí)候掩味效果是最佳。

2.1.6 潤(rùn)濕劑的選擇

由于原料藥吸濕情況嚴(yán)重，如果使用純水會(huì)使制粒困難，難以過(guò)篩，最終根據(jù)軟材黏度，過(guò)篩情況和片的外觀和硬度確定最終使用85%乙醇進(jìn)行制粒，得到的顆粒較好，結(jié)果見(jiàn)表7。

2.2 葫蘆巴含量測(cè)定

2.2.1 高效液相系統(tǒng)適應(yīng)性

對(duì)照品與供試品的高效液相色譜圖見(jiàn)圖3。

如圖3所示供試品和對(duì)照品色譜圖相應(yīng)的位置上，有相同的的胡蘆巴堿峰。

表7 乙醇潤(rùn)濕劑對(duì)咀嚼片制粒情況的影響Table 7 Effect of ethanol wetting agent on granulation of chewable tablets

2.2.2 方法學(xué)考察

葫蘆巴堿線性關(guān)系曲線圖見(jiàn)圖4。

由圖4可知，胡蘆巴堿的檢測(cè)濃度在6.6 mg/L～132 mg/L 時(shí)與峰面積值呈良好線性關(guān)系，y=13 380x-2 123（R2=0.999 9）。并根據(jù)1.4.1 操作得到精密度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）為0.22%；重復(fù)性的RSD 為2.00%；在12 h 內(nèi)的RSD 為1.40%；得到6 份樣品的平均加樣回收率為95.38 %，RSD 為1.13%，表明該高效液相儀器精密度良好，此方法重復(fù)性較好，且供試品溶液在12 h 內(nèi)穩(wěn)定。

圖3 對(duì)照品、供試品的高效液相色譜圖Fig.3 HPLC chromatogram of reference，test and negative control

圖4 葫蘆巴堿線性關(guān)系曲線圖Fig.4 The linear relationship graph of Trigonelline

2.2.3 樣品含量測(cè)定

根據(jù)操作“1.5”得到3個(gè)批次樣品的平均含量為0.25 mg/g，RSD 值為 0.80%。

3 結(jié)論

研究通過(guò)制備工藝研究最終制備工藝為：枸杞、仙人掌和葫蘆巴3種提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)共占49.15%，甘露醇49.15%，甜菊糖0.1%，檸檬酸0.3%，薄荷香精0.3%，將以上物質(zhì)混合均勻，使用85%乙醇進(jìn)行制軟材，過(guò)14 目篩制粒，50℃烘箱干燥 2 h，整粒，加入整粒后占顆粒質(zhì)量1%硬脂酸鎂混勻，10 mm 沖頭壓片（機(jī)器壓力為12 kg）得到香杞平脂咀嚼片。隨著人們對(duì)健康的重視，人們也意識(shí)到食療能夠起到促進(jìn)健康長(zhǎng)壽，防治疾病的作用[3]。近年來(lái)，人民生活水平的提高，飲食不規(guī)范導(dǎo)致血脂異常，而市面上有關(guān)于調(diào)節(jié)血脂平衡的藥物多數(shù)是化學(xué)合成藥物，具有較強(qiáng)的不良反應(yīng)和副作用，且無(wú)法長(zhǎng)期食用，治標(biāo)不治本，因此通過(guò)開(kāi)發(fā)香杞平脂咀嚼片，不僅能夠?yàn)榉乐胃哐娜藗兲峁┒喾N產(chǎn)品選擇，還能將寧夏的本土資源進(jìn)行利用轉(zhuǎn)化，將資源利用。前期通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[14]，證明香杞平脂咀嚼片具有降血脂的功效，同時(shí)對(duì)肝臟具有保護(hù)作用。此研究對(duì)香杞平脂咀嚼片進(jìn)行質(zhì)量研究，結(jié)果表明該咀嚼片質(zhì)量可控，葫蘆巴堿含量為0.25 mg/g。證明此工藝得到的香杞平脂咀嚼片符合咀嚼片的制備要求，安全可靠，有較好的外觀，口感清爽，質(zhì)量可控，且具有一定的降血脂和保肝的功效，為今后進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)和產(chǎn)品深入開(kāi)發(fā)提供基礎(chǔ)。