子宮內(nèi)膜異位癥患者血清與腹腔液中CRP、IL—8、VEGF的表達(dá)及臨床意義

魏順英 王烈宏 祁青玲

[摘要] 目的 探討子宮內(nèi)膜異位癥患者血清和腹腔液中C-反應(yīng)蛋白（CRP）、白細(xì)胞介素-8（IL-8）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)及其臨床意義。 方法 收集2015年8月～2017年8月青海紅十字醫(yī)院收治的93例子宮內(nèi)膜異位癥患者（子宮內(nèi)膜異位癥組），根據(jù)美國(guó)生育協(xié)會(huì)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（r-AFS）分期將其分為Ⅰ期（n = 19）、Ⅱ期（n = 25）、Ⅲ期（n = 28）、Ⅳ期（n = 21），并于同期隨機(jī)選取60例子宮肌瘤患者（子宮肌瘤組）和60名健康體檢者為對(duì)照（對(duì)照組）。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)各組血清和腹腔液中CRP、IL-8、VEGF水平。 結(jié)果 子宮內(nèi)膜異位癥組患者血清CRP、IL-8、VEGF水平均高于子宮肌瘤組、對(duì)照組（P < 0.05），子宮內(nèi)膜異位癥組患者腹腔液中CRP、IL-8、VEGF水平高于子宮肌瘤組（P < 0.05）。隨著疾病分期的增加，子宮內(nèi)膜異位癥組患者血清、腹腔液中CRP、IL-8、VEGF水平呈逐漸增加趨勢(shì)（P < 0.05）。經(jīng)Pearson積矩相關(guān)分析，子宮內(nèi)膜異位癥組患者血清中CRP、IL-8、VEGF與r-AFS評(píng)分呈正相關(guān)（r = 0.639、0.712、0.655，P < 0.05），腹腔液CRP、IL-8、VEGF與r-AFS評(píng)分呈正相關(guān)（r = 0.682、0.764、0.670，P < 0.05）。CRP的ROC曲線下面積（AUC）為0.784，最佳截?cái)嘀禐?2.23 mg/L，靈敏度、特異性分別為0.77、0.72，準(zhǔn)確性為0.71；IL-8的AUC為0.884，最佳截?cái)嘀禐?0.97 mg/L，靈敏度、特異性分別為0.82、0.76，準(zhǔn)確性為0.78；VEGF的AUC為0.889，最佳截?cái)嘀禐?75.34 pg/mL，靈敏度、特異性分別為0.82、0.78，準(zhǔn)確性為0.80；CRP、IL-8、VEGF聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.931，靈敏度、特異性分別為0.92、0.85，準(zhǔn)確性為0.89。 結(jié)論 子宮內(nèi)膜異位癥患者血清及腹腔液中CRP、IL-8、VEGF水平顯著升高，并且與病情進(jìn)展呈正相關(guān)，早期聯(lián)合檢測(cè)有助于鑒別診斷子宮內(nèi)膜異位癥及評(píng)估病情嚴(yán)重程度。

[關(guān)鍵詞] 子宮內(nèi)膜異位癥；C-反應(yīng)蛋白；白細(xì)胞介素-8；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

[中圖分類(lèi)號(hào)] R711.71 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2019）04（c）-0089-05

Expression of CRP， IL-8 and VEGF in serum and peritoneal fluid of patients with endometriosis and its significance

WEI Shunying WANG Liehong QI Qingling WANG Qianyin WANG Yonghua JIA Jia

Department of Gynaecology， Qinghai Red Cross Hospital， Qinghai Province， Xi′ning 810000， China

[Abstract] Objective To explore the expression of C-reactive protein （CRP）， interleukin-8 （IL-8） and vascular endothelial growth factor （VEGF） in serum and peritoneal fluid of patients with endometriosis and its clinical significance. Methods A total of 93 patients with endometriosis （endometriosis group） admitted to Qinghai Red Cross Hospital from August 2015 to August 2017 were divided into stage Ⅰ （n = 19）， stage Ⅱ （n = 25）， stage Ⅲ （n = 28） and stage Ⅳ （n = 21） according to the American Fertility Society （r-AFS）. At the same time， 60 patients with uterine leiomyoma （uterine leiomyoma group） and 60 healthy volunteers as control group were randomly selected. The levels of CRP， IL-8 and VEGF in serum and peritoneal fluid was detected by enzyme-linked immunosorbent assay. Results The levels of serum CRP， IL-8 and VEGF in endometriosis group were higher than those in uterine leiomyoma group and control group （P < 0.05）. The levels of CRP， IL-8 and VEGF in peritoneal fluid were higher than those in patients with uterine leiomyoma group （P < 0.05）. With the increase of disease stages， the levels of CRP， IL-8 and VEGF in serum and peritoneal fluid in patients with endometriosis increased gradually （P < 0.05）. Pearson moment correlation analysis showed that serum CRP， IL-8， VEGF was positively associated with r-AFS score （r = 0.639， 0.712， 0.655； P < 0.05）， and which in peritoneal fluid was positively associated with r-AFS score （r = 0.682， 0.764， 0.670； P < 0.05）. The area under ROC curve （AUC） of CRP was 0.784， the best cut-off value was 12.23 mg/L， the sensitivity and specificity was 0.77 and 0.72， respectively， and the accuracy was 0.71. The AUC of IL-8 was 0.884， the best cut-off value was 20.97 mg/L， the sensitivity and specificity was 0.82 and 0.76， respectively， and the accuracy was 0.78. The AUC of VEGF was 0.889， the best cut-off value was 175.34 pg/mL， the sensitivity and specificity were 0.82 and 0.78， respectively， and the accuracy was 0.80. The AUC of CRP， IL-8 and VEGF was 0.931， the sensitivity and specificity was 0.92 and 0.85， respectively， and the accuracy was 0.89. Conclusion The levels of CRP， IL-8 and VEGF in serum and peritoneal fluid of patients with endometriosis are significantly elevated and positively associated with the progression of the disease. Early detection of CRP， IL-8 and VEGF is helpful to differential diagnosis of endometriosis and to evaluate the severity of the disease.

[Key words] Endometriosis； C-reactive protein； Interleukin-8； Vascular endothelial growth factor

子宮內(nèi)膜異位癥是指正常子宮內(nèi)膜組織在子宮腔以外的卵巢、盆腔腹膜、子宮直腸陷凹等部位異常生長(zhǎng)及浸潤(rùn)所致的病理改變，在育齡婦女中發(fā)病率為10%～15%[1-2]。報(bào)道顯示[3]，近25%的子宮內(nèi)膜異位癥患者早期無(wú)典型臨床表現(xiàn)，患者需通過(guò)開(kāi)腹或者腹腔鏡方能確診，漏診率較高。早期診斷子宮內(nèi)膜異位癥并評(píng)估病情進(jìn)展，對(duì)制訂針對(duì)性治療方案以改善預(yù)后具有重要意義?，F(xiàn)有研究表明[4-5]，子宮內(nèi)膜細(xì)胞逆流并種植于腹腔間質(zhì)，并誘發(fā)炎性反應(yīng)及促進(jìn)新生血管生成是子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病主要機(jī)制之一。C-反應(yīng)蛋白（C reactive protein，CRP）、白細(xì)胞介素-8（interleukin-8，IL-8）是常見(jiàn)的炎癥細(xì)胞因子，有研究表明[6-7]，CRP和IL-8在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要作用。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是促血管生成因子，通過(guò)特異性結(jié)合血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子可溶性受體-1（soluble vascular endothelial growth factor receptor-1，sVEGFR-1）而刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞，最終促進(jìn)新生血管形成[8]。本研究通過(guò)檢測(cè)血清及腹腔液中CRP、IL-8、VEGF水平，旨在探討聯(lián)合檢測(cè)對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥鑒別診斷中的價(jià)值及在病情進(jìn)展過(guò)程中的作用。現(xiàn)報(bào)道結(jié)果如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年8月～2017年8月青海紅十字醫(yī)院婦科門(mén)診收治的93例行腹腔鏡手術(shù)的子宮內(nèi)膜異位癥患者為子宮內(nèi)膜異位癥組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①腹腔鏡術(shù)后病理組織切片經(jīng)2名病理醫(yī)師確診為子宮內(nèi)膜異位癥；②術(shù)前未接受過(guò)任何放化療治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期及哺乳期的女性；②心功能不全者；③肝、腎功能障礙者；④平素經(jīng)期不規(guī)律患者；⑤內(nèi)分泌以及代謝性疾病等可能影響本研究結(jié)果的疾病患者；⑥急、慢性炎性反應(yīng)性疾病患者；⑦自身免疫性疾病患者；⑧合并子宮肌瘤、子宮腺肌病、乳腺增生性疾病的患者；⑨納入研究前3個(gè)月內(nèi)服用過(guò)激素類(lèi)藥物治療者；⑩惡性腫瘤患者。93例患者年齡25～46歲，平均（36.24±4.50）歲；體重指數(shù)（BMI）21～28 kg/m2，平均（24.51±2.23）kg/m2；孕次1～5次，平均（2.21±0.56）次；產(chǎn)次1～4次，平均（1.83±0.47）次。并于同期隨機(jī)選取60例子宮肌瘤患者為子宮肌瘤組，60名健康體檢者為對(duì)照組。其中子宮肌瘤組年齡22～38歲，平均（34.09±5.21）歲；BMI 20～27 kg/m2，平均（22.95±2.86）kg/m2；孕次0～5次，平均（2.01±0.49）次；產(chǎn)次0～4次，平均（1.59±0.50）次。對(duì)照組年齡21～42歲，平均（35.18±5.56）歲；BMI 21～28 kg/m2，平均（23.52±3.03）kg/m2；孕次1～4次，平均（2.16±0.50）次；產(chǎn)次0～5次，平均（1.68±0.46）次。各組年齡、BMI、孕次、產(chǎn)次等基線資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。采用美國(guó)生育協(xié)會(huì)（AFS）制定的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[9]從病變累及部位、大小、側(cè)別、粘連程度等進(jìn)行評(píng)分，并根據(jù)積分將患者分為四期：Ⅰ期（1～5分）19例，Ⅱ期（6～15分）25例，Ⅲ期（16～40分）28例，Ⅳ期（>40分）21例。本研究所有研究對(duì)象及家屬均簽署知情同意書(shū)，且該研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2 方法

抽取患者入院次日清晨5 mL空腹肘靜脈血，健康體檢者于體檢當(dāng)日抽取5 mL空腹肘靜脈血，將血液標(biāo)本在半徑為30 cm的離心機(jī)中3000 r/min離心5 min，將血清標(biāo)本置于-80℃環(huán)境下保存，留待檢測(cè)。同時(shí)子宮內(nèi)膜異位癥和子宮肌瘤患者手術(shù)過(guò)程中均在腹腔鏡輔助下以穿刺針抽取5 mL位于子宮膀胱陷凹與子宮直腸陷凹處的腹腔液，在室溫環(huán)境下放置1 h，然后以3000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min，留取上清液，置于-80℃環(huán)境下保存，留待檢測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定腹腔液和血清標(biāo)本中CRP、IL-8、VEGF水平，深圳晶美生物技術(shù)有限公司提供相應(yīng)的試劑盒（生產(chǎn)批號(hào)：120215），檢測(cè)過(guò)程中相關(guān)操作嚴(yán)格按照試劑盒上說(shuō)明進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組獨(dú)立樣本的比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，兩組獨(dú)立樣本的比較采用成組t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Pearson積矩相關(guān)分析各指標(biāo)間的相關(guān)性；繪制受試者工作特征曲線（ROC）評(píng)估血清CRP、IL-8、VEGF對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥的診斷價(jià)值。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清及腹腔液中CRP、IL-8、VEGF水平比較

三組血清、腹腔液CRP、IL-8、VEGF水平經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），其中子宮內(nèi)膜異位癥組患者血清CRP、IL-8、VEGF水平均高于子宮肌瘤組、對(duì)照組（P < 0.05），子宮內(nèi)膜異位癥組患者腹腔液CRP、IL-8、VEGF水平高于子宮肌瘤組（P < 0.05）；子宮肌瘤組與對(duì)照組血清CRP、IL-8、VEGF水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 子宮內(nèi)膜異位癥不同疾病分期患者血清及腹腔液中CRP、IL-8、VEGF水平比較

子宮內(nèi)膜異位癥組不同疾病分期患者血清、腹腔液CRP、IL-8、VEGF水平經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），隨著疾病分期的增加，血清、腹腔液CRP、IL-8、VEGF水平呈逐漸增加趨勢(shì)（P < 0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 子宮內(nèi)膜異位癥患者血清及腹腔液中CRP、IL-8、VEGF與r-AFS評(píng)分的相關(guān)性分析

經(jīng)Pearson積矩相關(guān)分析，子宮內(nèi)膜異位癥患者血清CRP、IL-8、VEGF與r-AFS評(píng)分呈正相關(guān)（r = 0.639、0.712、0.655，P < 0.05），腹腔液CRP、IL-8、VEGF與r-AFS評(píng)分呈正相關(guān)（r = 0.682、0.764、0.670，P < 0.05）。

2.4 血清CRP、IL-8、VEGF對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥的診斷價(jià)值

ROC曲線下面積AUC評(píng)估血清CRP、IL-8、VEGF對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥的診斷價(jià)值見(jiàn)表3和圖1。

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥從組織形態(tài)學(xué)方面來(lái)看為良性病變，但是卻有侵襲、轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)等與惡性腫瘤相似的生物學(xué)特征，惡性率為0.7%～1.0%[10]。腹腔鏡檢查是臨床診斷子宮內(nèi)膜異位癥的“金標(biāo)準(zhǔn)”，其缺點(diǎn)是有創(chuàng)檢查給患者身心帶來(lái)巨大痛苦，且檢查費(fèi)用高昂，患者家庭難以承受[11]。尋找簡(jiǎn)便、快捷且安全有效的標(biāo)志物輔助診斷子宮內(nèi)膜異位癥，一直是臨床研究的熱點(diǎn)。

研究表明[12-14]，脫落的子宮內(nèi)膜細(xì)胞逆流經(jīng)血異位種植并存活，而該過(guò)程與子宮內(nèi)膜形成的新生血管、腹腔的免疫功能紊亂、炎癥細(xì)胞因子合成及分泌增加密切相關(guān)。CRP是細(xì)胞因子刺激肝臟后所分泌的急性時(shí)相蛋白，能有效反映機(jī)體急性炎癥性反應(yīng)。研究報(bào)道[15-16]，異位內(nèi)膜種植使血管的通透性增加，并誘導(dǎo)新血管形成以促進(jìn)異位內(nèi)膜不斷生長(zhǎng)，該過(guò)程同時(shí)引起活化的淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞不斷分泌CRP，使子宮內(nèi)免疫功能發(fā)生紊亂，炎性細(xì)胞因子的分泌失調(diào)，通過(guò)參與免疫性疾病和炎性反應(yīng)，CRP增強(qiáng)了子宮內(nèi)環(huán)境的炎性反應(yīng)而使異位病灶擴(kuò)大，提供了子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展環(huán)境。IL-8主要是由內(nèi)膜細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等分泌的炎癥細(xì)胞因子，不僅介導(dǎo)了炎性反應(yīng)的發(fā)生，同時(shí)還參促進(jìn)了內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移，參與新生血管的形成過(guò)程[17]。研究發(fā)現(xiàn)[18]，子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔內(nèi)集聚大量的炎癥細(xì)胞刺激巨噬細(xì)胞合成并釋放IL-8，增加了異位內(nèi)膜基底部毛細(xì)血管的數(shù)量以及面積，進(jìn)而導(dǎo)致異位內(nèi)膜不斷的增殖、生長(zhǎng)、浸潤(rùn)。VEGF是一種具有高度特異性的血管生成因子，可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移，同時(shí)還能使微血管的通透性增加而促進(jìn)血管的生長(zhǎng)[19]。研究證實(shí)[20]，VEGF表達(dá)水平升高引起上皮下的血管網(wǎng)大量增生，為脫落的子宮內(nèi)膜種植在腹膜上提供足夠的血供，促進(jìn)異位內(nèi)膜生長(zhǎng)而形成子宮內(nèi)膜異位癥。大量研究均證實(shí)[15，21-22]，血清CRP、IL-8、VEGF參與了子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病過(guò)程。

本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜異位癥患者血清及腹腔液中CRP、IL-8、VEGF水平均高于子宮肌瘤患者和健康體檢者，提示CRP、IL-8、VEGF與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病密切相關(guān)，與有關(guān)研究結(jié)果一致[15，21-22]，即子宮內(nèi)膜異位種植于腹腔刺激腹腔炎性反應(yīng)，導(dǎo)致免疫功能紊亂和炎性因子分泌失調(diào)，為子宮內(nèi)膜異位癥提供發(fā)生發(fā)展環(huán)境，而VEGF通過(guò)刺激毛細(xì)血管增生并促進(jìn)病灶組織部位新生血管大量生成，為內(nèi)膜異位生長(zhǎng)提供物質(zhì)基礎(chǔ)。同時(shí)本研究結(jié)果也觀察到，患者腹腔液中CRP、IL-8、VEGF水平高于血清，推測(cè)其原因，可能與子宮內(nèi)膜異位癥主要發(fā)生在腹腔中有關(guān)。r-AFS是臨床評(píng)估子宮異位癥病情嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)，根據(jù)評(píng)分可判斷患者病情嚴(yán)重程度，從而指導(dǎo)臨床制訂針對(duì)性治療方案，改善患者預(yù)后。本研究中，隨著r-AFS分期的增加，子宮內(nèi)膜異位癥患者血清、腹腔液中CRP、IL-8、VEGF水平逐漸增加，并且血清、腹腔液中CRP、IL-8、VEGF與r-AFS呈不同程度正相關(guān)，提示CRP、IL-8、VEGF與子宮內(nèi)膜異位癥病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)，早期檢測(cè)可作為評(píng)估患者病情進(jìn)展的重要生化標(biāo)志物，CRP、IL-8水平越高，炎性反應(yīng)越顯著，病情也越嚴(yán)重，VEGF水平越高，提示新生血管生成越多，為內(nèi)膜異位生長(zhǎng)提供更多的血供，病情進(jìn)展越快。

采用ROC曲線下面積評(píng)估血清CRP、IL-8、VEGF對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥的鑒別診斷價(jià)值，結(jié)果顯示，CRP、IL-8、VEGF單獨(dú)檢測(cè)診斷子宮內(nèi)膜異位癥的靈敏度、特異性不高，可能造成誤診和漏診，而聯(lián)合檢測(cè)的結(jié)果顯示，靈敏度、特異性可達(dá)0.92、0.85，準(zhǔn)確性為0.89。提示早期聯(lián)合檢測(cè)CRP、IL-8、VEGF鑒別診斷子宮內(nèi)膜異位癥的價(jià)格較高。

綜上所述，血清、腹腔液CRP、IL-8、VEGF與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病密切相關(guān)，早期檢測(cè)可輔助臨床評(píng)估病情進(jìn)展，血清CRP、IL-8、VEGF聯(lián)合檢測(cè)對(duì)鑒別診斷子宮內(nèi)膜異位癥具有較高價(jià)值。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Bulun SE. Endometriosis [J]. N Engl J Med，2009，360（3）：268-279.

[2] Mehedintu C，Plotogea MN，Lonescu S，et al. Endometriosis still a challenge [J]. J Med Life，2014，7（3）：349-357.

[3] Bazot M，Darai E. Diagnosis of deep endometriosis：clinical examination，ultrasonography，magnetic resonance imaging，and other techniques [J]. Fertil Steril，2017，108（60）：886-894.

[4] Nazir S，Usman Z，Imran M，et al. Women Diagnosed with Endometriosis Show High Serum Levels of Diethyl Hexyl Phthalate [J]. J Hum Reprod Sci，2018，11（2）：131-136.

[5] Zhang F，Liu XL，Wang W，et al. Expression of MMIF，HIF-1α and VEGF in Serum and Endometrial Tissues of Patients with Endometriosis [J]. Curr Med Sci，2018，38（3）：499-504.

[6] Riiskj？覸r M，F(xiàn)orman A，Kesmodel US，et al. Diagnostic Value of Serial Measurement of C-Reactive Protein in the Detection of a Surgical Complication after Laparoscopic Bowel Resection for Endometriosis [J]. Gynecol Obstet Invest，2017，82（4）：410-416.

[7] Singh AK，Dutta M，Chattopadhyay R，et al. Intrafollicular interleukin-8，interleukin-12，and adrenomedullin are the promising prognostic markers of oocyte and embryo quality in women with endometriosis [J]. J Assist Reprod Genet，2016，33（10）：1363-1372.

[8] Acimovic M，Vidakovic S，Milic N，et al. Survivin and VEGF as Novel Biomarkers in Diagnosis of Endometriosis [J]. J Med Biochem，2016，35（1）：63-68.

[9] Zeng C，Xu JN，Zhou Y，et al. Reproductive performance after surgery for endometriosis：predictive value of the revised American Fertility Society classification and the endometriosis fertility index [J]. Gynecol Obstet Invest，2014， 77（3）：180-185.

[10] 胡方方，楊舒心，劉廣芝.卵巢子宮內(nèi)膜異位癥惡變的臨床病理特征分析[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2017，26（12）：905-907.