食品動物源耐甲氧西林金黃色葡萄球菌MLSB類抗生素耐藥性調查

李淑敏，方亮星，李亮，趙孟，陸肖，古偉琪，廖曉萍，孫堅，熊雁瓊，劉雅紅

（1華南農業(yè)大學獸醫(yī)學院，中國廣州 510642；2美國加州大學洛杉磯分校醫(yī)學院海灣醫(yī)學中心，美國托蘭斯 CA 90502）

0 引言

【研究意義】抗生素是一種很重要并且被廣泛使用的藥物，它能夠殺滅或是抑制細菌生長，從而避免或克服了許多由于細菌感染疾病的發(fā)生；然而隨著抗生素的大量使用以及濫用導致各種各樣細菌對抗生素產(chǎn)生了嚴重的耐藥性問題，威脅到全球的公共衛(wèi)生，最終產(chǎn)生的多重耐藥細菌成為了病人死亡率增高的一個因素[1］。比如本文討論的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistantstaphylococcus aureus，MRSA）菌株，它在人醫(yī)臨床上相比艾滋病、帕金森病或是他殺引起更多人的死亡[2］。因此，細菌對抗生素的耐藥性成為當今世界的研究熱點，由于細菌的快速繁殖以及食物鏈的考慮，科研工作者不僅僅研究醫(yī)院內分離得到的MRSA菌株，還開始研究社區(qū)內以及動物源上分離得到的MRSA菌株的耐藥性。因而，細菌的耐藥性機制研究是降低生物死亡率的一個重要研究途徑。【前人研究進展】金黃色葡萄球菌是人醫(yī)和獸醫(yī)臨床上重要病原菌，它是導致皮膚和皮膚組織感染、血管感染、肺部、膿毒性關節(jié)炎、心內膜炎、骨髓炎等疾病的感染以及敗血癥的條件致病菌[3］；隨著抗生素-青霉素制劑開始應用于人類疾病治療，越來越多的抗生素被發(fā)現(xiàn)和應用于抗疾病感染。由于抗生素廣泛使用、甚至濫用，開始出現(xiàn)了如甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌（MRSA）、萬古霉素耐藥/中介耐藥金葡菌（VRSA/VISA）等“超級細菌”，這些“超級細菌”在世界各地的不同醫(yī)院、社區(qū)甚至動物養(yǎng)殖場內廣泛傳播，對公共衛(wèi)生構成巨大威脅[4］。1961年，JEVONS在英國醫(yī)院內首次發(fā)現(xiàn)MRSA菌株[5］，在 1960年代到1970年代期間，歐洲許多國家中也紛紛報道MRSA菌株，大部分局限在醫(yī)院內的菌株爆發(fā)，至80年代后期，MRSA菌株已經(jīng)成為一種世界普遍傳播的病原菌[6］。隨著MRSA在人醫(yī)臨床的出現(xiàn)越來越普遍，對人類健康的危害也漸漸引起關注。因此人們對MRSA的研究也越來越多，不僅針對人醫(yī)臨床，也開始從環(huán)境源，動物源等入手[4］：上世紀70年代，科學家DEVRIESE等人首次在牛乳房炎中檢測出MRSA，其被稱為與家畜有關的耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌（livestock-associated MRSA，LA-MRSA）[7-8］。由于養(yǎng)殖業(yè)中抗生素的大量廣泛使用，甚至濫用，LA-MRSA逐漸在世界范圍內的許多動物種類中被發(fā)現(xiàn)，遍及豬、雞、牛等動物身上[8-11］，并且呈現(xiàn)多重耐藥的情況。大環(huán)內酯類-林可胺類-鏈陽菌素 B 類（macrolides，lincosamides and type B streptogramin，MLSB）藥物最開始是應用于葡萄球菌的感染治療，隨著其大量的使用和濫用導致耐藥率不斷的增高，該現(xiàn)象在人醫(yī)臨床上普遍的存在[12］；在動物源上，MRSA菌株中的耐藥現(xiàn)象也越來越普遍，其耐藥程度越來越高[13-14］。MLSB這三類藥物在化學結構上是不同的，但是，通過核糖體靶位修飾可導致這三類抗菌藥物同時耐藥[15-16］。erm是典型的介導MRSA菌株對MLSB耐藥的基因，主要是通過編碼rRNA甲基轉移酶進而修飾23S rRNA的甲基化來介導耐藥[17-18］。【本研究切入點】目前，以erm基因介導的LA-MRSA的耐藥調查是比較少的，并且大都是在意大利、瑞典以及德國等地[19-21］，而erm在我國食品動物源 MRSA菌株中的流行率及其與MLSB耐藥關系還未見系統(tǒng)和全面的研究報道?！緮M解決的關鍵問題】通過對豬、雞以及鴨源MRSA菌株中的MLSB的耐藥性調查以及耐藥基因的檢測，分析動物源MRSA菌株對MLSB的耐藥表型及基因型之間的相關性，從而為MLSB抗生素的合理使用提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 培養(yǎng)基及試劑 甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基、金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆肉湯（tryptical soy broth，TSB）、胰蛋白胨大豆瓊脂（tryptical soy agar，TSA）、腦心浸出液肉湯、腦心浸出液瓊脂培養(yǎng)基、水解酪蛋白瓊脂（MH 瓊脂）、水解酪蛋白肉湯（MH 肉湯），均購自廣州環(huán)凱微生物科技有限公司，CAMH肉湯購自青島海博生物技術有限公司。

DNA maker DL2000（50 ng·μL-1）、dNTP Mixture（2.5 mmol·L-1）、TaKaRarTaq購自寶生物工程（大連）有限公司。紅霉素（erythromycin，ERY）、阿奇霉素（azithromycin，AZM）、泰樂菌素（tylosin，TYL）、克林霉素（Clindamycin，CLDM）、慶大霉素（Gentamicin，GEN）、頭孢噻肟（cefotaxime，CTX）、氨芐西林（ampicillin，AMP）鹽酸四環(huán)素（tetracycline，TET）、氟苯尼考（florfenicol，F(xiàn)FL）、環(huán)丙沙星（ciprofloxacin，CIP）、磺胺甲噁唑/甲氧芐啶（sulfamethoxazole，SMZ/trimethoprim，TMP）、利福平（rifampicin，RIF）、利奈唑胺（linezolid，LIN）、萬古霉素（vancomycin，VAN）以及達托霉素（daptomycin，DAP）等均購自廣州翔博生物科技有限公司。

1.1.2 引物的合成 參考相關文獻報道的介導MLSB耐藥的主要5種耐藥基因的DNA序列，送往北京六合華大基因科技有限公司進行引物合成，引物序列及PCR條件如表1所示。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品的采集 2011—2016年間從中國廣東、河北、福建、山東、江西及河南等6個省份的養(yǎng)殖場中采集約6 500份樣品，采集動物為豬、雞和鴨，采集部位包括動物糞便、鼻拭子、盲腸和肝臟。其中豬是采集活體豬的糞便和鼻拭子，雞和鴨是通過解剖死亡的雞鴨取肝臟和盲腸，用無菌棉簽在相應部位表面蘸取為樣品，再將接觸過相應部位的棉簽拭子放在提前準備好的 0.90%的生理鹽水中進行稀釋保存，用于分離菌株金黃色葡萄球菌。

表1 PCR引物序列Table 1 Primer sequences of the detection of MLSB resistant genes

1.2.2 菌株的分離與鑒定 菌株分離與鑒定方法如下：2011—2016年將從動物源放有采集樣品的生理鹽水中吸取大約100 μL的液體接種于3—5 mL含6.50%NaCl的腦心浸出液肉湯（BHI）中 37℃搖床培養(yǎng) 16—18 h；再用接種環(huán)挑取增菌液在高鹽甘露醇固體培養(yǎng)基上劃線，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h；接著再從甘露醇培養(yǎng)基上生長良好的金黃色單菌落中挑出一個于金黃色葡萄球菌顯色板上劃線，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16—24 h，觀察菌落形態(tài)；金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)為粉紫色初步認為是疑似金黃色葡萄球菌；然后將該疑似金黃色葡萄球菌在細菌生化自動鑒定儀進行鑒定；接著將確定為金黃色葡萄球菌的菌株進行苯唑西林藥物的敏感性測試，將 MIC值＞4μg·mL-1的菌株初步鑒定為LA-MRSA。參考相關文獻報道的關于LA-MRSA基因mecA，mecC 基因的雙重確定[22-23］。最后將確定好的LA-MRSA菌株置于終濃度為30.00%的甘油BHI肉湯中，于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 藥敏試驗 根據(jù)美國臨床實驗室標準委員會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）推薦的瓊脂稀釋法的執(zhí)行標準及原則進行，對分離的101株動物源MRSA菌株進行14種抗菌藥物最小抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MICs）值測定。測定的抗生素包括氨基糖苷類：硫酸慶大霉素（gentamicin，GEN）；四環(huán)素類：四環(huán)素（tetracycline，TET）；酰胺醇類：氟苯尼考（florfenicol，F(xiàn)FC）；安莎霉素類：利福平（rifampicin，RIF）；β-內酰胺類：苯唑西林（oxacillin，OXA）、頭孢噻肟（cefotaxime，CTX）、氨芐西林（ampicillin，AMP）；林可胺類：克林霉素（clindamycin，CLDM）；大環(huán)內酯類：紅霉素（erythromycin，ERY）、阿奇霉素（azithromycin，AZM）、泰樂菌素（tylosin，TYL）；噁唑烷酮類：利奈唑胺（linezolid，LIN）；萬古霉素類：萬古霉素（vancomycin，VAN）；脂蛋白抗生素：達托霉素（daptomycin，DAP）均購自廣州翔博生物科技有限公司。

根據(jù)二倍瓊脂稀釋法用稀釋液將藥物儲備液稀釋到所需濃度，再分別相應比例量加入已經(jīng)高壓滅菌過的MH瓊脂在平皿中進行混合均勻瓊脂和抗菌藥物溶液，接著進行冷卻凝固，制成所需藥液濃度的瓊脂平板，再倒一個不加藥液的平皿作為空白對照。按藥物濃度從低到高的順序，把稀釋至含菌量為 1.0×106CFU/mL的菌液用多點接種儀（每針直徑3 mm）蘸取稀釋好的菌液接種到瓊脂平板表面，37℃培養(yǎng)16—24 h 后讀取結果。結果判定：以完全不見細菌生長的最低藥物濃度為該藥物對細菌的MIC，參照CLSI藥敏標準：質控菌符合 CLSI標準中的藥敏范圍時，判讀待測菌株的最小抑菌濃度。

1.2.4 MLSB耐藥基因的檢測 將 LA-MRSA 菌株挑選單菌落接種于5—10 mL TSB 肉湯中，37℃搖床中培養(yǎng)24 h；再將5—10 mL 的增菌液于離心機12 000 r/min離心 5 min，棄掉上清液進行集菌；接著根據(jù)promega基因組提取試劑盒的步驟進行提取DNA，最后將提取的 DNA置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩ａ槍A-MRSA菌株的模板，主要檢測了MLSB的耐藥基因：ermA-C、ereA-B基因。PCR擴增體系：上、下游引物（10 μmol·mL-1）0.5 μL，10×rTaq Buffer（Mg2+Plus）2.5 μL，dNTP Mixture（各 2.5 mmol·L-1）2 μL，rTaq（5 U·μL-1）0.125 μL，總體積 25 μL。擴增循環(huán)條件：94℃預變性5 min，94℃變性30 s，退火溫度如表1所示，延伸72℃45 s，總共循環(huán)30個，接著再72℃延伸10 min。取適量PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)1.00%瓊脂糖凝膠電泳，以DL2000 DNA Marker分子量標準做參考，緩沖液為0.5×TBE，在6 v/cm電壓下電泳15—30 min，結束后用凝膠成像系統(tǒng)觀察拍照分析。

1.3 試驗的時間和地點

本試驗是 2015—2017年期間在華南農業(yè)大學獸醫(yī)學院502室進行，主要是在無菌室和超凈臺進行。

2 結果

2.1 LA-MRSA菌株的分離與鑒定

從我國六省養(yǎng)殖場采集約6 500份樣品都是來源于食品動物源，從中分離到全國各地采集分離480株動物源金黃色葡萄球菌，進一步篩選與鑒定，其中101株為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA），這 101株MRSA菌株均為LA-MRSA，包括76株豬源，20份雞源以及5株鴨源，總的樣品中MRSA分離率約為1.54%（101/6500），金黃色葡萄球菌中 MRSA檢出率為21.04%（101/480），不同動物來源的MRSA檢出率詳見表 2。結果表明，不同來源的樣品中金黃色葡萄球菌的檢出率在0.63%—2.17%之間，不同動物源金黃色葡萄球菌的MRSA菌株的分離率在11.90%—27.50%范圍之間，其中豬源中的檢出率最大（27.05%），其次是雞源（12.74%）。

表2 動物源耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的分離情況Table 2 Isolation of LA-MRSA

2.2 LA-MRSA菌株對 MLSB及其他抗菌藥物的耐藥情況

由于MRSA菌株是重要人畜共患病原菌，其耐藥性問題也愈來愈受到關注。筆者采集的樣品均為食品動物源，故只對食品動物源MRSA菌株（LA-MRSA）中MLSB類抗生素的耐藥性進行研究。藥敏結果顯示，不同來源對克林霉素和紅霉素的MIC50和MIC90均達到256 mg·L-1以上，呈現(xiàn)出高度耐藥的情況。 101株LA-MRSA菌株對克林霉素和紅霉素的耐藥率均為100.00%，且MIC50和MIC90均達到256 mg·L-1以上，呈現(xiàn)出高度耐藥的情況；其次是對泰樂菌素（99.01%）、阿奇霉素（99.01%）、慶大霉素（94.05%）、頭孢噻肟（96.39%）、四環(huán)素（96.39%）和氨芐西林（91.90%）的耐藥率均達到90.00%以上，而對磺胺甲噁唑/甲氧芐啶（53.46%）和利福平（25.74%）的耐藥率較低，所有的LA-MRSA菌株對萬古霉素、利奈唑胺以及達托霉素菌均敏感。

動物源MRSA菌株共有17種耐藥譜型，主要譜型為GEN-TYL-AZM-ERY-FFC-CLDM-TET- S/T-AMPCTX，有37株，占36.63%，其次為GEN-TYL-AZMERY-FFC-CLDM-TET-AMP-CTX，有26株，占11.88%；接著為GEN-TYL-AZM-ERY-FFC-RIF-CLDM-TET-S/T-AMP-CTX有11株，占1.89%。動物源MRSA多重耐藥情況如表3所示，101株LA-MRSA菌株中，除1株外，其余均表現(xiàn)為對三類及三類以上抗菌藥物耐藥，且以11耐（48/101，47.52%）和 10耐（35/101，34.65%）為主，其次為12耐（11/101，10.89%）。

圖1 101株LA-MRSA菌株對14種抗生素的耐藥率Fig. 1 Resistant rates to 14 antibiotics in 101 LA-MRSA strains

表3 動物源MRSA菌株的多重耐藥情況Table 3 The result of multiple drug resistance of MRSA from animals

2.3 LA-MRSA菌株對MLSB耐藥基因的檢出情況

101株LA-MRSA菌株中，均攜帶有mecA，mecC基因，MLSB耐藥基因檢出率最高為ermC，為100.0%；其次是ereB，檢出80株，檢出率為79.20%，接著是ermA和ereA檢出率分別為 45.54% （46/101）和40.69%（41/101），而ermB檢出率最低為 11.89%（12/101）。

2.4 MLSB耐藥的 LA-MRSA菌株對其他耐藥基因的檢出情況

進一步調查了攜帶 MLSB耐藥基因的動物源MRSA菌株中其它耐藥基因攜帶情況。結果如圖2所示，攜帶MLSB耐藥基因陽性的動物源MRSA菌株中，fexA、tetL、aadA1、aph(4’)-Ia的檢出率較高，分別是92.10%、97.02%、97.29%和83.17%；其次是tet(M)，檢出率為 71.29%；而aac(6’)-Ib、aac(3’)-Ic、aph(3’)-II、aph(3’)-IV、optrA、tet(A)、tet(C)的檢出率相對較低，分別是49.50%、46.53%、39.60%、37.62%、33.67%、29.70%和20.79%；接著檢出率更低的是cfr、tet(K)、lnuA以及l(fā)nuF，分別為17.82%、14.85%、5.94%和3.96%。從圖 1和圖 2結果可以看出，除了 MLSB的耐藥率大于90%，氟苯尼考，四環(huán)素，慶大霉素，頭孢噻肟，氨芐西林的耐藥率也大于90%，介導這些抗菌藥物耐藥的耐藥基因分別是fexA、tetL、aadA1、aph(4’)-Ia，檢出率也大于 90%，基因型與表型保持一致。

圖2 MLSB耐藥LA-MRSA菌株對其他耐藥基因的檢出率Fig. 2 The detection rates of other drug resistance genes among MLSB resistant LA-MRSA

2.5 LA-MRSA菌株中 MLSB耐藥基因檢出個數(shù)與多重耐藥情況之間的關系分析

為探討動物源 MRSA菌株中多重耐藥的程度與其攜帶的MLSB耐藥基因檢出個數(shù)是否存在聯(lián)系，進一步分析了LA-MRSA菌株中MLSB耐藥基因檢出個數(shù)與對受試抗菌藥物的耐藥數(shù)目之間的關系，結果如表 4所示。對受試抗菌藥物表現(xiàn)為 12耐的 11株LA-MRSA菌株中，共檢出6種不同的MLSB耐藥基因組合，其中以4種和3種MLSB耐藥基因組合為主導，分別占45.45%（5/11）和36.36%（4/11），還有一株菌中檢出5種MLSB耐藥基因。對受試菌株為11耐的48株LA-MRSA菌株中，共檢出9種不同的MLSB耐藥基因組合，其中以2種和3種MLSB耐藥基因組合為主導，分別占39.58%（19/48）和35.42%（17/48），其次為4種MLSB耐藥基因組合，占22.92%（11/48）。對受試菌株為10耐的35株LA-MRSA菌株中，共檢出9種不同的MLSB耐藥基因組合，其中以3種和2種MLSB耐藥基因組合為主導，分別占42.86%（15/35）和25.71%（9/35），其次為4種MLSB耐藥基因組合，占19.44%（7/36）。而對受試菌株為2、6、7和9耐的7株菌中，檢出9種不同的MLSB耐藥基因組合，主要是以兩個 MLSB耐藥基因組合為主，占 57.14%（4/7）。對動物源MRSA菌株MLSB耐藥基因檢出個數(shù)與受試抗菌藥物的耐藥數(shù)目之間的關系分析結果表明，伴隨著菌株對受試抗菌藥物的耐藥數(shù)目增加時，菌株中MLSB耐藥基因檢出個數(shù)也在增加。

表4 LA-MRSA中MLSB耐藥基因的基因組合與多重耐藥譜型之間的關系Table 4 The relationship between genetic combination of MLSB and multiple drug resistance of LA-MRSA

3 討論

本研究中的 101株動物源的 MRSA 菌株分離于豬源、雞源以及鴨源，分離率均在 0.60%以上，2017年，LI等[27］報道在2014年從中國許多省份地區(qū)采集分離的2 420份豬源樣品中分離出了270株LA-MRSA菌株，分離率達到11.20%，相比本文研究結果較高。MLSB在全球范圍內MRSA菌株中的耐藥情況已經(jīng)有較多報道，這些報道出現(xiàn)在人源、動物源的MRSA菌株中，也出現(xiàn)在其他葡萄菌屬中[20,28-30］。目前，我國對MLSB的耐藥性調查主要在人醫(yī)臨床上比較多，并且研究的菌種各有不同。2016年，我國一家醫(yī)院從62位病人身上分離出的18株MRSA菌株中，有10株的MRSA對MLSB耐藥，耐藥率達到55.60%[31］；在其他菌種中，2013年研究報道，在我國7家不同的醫(yī)院病人身上分離出的肺炎雙鏈球菌對紅霉素的耐藥率為89.70%[32］；2014年，我國上海的一家醫(yī)院的病人身上分離出的94株艱難梭菌對MLSB呈現(xiàn)出高水平的耐藥[28］；我國在動物源上對MLSB的耐藥性調查較晚，報道也相對較少，2012年，HO等[33］報道從我國香港地區(qū)的屠宰豬身上采集的400份鼻拭子中分離出157株LA-MRSA其中對克林霉素的耐藥率為99.00%，紅霉素的耐藥率為 89.00%；2017年，LIU等[34］報道，在我國北部地區(qū)牛群中未加工的牛奶中分離出的 16株LA-MRSA中，有46.3%的LA-MRSA菌株對紅霉素耐藥；在其他菌種中，2015年，ZHANG等[30］研究報道在62只健康母豬和34只病豬身上采集分離的37株豬鏈球菌中，有35株菌對MLSB產(chǎn)生耐藥，分離率達到94.60%。本研究通過對動物源MRSA菌株的敏感性檢測結果顯示，101株動物源的 MRSA菌株對MLSB的 MIC50和 MIC90都大于 256 mg·L-1，耐藥率達到99.00%以上。由此可見，MLSB在動物源上的耐藥率相比人源分離的菌株高，而本研究中的 LA-MRSA對MLSB的耐藥率又略高于其他在人源或是動物源上分離的菌株。結果提示，LA-MRSA中MLSB菌株中呈現(xiàn)高水平的耐藥，給臨床上治療細菌感染疾病帶來困擾，因而合理的使用抗生素在養(yǎng)殖生產(chǎn)中非常的有必要。

除MLSB藥物外，本研究還對其他11種抗菌藥物如四環(huán)素、慶大霉素、氟苯尼考等進行MIC檢測，基本上呈現(xiàn)出高度耐藥的情況，對四環(huán)素、慶大霉素、頭孢噻肟、氨芐西林、氟苯尼考等5種抗菌藥物的耐藥率均達到91.00%以上，而對其他受試藥物如復方新諾明和利福平耐藥水平相對較低。2015年，WANG等[35］報道中分離的20株葡萄球菌的MIC結果顯示其對四環(huán)素、克林霉素以及紅霉素均產(chǎn)生耐藥，而對氯霉素、泰妙菌素和沃尼妙林高水平耐藥，對復方新諾明呈現(xiàn)低水平耐藥，本研究結果與其一致。歐洲、澳大利亞等地區(qū)分離的LA-MRSA的敏感測試結果顯示對四環(huán)素的耐藥率為 50.00%，紅霉素的耐藥率為35.70%，只有1株對利福平耐藥[36-37］，低于本研究結果。本研究發(fā)現(xiàn)動物源MRSA菌株對MLSB及其他抗菌藥物耐藥嚴重，存在的耐藥譜型較多，主要集中在10耐、11耐以及12耐譜型，原因可能在于養(yǎng)殖場人員對抗生素的大量不合理的應用，造成一定的藥物選擇型壓力，導致耐藥；還有原因在于一些人醫(yī)臨床上的藥物在動物身上的應用，用藥主體的不適用也是耐藥的原因。因此，在養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中應合理規(guī)范使用抗菌藥物，不使用高度耐藥的抗菌藥物，應用敏感性較強的抗菌藥物如復方新諾明、利福平等來治療MRSA菌株的感染，交替使用，避免交叉耐藥和防止耐藥細菌的產(chǎn)生和傳播。

本研究發(fā)現(xiàn)，101株MRSA菌株對 MLSB抗菌藥物表現(xiàn)出較高水平耐藥，同時，發(fā)現(xiàn)典型的介導MRSA菌株對MLSB產(chǎn)生耐藥的基因erm和ere存在較高的流行率，尤其是ermC基因檢出率達100.00%，另外，ereB檢出率將近80.00%，此外ermA和ereA檢出率也超過40.00%。2005年，孔海深等[38］報道中erm的檢出率是100.00%；2013年，SHEN等[39］在動物源上的相關報道erm基因在分離的葡萄球菌中基本上都檢出，本研究結果與之類似。由此可見，耐藥基因ermA-C和ereA-B是介導MLSB產(chǎn)生耐藥的主要成因之一，其在人源或是動物源上的MRSA菌株中都能夠檢測到[40-42］。本研究還進一步探討了動物源 MRSA菌株中多重耐藥的程度與其攜帶的MLSB耐藥基因檢出個數(shù)之間的關聯(lián)性，發(fā)現(xiàn)伴隨著菌株對受試抗菌藥物的耐藥數(shù)目增加時，菌株中MLSB耐藥基因檢出個數(shù)也在增加，暗示動物源MRSA菌株 MLSB耐藥基因的攜帶情況可能與菌株的多重耐藥情況關系密切，從而有利于多種抗生素壓力下細菌的存活能力。

進一步分析攜帶MLSB耐藥基因的LA-MRSA菌株中其它耐藥基因檢出情況，發(fā)現(xiàn)多種非MLSB耐藥基因也存在較高檢出率。這表明LA-MRSA菌株中的MLSB耐藥基因與某些非 MLSB抗生素的耐藥表型存在的密切關系很可能是由于菌株中同時存在其他耐藥基因。耐藥基因經(jīng)常出現(xiàn)兩種或多種協(xié)同傳播現(xiàn)象，即介導同一類或不同類抗菌藥物的耐藥基因可存在于同一個移動元件上，例如質粒，轉座子，整合子等，這些元件可介導它們共同傳播，從而導致多重耐藥菌株的擴散[43］。

4 結論

本研究發(fā)現(xiàn)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌菌株對大環(huán)內酯類-林可酰胺類-鏈陽菌素B類呈現(xiàn)高度耐藥且多重耐藥情況嚴重，介導大環(huán)內酯類-林可酰胺類-鏈陽菌素B類耐藥的ermC檢出率高，大環(huán)內酯類-林可酰胺類-鏈陽菌素 B類耐藥基因個數(shù)與菌株的多重耐藥情況密切相關，同時還發(fā)現(xiàn)其他抗菌藥物耐藥的耐藥基因檢出率也相對較高，可能是本研究中菌株呈現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象的主要原因。值得注意的是，食品動物源耐甲氧西林金黃色葡萄球菌耐藥菌可通過食物鏈以及環(huán)境污染等途徑傳播給人，從而對人的健康造成威脅。因此，需進一步監(jiān)測食品動物源耐甲氧西林金黃色葡萄球菌菌株對大環(huán)內酯類-林可酰胺類-鏈陽菌素B類抗生素耐藥情況及大環(huán)內酯類-林可酰胺類-鏈陽菌素B類耐藥基因的流行分布情況。