庫車縣規(guī)?；瘓?chǎng)牛球蟲感染情況及種類鑒定

張寬寬 ，齊 萌 ，2，趙愛云 ，2，邢金明 ，黃忠武 ，王 甜 ，2，徐春艷 ，2

（1.塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆 阿拉爾 843300；2.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木畜牧科技重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，阿拉爾 843300；3.庫車縣獸醫(yī)站，新疆 庫車 842000）

牛球蟲病是由艾美耳屬（Eimeriaspp.）的多種球蟲引起的常見腸道疾病，呈世界性分布［1］。目前，世界范圍內(nèi)已鑒定的牛艾美耳球蟲有21種，公認(rèn)的有15種，我國(guó)報(bào)道的有13種，其中，牛艾美耳球蟲（Eimeria bovis）和邱氏艾美耳球蟲（E.zuernii）致病性較強(qiáng)，而其他球蟲相對(duì)致病性較弱［2-3］。球蟲主要危害犢牛，臨床上以腹瀉為主要癥狀，可導(dǎo)致其體重減輕，生長(zhǎng)發(fā)育受阻，還可引起犢牛免疫受損，導(dǎo)致易共患其他疾?。?］；成年牛通常作為攜帶者，無臨床癥狀，是犢牛感染球蟲的感染源［5］。牛球蟲病感染普遍，在飼養(yǎng)密度高的環(huán)境下容易感染。為了解新疆庫車縣牛球蟲流行情況，分別對(duì)該縣1個(gè)規(guī)模化奶牛場(chǎng)和1個(gè)規(guī)?；馀?chǎng)進(jìn)行球蟲感染情況調(diào)查和種類鑒定，以期為該縣牛球蟲病的防治提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

于2018年5月分別對(duì)新疆庫車縣1個(gè)規(guī)?；膛?chǎng)（240頭）和1個(gè)規(guī)?；馀?chǎng)（400頭）共計(jì)98頭牛，用一次性塑料手套經(jīng)直腸采集或在排便后立即采集新鮮糞便樣本，每份20～30 g，分別裝入潔凈采樣袋中，記錄信息，帶回實(shí)驗(yàn)室，置4℃冰箱待檢。其中奶牛糞便樣本37份，肉牛糞便樣本61份。

1.2 卵囊的檢查和感染強(qiáng)度測(cè)定

取糞便樣本5～10 g，采用飽和蔗糖溶液漂浮法檢查球蟲卵囊；經(jīng)飽和蔗糖溶液漂浮法鑒定為球蟲卵囊陽性的樣本，采用麥克馬斯特計(jì)數(shù)法［6］測(cè)定每克糞便中的球蟲卵囊數(shù)（OPG）。

1.3 球蟲卵囊形態(tài)學(xué)觀察

收集鏡檢球蟲卵囊呈陽性的糞便樣本每份10～15 g，置干凈的塑料桶內(nèi)加適當(dāng)自來水，用玻璃棒充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，加自來水?jīng)40目和80目不銹鋼篩子依次過濾至250 mL離心管內(nèi)?；鞈乙阂? 000 r/min離心5 min，棄上清，反復(fù)3次，使沉淀物均在離心管內(nèi)。在沉淀物中加入150 mL飽和蔗糖溶液，用玻璃棒充分?jǐn)嚢杈鶆?，? 000 r/min離心3 min，取潔凈燒杯加入400 mL自來水，用自制吊環(huán)蘸取含有球蟲卵囊的表面液膜至燒杯中充分稀釋飽和蔗糖溶液；反復(fù)離心和蘸取表面液膜5～8次。將燒杯中的混懸液倒至4個(gè)50 mL離心管中，3 000 r/min離心5 min，棄上清，反復(fù)3次，直至沉淀物均在離心管內(nèi)。再加入35 mL自來水至離心管內(nèi)，攪拌均勻后，3 000 r/min離心5 min，棄上清，以充分洗去沉淀物中的蔗糖溶液。2.5%重鉻酸鉀溶液沖洗4個(gè)離心管內(nèi)含球蟲卵囊的沉淀物至4個(gè)錐形瓶?jī)?nèi)，置水浴恒溫振蕩器中，調(diào)至適當(dāng)轉(zhuǎn)速，28℃條件下培養(yǎng)，至85%以上卵囊完全孢子化，置4℃冰箱保存。球蟲卵囊孢子化時(shí)，因錐形瓶?jī)?nèi)重鉻酸鉀溶液蒸發(fā)，期間添加28℃自來水，以保持重鉻酸鉀溶液濃度。

取孢子化后的卵囊液制片后，顯微鏡下觀察400個(gè)孢子化完全的卵囊的形態(tài)結(jié)構(gòu)。根據(jù)卵囊、孢子囊和子孢子的大小和形態(tài)，有無內(nèi)外殘?bào)w等特征，參照文獻(xiàn)［3-4，7］進(jìn)行種類鑒定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用χ2檢驗(yàn)比較不同養(yǎng)殖場(chǎng)和不同年齡段牛球蟲感染率的差異，P＜0.05時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 牛球蟲感染情況

98份新鮮糞便樣本中，40份呈球蟲卵囊陽性，總感染率40.82%。其中37份奶牛糞便樣本中，20份呈球蟲卵囊陽性，感染率54.05%；61份肉牛糞便樣本中，20份呈球蟲卵囊陽性，球蟲感染率32.79%；不同養(yǎng)殖場(chǎng)牛球蟲感染率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），見表1。

不同年齡段牛均有球蟲感染，小于6月齡牛球蟲感染率最高，為78.57%（11/14）；7～12月齡和1歲以上牛球蟲感染率分別為52.17%（12/23）和27.87%（17/61）。不同年齡段牛球蟲感染率統(tǒng)計(jì)學(xué)差異極顯著（P＜0.01）。奶牛和肉牛的球蟲感染率均隨年齡增長(zhǎng)而呈遞減趨勢(shì)，見表1。

2.2 感染強(qiáng)度測(cè)定

對(duì)40份球蟲陽性糞便樣本中的卵囊進(jìn)行計(jì)數(shù)，平均OPG值為964.62個(gè)，最大OPG值為15 600.00個(gè)。奶牛糞便樣本中，球蟲卵囊平均OPG值為773.50個(gè)，最大OPG值為2 600.00個(gè)，以7～12月齡牛球蟲卵囊OPG值最高，為1 566.67個(gè)；肉牛糞便樣本中，球蟲卵囊平均OPG值為1 117.50個(gè)，最大OPG值為15 600.00個(gè)，以小于6月齡牛球蟲卵囊OPG值最高，為5633.33個(gè)。見表1。

表1庫車縣不同規(guī)?；瘓?chǎng)牛球蟲感染情況

2.3 球蟲種類鑒定

通過對(duì)400個(gè)孢子化球蟲卵囊進(jìn)行種類鑒定，共鑒定出8種艾美耳球蟲，分別是橢圓艾美耳球蟲（E.ellipsoidalli，114/400）、牛艾美耳球蟲（Eimeria bovis，95/400）、柱狀艾美耳球蟲（E.cylindrica，73/400）、邱氏艾美耳球蟲（E.zuernii，58/400）、亞球形艾美耳球蟲（E.subspherica，25/400）、阿拉巴艾美耳球蟲（E.alabamensis，13/400）、奧博艾美耳球蟲（E.auburnensis，12/400）和加拿大艾美耳球蟲（E.canadensis，10/400），以橢圓艾美耳球蟲、牛艾美耳球蟲、柱狀艾美爾球蟲和邱氏艾美耳球蟲為主要感染種類。

3 討論

張龍現(xiàn)等［7］報(bào)道，鄭州8個(gè)奶牛場(chǎng)223頭牛球蟲總感染率29.60%，犢牛、青年牛和成年牛感染率分別為63.04%、40.00%和 9.82%；蔣業(yè)慧等［8］報(bào)道，石河子 6 個(gè)奶牛場(chǎng)482頭牛球蟲總感染率21.33%，以5～6月齡犢牛感染率最高，為 32.91%，0～3月齡、1～2歲、2～3歲和3～5歲牛球蟲感染率分別為12.31%、26.74%、2.82%和6.30%；本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，庫車縣2個(gè)牛場(chǎng)牛球蟲總感染率40.82%，以小于6月齡牛球蟲感染率最高，為78.57%，球蟲感染率均隨年齡增長(zhǎng)而呈遞減趨勢(shì)，與上述報(bào)道相一致。而倪曉婷等［2］報(bào)道，寧夏3個(gè)奶牛場(chǎng)426頭1月齡至1歲牛球蟲總感染率27.46%，以7～12月齡奶牛感染率最高，為52.43%，1～3月齡和4～6月齡牛感染率分別為21.67%和17.99%；本次調(diào)查與倪曉婷等［2］調(diào)查結(jié)果存在差異，可能與地理位置、氣候條件、采樣季節(jié)和飼養(yǎng)管理等因素有關(guān)。

不同年齡段牛感染球蟲后，感染強(qiáng)度存在差異。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，球蟲卵囊平均OPG值為940.00個(gè)，感染強(qiáng)度最大OPG值為15 600.00個(gè)，隨年齡增長(zhǎng)，OPG值呈遞減趨勢(shì)，與倪曉婷等［2］、張龍現(xiàn)等［7］、蔣業(yè)慧等［8］和趙其平等［9］調(diào)查結(jié)果相一致。球蟲病多發(fā)于犢牛和青年牛，成年牛通常感染率和感染強(qiáng)度較低，但可作為犢牛感染的傳染源。一方面犢牛免疫力較低，容易引起發(fā)病，隨著年齡增長(zhǎng)免疫力逐漸加強(qiáng)，球蟲感染率和感染強(qiáng)度逐漸降低；另一方面，犢牛感染球蟲后，可能產(chǎn)生特異性免疫力，一定程度上可抵抗球蟲的再次感染。

倪曉婷等［2］調(diào)查發(fā)現(xiàn)，寧夏地區(qū)奶牛感染的球蟲以柱狀艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲、橢圓艾美耳球蟲和牛艾美耳球蟲為優(yōu)勢(shì)感染種類；趙其平等［9］調(diào)查發(fā)現(xiàn)，上海地區(qū)奶牛感染的球蟲以牛艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲、橢圓艾美耳球蟲為優(yōu)勢(shì)感染種類；馬玉等［10］調(diào)查發(fā)現(xiàn)，新疆北疆地區(qū)奶牛感染的球蟲以邱氏艾美耳球蟲、橢圓艾美爾球蟲和牛艾美耳球蟲為優(yōu)勢(shì)感染種類。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，庫車縣牛感染的球蟲以橢圓艾美耳球蟲、牛艾美耳球蟲、柱狀艾美爾球蟲和邱氏艾美耳球蟲為優(yōu)勢(shì)感染種類，與上述報(bào)道相一致，表明我國(guó)不同地區(qū)奶牛球蟲感染的主要種類不存在明顯的地理隔離特征。

牛球蟲病通常不表現(xiàn)臨床癥狀，流行和發(fā)病與年齡、溫度、季節(jié)、卵囊攝入量、飼養(yǎng)管理、衛(wèi)生條件和動(dòng)物健康狀態(tài)等多因素有相關(guān)性。集約化養(yǎng)殖一定程度上增加了牛球蟲病發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)加強(qiáng)犢牛飼養(yǎng)管理和牛場(chǎng)的環(huán)境衛(wèi)生管理。