HE染色方法在臨床病理診斷中的作用分析

陳 鶴

（遼陽(yáng)市中心醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 111000）

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)在診斷的過(guò)程中病例診斷使非常具有權(quán)威的一種手段，通過(guò)應(yīng)用高質(zhì)量的HE染色切片能夠?yàn)椴±\斷提供更加準(zhǔn)確和可靠的依據(jù)，并對(duì)臨床患者的用藥也具有一定的指導(dǎo)作用[1-2]。在患者病理診斷的過(guò)程中，如果病理診斷出現(xiàn)任何的誤差就會(huì)導(dǎo)致對(duì)患者病情診斷的錯(cuò)誤，直接影響患者的治療和康復(fù)，因此，在病理診斷的中應(yīng)需求有效的方法來(lái)提高病理診斷的準(zhǔn)確性，因此，本院選取5000例病例標(biāo)本作為研究的主要對(duì)象，研究和分析造成病理診斷出現(xiàn)偏差的原因并尋找解決的主要措施。

1 資料與方法

1.1 基本資料：選取2016年6月至2017年6月期間在我院治療的患者中選取5000例作為本次研究的主要對(duì)象，這些病例患者在病理診斷的使利用HE染色方法，基本資料為：男性標(biāo)本為600例，女性標(biāo)本為4400例；手術(shù)切除標(biāo)本1475例；宮腔鏡選取標(biāo)本為3025例；穿刺取材500例；標(biāo)本主要來(lái)源為腹腔臟器3500例；子宮內(nèi)膜900例；脂肪組織400例；骨組織200例。以上病理標(biāo)本在溫度適宜和試劑濃度標(biāo)準(zhǔn)的情況下可以進(jìn)行HE染色。

1.2 方法：①對(duì)標(biāo)本的選取一定要保證其完整和迅速以及典型，并充分的保證選取的標(biāo)本不受到任何的污染。對(duì)于利用不同的方式所獲得的標(biāo)本需要采用不同的標(biāo)本處理方式，包括標(biāo)本的制作程序和儲(chǔ)存的具體方式等。在標(biāo)本制作的過(guò)程中要適當(dāng)?shù)膶⒅窘M織固定脫水時(shí)間進(jìn)行延長(zhǎng)，這樣可以充分的保證標(biāo)本的完整性和代表性以及病理檢測(cè)的準(zhǔn)確性。②HE染色方法的具體流程為：首先采用二甲苯2次，要保證使用的時(shí)間要控制在5～10 min；利用無(wú)水乙醇3次，95%乙醇和85%乙醇脫蠟，最后用流動(dòng)水進(jìn)行清洗，清洗的時(shí)間為1～2 min；蒸餾水水化，利用HE染色，具體的染色時(shí)間要根據(jù)蘇木精液配置的時(shí)間和溫度來(lái)決定；用鹽酸乙醇分行，并在顯微鏡下進(jìn)行觀察；碳酸鋰飽和液中返藍(lán)或者選取溫度為40 ℃的蒸餾水進(jìn)行浸泡；流動(dòng)沖洗10～15 min；利用酸性伊紅對(duì)細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行浸染；進(jìn)行脫水處理；使用中性樹膠封片，并將標(biāo)本貼上標(biāo)簽以便進(jìn)行區(qū)分。③冷凍切片的HE染色要與其他方式的染色進(jìn)行有效的區(qū)別，特別是在時(shí)間的差異上；在選擇染料試劑的過(guò)程中要對(duì)新采用的試劑規(guī)格和型號(hào)進(jìn)行對(duì)比，這樣可以有效的避免由于切片干燥而影響細(xì)胞的形態(tài)[3]。

1.3 觀察指標(biāo)：對(duì)切片的滿意程度進(jìn)行觀察，滿意的主要標(biāo)準(zhǔn)為：切片保存完整，一般厚度在3～5 μm，薄厚均勻、表面沒有褶皺、沒有刀痕、染色核漿分明、紅藍(lán)顏色適度，標(biāo)本顏色透明并保持清潔、沒有氣泡產(chǎn)生、標(biāo)本無(wú)膠溢出、標(biāo)本封表的外表美觀等[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：利用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)具體的評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量的主要資料使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差s）表示，并使用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，用百分比（%）表示。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

對(duì)選取的標(biāo)本進(jìn)行評(píng)定和對(duì)比分析，結(jié)果5000例病例標(biāo)本中滿意的標(biāo)本為4872例標(biāo)本具有滿意的結(jié)果，滿意率達(dá)到了97.44%；不滿意標(biāo)本為128例，所占比例為2.56%，兩項(xiàng)結(jié)果的比較差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)造成標(biāo)準(zhǔn)不滿意的相關(guān)因素進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其主要的原因是由于染色過(guò)程中出現(xiàn)的問(wèn)題，其中染色出現(xiàn)不均勻現(xiàn)象的有58例占（45.31%），染色出現(xiàn)不清晰現(xiàn)象的占30例占（23.43%），在染色的過(guò)程中出現(xiàn)組織切片脫落情況的有21例占（16.40%），總計(jì)為85.14%。與其他的原因進(jìn)行比較差異具有一定的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 不滿意標(biāo)本原因統(tǒng)計(jì)分析

3 討 論

本次研究的5000例病例患者中，有4872例標(biāo)本具有滿意的結(jié)果，滿意率達(dá)到了97.44%，充分證明了HE染色方法在臨床病理中的應(yīng)用具有一定的滿意效果，其中有128例不滿意切片，通過(guò)分析后發(fā)現(xiàn)大部分都與HE染色具有直接的關(guān)系，說(shuō)明了HE 染色方法在病理研究中的應(yīng)用還具有一定的缺陷和不足，通過(guò)對(duì)不滿意標(biāo)本進(jìn)行深入的分析和研究，發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)染色不夠均勻的58例標(biāo)本為相同時(shí)間段發(fā)生的，因此可以排除在操作過(guò)程中的時(shí)間和環(huán)境以及條件等相關(guān)因素的影響。在標(biāo)本制作的過(guò)程中對(duì)使用的二甲苯的標(biāo)本進(jìn)行檢查和分析，其分析的結(jié)果表明二甲苯在使用之前并沒有經(jīng)過(guò)相關(guān)的試驗(yàn)對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)此問(wèn)題后對(duì)二甲苯進(jìn)行了重新的對(duì)比和分析，并對(duì)相關(guān)的操作程序和步驟進(jìn)行了調(diào)整，盡量避免出現(xiàn)更多的不滿意的指標(biāo)。對(duì)染色不清晰的30例標(biāo)本情況進(jìn)行檢查和分析后發(fā)現(xiàn)，由于在標(biāo)本在清洗的過(guò)程中清洗的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，影響了標(biāo)本的定型程度；21例標(biāo)本染色過(guò)程中組織切片脫落的主要原因是由于脫蠟的時(shí)間較長(zhǎng)、這些情況的發(fā)生充分的說(shuō)明了在使用HE染色方法對(duì)臨床病理診斷分析的過(guò)程中具有一定的復(fù)雜性和偶然性。經(jīng)過(guò)本文的研究發(fā)現(xiàn)在使用HE染色方法對(duì)臨床病理進(jìn)行診斷和分析的過(guò)程中細(xì)胞核的著色是影響HE染色的關(guān)鍵性因素，細(xì)胞核的著色是染色劑滲透到細(xì)胞核中的必要過(guò)程，并也是細(xì)胞中的酸性及堿性物質(zhì)與染色劑的酸堿性進(jìn)行有效作用的體現(xiàn)，在染色的過(guò)程中對(duì)操作人員的要求較高，并且周圍的濕度和溫度以及空氣的流動(dòng)都能夠?qū)ζ湓斐梢欢ǖ挠绊?。另外在?xì)胞核著色的過(guò)程中時(shí)間也是非常重要的影響因素，如果在操作的過(guò)程中時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致染色不夠清晰，并對(duì)操作的具體步驟產(chǎn)生一定的影響。對(duì)于標(biāo)本中6例受污染的標(biāo)本情況進(jìn)行檢查和分析后發(fā)現(xiàn)，其主要污染的原因主要來(lái)自外部環(huán)境，這充分說(shuō)明了污染的主要原因來(lái)自標(biāo)本本身，并且在標(biāo)本制作的之前就已經(jīng)被污染，這就要求在標(biāo)本采集和運(yùn)輸?shù)倪^(guò)程中一定要進(jìn)行嚴(yán)格的保護(hù)，受到污染的標(biāo)本在病理分析和診斷上并沒有一定的價(jià)值，需要相關(guān)科室對(duì)標(biāo)本采集和運(yùn)送的環(huán)節(jié)給與一定的重視[5-7]。綜上所述，利用HE染色方法對(duì)臨床病理進(jìn)行診斷具有非常重要的價(jià)值，當(dāng)前還沒有更好的方法來(lái)取代此方法，HE染色方法在具體的操作過(guò)程中具有一定復(fù)雜性，并且要求標(biāo)本制作工作人員在操作的過(guò)程中要嚴(yán)格按照規(guī)范來(lái)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行制作，并對(duì)標(biāo)本的制作情況進(jìn)行密切的關(guān)注，這樣才能充分的保證病理標(biāo)本制作的滿意程度，為患者的病理診斷提供準(zhǔn)確可靠的依據(jù)，因此，HE染色方法在臨床病理診斷中具有一定的使用價(jià)值，值得在臨床上進(jìn)行推廣的使用。