化學(xué)發(fā)光法和TPPA試驗(yàn)檢測(cè)梅毒抗體的比較及陽(yáng)性符合率分析

殷麗麗，姜繁明，于小鷗

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，遼寧沈陽(yáng)110001）

梅毒是由梅毒螺旋體（Treponema pallidum，TP）感染引起的慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病，在我國(guó)被列為乙類傳染病，尚無(wú)有效疫苗預(yù)防。近年來(lái)我國(guó)梅毒發(fā)病率有明顯上升趨勢(shì)，防治工作面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)[1-2］。由于其病程長(zhǎng)，治療不及時(shí)易造成全身多器官損害，因此早期準(zhǔn)確診斷對(duì)患者的治療和預(yù)后至關(guān)重要[3］。梅毒血清學(xué)檢測(cè)是診斷梅毒的一種重要的輔助檢查，根據(jù)所用抗原不同分為非特異性抗體檢測(cè)和特異性抗體檢測(cè)兩大類，由于非特異性抗體檢測(cè)易出現(xiàn)生物學(xué)假陽(yáng)性，因此特異性抗體檢測(cè)在梅毒診斷中更具優(yōu)勢(shì)。目前我院梅毒特異性抗體檢測(cè)項(xiàng)目包括化學(xué)發(fā)光微粒子免疫測(cè)定（Chemiluminescent microparticle immunoassay，CMIA）和梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（Treponema pallidum particle agglutination，TPPA）兩種。TPPA試驗(yàn)是目前國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室普遍采用的梅毒確證試驗(yàn)。CMIA法是近年興起的一種高通量檢測(cè)方法，在住院患者術(shù)前及輸血前梅毒血清學(xué)篩查中應(yīng)用廣泛。本研究以TPPA試驗(yàn)作為梅毒抗體血清學(xué)檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)分析809例受檢者CMIA法和TPPA試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果，評(píng)價(jià)兩種方法靈敏度、特異度等指標(biāo)的差異。分析兩種方法的陽(yáng)性符合率及結(jié)果不符合的原因。通過(guò)受試者工作特征曲線（ROC）分析，確定CMIA法對(duì)梅毒診斷效能最大時(shí)的S/CO截?cái)嘀?，以期為梅毒?shí)驗(yàn)室診斷項(xiàng)目的選擇和結(jié)果解釋提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 標(biāo)本來(lái)自2017年5月—2017年7月于我院就診的門(mén)診和住院患者809例，其中男430例，女 379例，年齡 2～95歲，平均（42.36±16.15）歲。經(jīng)患者及家屬同意，收集患者梅毒血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果、病史等臨床資料。

1.2 檢測(cè)方法 采用美國(guó)雅培I2000化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析儀及配套TP試劑、日本富士瑞必歐株式會(huì)社TPPA試劑盒。對(duì)809例受檢者的血清樣本同時(shí)進(jìn)行CMIA法和TPPA檢測(cè)，所有操作均嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，試驗(yàn)中做好室內(nèi)質(zhì)控和陰陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果判定方法：CMIA法以S/CO值≥1.0判定為陽(yáng)性；TPPA試驗(yàn)以致敏粒子孔出現(xiàn)不規(guī)則凝集沉淀判定為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，對(duì)計(jì)數(shù)資料以（n/%）表示，數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)CMIA法S/CO值繪制ROC曲線，計(jì)算曲線下面積，確定CMIA法對(duì)梅毒診斷效能最大時(shí)的S/CO截?cái)嘀怠?/p>

2 結(jié)果

2.1 CMIA法和TPPA試驗(yàn)檢測(cè)梅毒抗體結(jié)果 809例受檢者中，CMIA法檢測(cè)陽(yáng)性者327例，陽(yáng)性率為40.42%；TPPA試驗(yàn)檢測(cè)陽(yáng)性者294例，陽(yáng)性率為36.34%，兩種方法陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.42，P＞0.05）。以 TPPA 試驗(yàn)為金標(biāo)準(zhǔn)，CMIA 法的靈敏度為97.96%，特異度為92.43%。

2.2 CMIA法與TPPA試驗(yàn)的陽(yáng)性符合率 在CMIA法呈陽(yáng)性結(jié)果的327例受檢者中，TPPA試驗(yàn)呈陽(yáng)性結(jié)果者288例，結(jié)合病史及其他實(shí)驗(yàn)室檢查均被確診為梅毒螺旋體感染。TPPA試驗(yàn)呈陰性結(jié)果者39例，后證實(shí)此39例CMIA法結(jié)果均為假陽(yáng)性。經(jīng)計(jì)算，CMIA法與TPPA試驗(yàn)的陽(yáng)性符合率為88.07%（288/327）。

2.3 不同S/CO值段CMIA法與TPPA試驗(yàn)的陽(yáng)性符合率 將327例CMIA法陽(yáng)性的檢測(cè)結(jié)果根據(jù)CMIA法的S/CO值分為8組，分別是1.0～3.0、3.0～6.0、6.0～10.0、10.0～15.0、15.0～20.0、20.0～25.0、25.0～30.0以及30.0以上組。在S/CO值為1.0至10.0的各組中，均出現(xiàn)TPPA陰性結(jié)果，而在S/CO值10.0以上的各組中，TPPA結(jié)果均呈陽(yáng)性，見(jiàn)表1。ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，當(dāng)CMIA法S/CO截?cái)嘀禐?.98時(shí)，敏感度為83.71%，特異度為94.93%，此時(shí)曲線下面積最大為0.941，即4.98為CMIA法的最佳診斷截?cái)嘀怠?/p>

表1 不同S/CO值段CMIA法和TPPA試驗(yàn)結(jié)果例（%）

2.4 不同年齡段CMIA法與TPPA試驗(yàn)的陽(yáng)性符合率 在327例受檢者中，20歲以下者15例，20～39歲者 115例，40～59歲者 132例，60～79歲者 57例，80～99歲者8例。經(jīng)計(jì)算，60歲者CMIA法與TPPA試驗(yàn)的陽(yáng)性符合率為90.84%，60歲以上者CMIA法與TPPA試驗(yàn)的陽(yáng)性符合率為76.92%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.60，P＜0.05），見(jiàn)表 2。

表2不同年齡段CMIA法和TPPA試驗(yàn)結(jié)果 例（%）

3 討論

梅毒螺旋體侵犯人體免疫系統(tǒng)后會(huì)刺激機(jī)體產(chǎn)生兩種抗體：非特異性抗類脂質(zhì)抗體和特異性梅毒螺旋體抗體，前者可與廣泛分布于組織中的類脂質(zhì)抗原發(fā)生非特異性反應(yīng)。目前針對(duì)非特異性抗類脂質(zhì)抗體的血清學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目包括快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR）和甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（TRUST）等。針對(duì)特異性梅毒螺旋體抗體的檢測(cè)項(xiàng)目包括CMIA、TPPA、梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA）、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）、梅毒螺旋體膠體金試驗(yàn)（CGT）和蛋白印記試驗(yàn)（WB）等[4-5］。非特異性抗體檢測(cè)所用抗原的性質(zhì)以及用肉眼判讀結(jié)果，在檢測(cè)中容易造成生物學(xué)假陽(yáng)性[6-7］。另有研究顯示在60歲以上老年人或患有自身免疫性疾病、惡性腫瘤、感染性疾病患者中易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果[8-9］。由此可見(jiàn)，特異性抗體檢測(cè)在梅毒診斷中更具優(yōu)勢(shì)，因此本研究選擇目前我院開(kāi)展的兩種梅毒特異性抗體檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行了深入分析。

TPPA是將梅毒螺旋體Nichols株的精制菌體成分包被在明膠顆粒上，與血清中的梅毒抗體特異性結(jié)合出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)。該法對(duì)梅毒特異性抗體的檢測(cè)具有高度敏感性和特異性，是目前國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用的梅毒確認(rèn)試驗(yàn)[10-12］。但由于操作繁瑣，反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，肉眼判讀結(jié)果主觀性強(qiáng)，結(jié)果不易保存以及難以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等缺點(diǎn)，導(dǎo)致其不適合大樣本檢測(cè)而使臨床應(yīng)用有局限性。由于TPPA試驗(yàn)的高敏感性和特異性，在本研究中將其作為梅毒特異性抗體檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。

CMIA是國(guó)內(nèi)近年應(yīng)用的一種新的高通量檢測(cè)方法，對(duì)各期梅毒均有很高的靈敏度和特異度[13］。其檢測(cè)基于標(biāo)本中的梅毒特異性抗體、包被重組梅毒抗原（TpN15，TpN17，TpN47）的微粒子以及酶標(biāo)記的抗人IgG和IgM單克隆抗體三者形成的免疫復(fù)合物[14］，使用兩步法試劑，避免鉤狀效應(yīng)產(chǎn)生。從檢測(cè)到結(jié)果判定均由儀器自動(dòng)完成，人為干擾少，結(jié)果較為客觀，因此有廣泛的應(yīng)用前景。在本研究中，CMIA法的靈敏度為97.96%，特異度為92.43%，其診斷效能與金標(biāo)準(zhǔn)TPPA試驗(yàn)接近，是較好的梅毒篩查方法。但也發(fā)現(xiàn)CMIA法在檢測(cè)中尤其是低值標(biāo)本中存在假陽(yáng)性情況。如本研究結(jié)果3中所示，同時(shí)進(jìn)行CMIA法和TPPA試驗(yàn)，當(dāng)CMIA法S/CO值介于1.0～3.0之間而判定結(jié)果呈陽(yáng)性時(shí)，僅有一半標(biāo)本TPPA試驗(yàn)陽(yáng)性。從表1可以看出，當(dāng)S/CO值＞10.0時(shí)，CMIA法和TPPA試驗(yàn)的陽(yáng)性符合率達(dá)到100%。當(dāng)S/CO值＜10.0時(shí)，CMIA法和TPPA試驗(yàn)的結(jié)果存在不一致的情況，且S/CO值越小，二者的陽(yáng)性符合率就越低，這與Li等[15］的研究結(jié)果一致。有報(bào)道指出應(yīng)用CMIA法測(cè)定梅毒特異性抗體的最佳cut off值應(yīng)設(shè)定為3.125，這樣在保留較高敏感性的同時(shí)特異性會(huì)顯著提高，從而使檢測(cè)的準(zhǔn)確性提高[16］。在本研究中當(dāng)cut off值設(shè)定為4.98時(shí)可獲得最大診斷效能，與上述報(bào)道略有差異，可能是由于樣本選擇等原因所致。本研究結(jié)果提示：應(yīng)用CMIA法檢測(cè)梅毒特異性抗體時(shí)，對(duì)于低值標(biāo)本，尤其是S/CO值介于1.0～3.0之間的標(biāo)本應(yīng)引起足夠重視，必要時(shí)用其他方法復(fù)檢。從結(jié)果4中可以看出，患者年齡越大，CMIA法與TPPA試驗(yàn)的陽(yáng)性符合率越低，即CMIA法越容易出現(xiàn)假陽(yáng)性。60歲以上者與60歲以下者相比，CMIA法與TPPA試驗(yàn)的陽(yáng)性符合率顯著降低，這與Liu等[17］的研究結(jié)果基本一致，其研究顯示80歲以上老年人群中梅毒抗體假陽(yáng)性率顯著升高。分析可能是由于老年人免疫功能異常、本身存在某些基礎(chǔ)疾病或者體內(nèi)有其他螺旋體共生導(dǎo)致，還需在日后工作中深入研究予以明確。

梅毒抗體的血清學(xué)檢測(cè)對(duì)梅毒診斷和治療起到至關(guān)重要的作用，因此選擇適宜的檢測(cè)方法和策略尤為關(guān)鍵。CMIA法因其較高的靈敏度和特異度可廣泛用于梅毒特異性抗體篩查，但在應(yīng)用時(shí)應(yīng)重視低值陽(yáng)性結(jié)果以及老年人的陽(yáng)性結(jié)果，必要時(shí)重復(fù)檢測(cè)或聯(lián)合TPPA檢測(cè)以除外假陽(yáng)性，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。