妊娠早期MTHFR C677T基因多態(tài)性與同型半胱氨酸的相關(guān)分析

白 微 唐少華 蔡文品

1.溫州醫(yī)科大學(xué)（325000）2.浙江省溫州市中醫(yī)院

妊娠早期母體狀況對胎兒發(fā)育影響重大，其中母體同型半胱氨酸（HCY）與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、子癇前期、胎兒畸形、神經(jīng)管缺陷等密切相關(guān)。5，10－亞甲基四氫葉酸還原酶 （MTHFR）是HCY代謝通路的關(guān)鍵酶，參與HCY轉(zhuǎn)變?yōu)榈鞍彼岬倪^程，從而減低血液中HCY的水平。MTHFR基因的多態(tài)性將導(dǎo)致其編碼的酶活性的缺失或降低，是導(dǎo)致體內(nèi)HCY水平升高的重要因素。該基因位點C677T堿基突變非常常見，在人群中有3種基因型（CC，CT，TT）并已被證實與HCY水平相關(guān)。本研究通過檢測早期妊娠婦女的MTHFR基因型及血HCY濃度，了解本地區(qū)MTHFR基因多態(tài)性分布情況，探討其與HCY的關(guān)系，為臨床早期妊娠風(fēng)險評估提供依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2015年6月—2016年7月來浙江省溫州市中醫(yī)院行孕早期檢查的妊娠婦女1052例，年齡（30.7±5.6）歲，均為漢族。無高血壓、糖尿病、腎臟疾病等基礎(chǔ)疾病。本研究獲溫州市中醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有婦女均簽署知情同意書。

1.2 檢測

1.2.1 基因多態(tài)性 空腹采集孕婦外周靜脈血2ml，乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝。提取全血的全基因DNA，借助熒光PCR技術(shù)，利用探針可與DNA模板特異性結(jié)合的特點，通過熒光的不同分辨樣本的基因型。試劑盒購自深圳奧薩醫(yī)療有限公司。

1.2.2 HCY 空腹采集外周靜脈血3ml，待凝固后離心，留取血清。采用循環(huán)酶法，以羅氏全自動生化分析儀進(jìn)行檢測。

1.3 統(tǒng)計方法

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。對基因型在人群中的分布行Hardy－Weinberg平衡檢驗，基因型的分布頻率用百分?jǐn)?shù)表示，本地區(qū)與其他地區(qū)的頻率比較采用卡方檢驗并兩兩比較；HCY的濃度用（珚x±s）表示，比較采用方差分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MTHFR C677T 基因型檢出

分析1052例樣本，檢出CC型443例，占42.1% ；CT型469例，占44.6%；TT型140例，占13.3%；等位基因C、T的檢出率分別為64.4%、35.6%。對該數(shù)據(jù)進(jìn)行Hard－Weinberg平衡分析，MTHFR C677T在該人群中的分布處于H－W平衡狀態(tài)（χ2＝0.41，P＝0.814），樣本具有本區(qū)域群體代表性。

2.2 MTHFR C677T 基因型分布特點

經(jīng)卡方檢驗兩兩比較，本地區(qū)基因型頻率與杭州、上海、鎮(zhèn)江、鄭州、臨沂、瓊海等地區(qū)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，與湘潭、松滋等地區(qū)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1 各地區(qū)基因型頻數(shù)及比較［例（%）］

2.3 基因型與血HCY濃度的比較

經(jīng)方差分析，CC、CT、TT基因型HCY濃度分別為（5.8 ±1.5 ）μmol／L、（5.7 ±1.2）μmol／L、（6.4±2.7）μmol／L ，有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）；兩兩比較，CC型和CT型與TT型有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。

3 討論

MTHFR C677T位點位于第一號染色體MTHFR基因第5個外顯子上，C677T基因的CT雜合型突變可使酶的活性下降35%，TT純合型突變更可使酶的活性下降70%［9］?；蜃儺愐餒CY增高，刺激血管壁引起動脈血管損傷，導(dǎo)致炎癥和管壁的斑塊形成。Henk等［10］研究指出發(fā)生C677T純合突變的母親其出生神經(jīng)管畸形（NTDs）胎兒的危險性可提高60%，MTHFR基因多態(tài)性與神經(jīng)管畸形、唐氏綜合征、先天性心臟病、唇腭裂等出生缺陷都有顯著相關(guān)性。妊娠期婦女血液可呈高凝狀態(tài)，高HCY可損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，增加胎盤血栓形成的風(fēng)險，使胎兒供血不足，甚而導(dǎo)致流產(chǎn)、妊娠高血壓綜合征、胎兒生長受限、早產(chǎn)等。Kosmas等［11］應(yīng)用 meta分析了23篇關(guān)于MTHFR基因C677T突變與妊娠高血壓疾病的研究文獻(xiàn)（包括3169例妊娠期高血壓疾病患者和3044名對照組孕婦），發(fā)現(xiàn)攜帶T等位基因的孕婦發(fā)生妊娠高血壓疾病的風(fēng)險增加1.2倍。鐘慧軍等［12］研究發(fā)現(xiàn)，中國寧夏地區(qū)漢族人群帶有TT基因型個體發(fā)生重復(fù)流產(chǎn)的危險度明顯增高，是CC基因型個體的8.4倍。楊文方等［13］研究發(fā)現(xiàn)TT基因型個體發(fā)生早期流產(chǎn)的危險度顯著增高，是CC基因型個體的3.6倍，CT基因型個體發(fā)生早期流產(chǎn)的危險度是CC基因型個體的3.3倍。

本文資料MTHFR C677T基因3種基因型CC型、CT型、TT與國內(nèi)大部分地區(qū)的基因型頻率有統(tǒng)計學(xué)差異，與鎮(zhèn)江、鄭州兩市差異較大，而與湘潭、松滋地區(qū)較相似，MTHFR C677T具有本地區(qū)特征性，TT基因型頻率在各地區(qū)處于中等水平。目前溫州地區(qū)孕婦孕早期統(tǒng)一于社區(qū)醫(yī)院建冊，社區(qū)醫(yī)院應(yīng)加大宣傳力度，建議孕早期有風(fēng)險的婦女進(jìn)行MTHFR基因篩查。本研究發(fā)現(xiàn)，溫州地區(qū)MTHFR C677T基因型與血HCY濃度的關(guān)聯(lián)性分析，TT基因型個體的血HCY濃度高于CC基因型和CT基因型，CC基因型和CT基因型差異不大。因此，建議臨床將MTHFR基因作為孕早期篩查項目，對TT基因型孕婦從妊娠早期開始就要密切關(guān)注血HCY濃度及其他各指標(biāo)的變化，以評估孕婦血液狀態(tài)及胎兒生長發(fā)育，指導(dǎo)早期妊娠時葉酸服用。本研究不足之處在于只針對妊娠早期進(jìn)行研究，后期應(yīng)擴大研究范圍，對妊娠各孕周進(jìn)行研究比較。