辣木葉粉對鵪鶉生產(chǎn)性能、免疫功能及血清抗氧化指標(biāo)的影響

王志剛，徐超，李霞輝，林詩宇，杜夏夏，冉崇霖，舒剛

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，成都 611130）

辣 木（Moringa oleiferaLam.）為 辣 木 科（Moringaceae）辣木屬（Moringa）植物，原產(chǎn)于印度，是一種有特殊經(jīng)濟(jì)價值且尚未被充分開發(fā)的多功能樹種，近年來在我國西南地區(qū)廣泛種植[1]。辣木干葉中粗蛋白含量高達(dá)30.3%，并含有19種氨基酸、17種脂肪酸及多種微量元素[2]。辣木葉不僅營養(yǎng)價值較高，而且具有豐富的藥理活性，研究表明：辣木葉具有抗氧化[3]、降血糖[4]、降血脂[5]、抗菌[6]等功能。目前，辣木葉的開發(fā)利用愈發(fā)受到研究者們的重視，其中，將其開發(fā)為新型健康功能性飼料和綠色飼料添加劑的研究是一個重點(diǎn)。本文探討了在鵪鶉養(yǎng)殖飼料中添加不同比例辣木葉粉對鵪鶉生長性能、免疫功能及血清抗氧化指標(biāo)的影響，主要目的是解決鵪鶉養(yǎng)殖中對抗生素的過度依賴問題，尋求一種高效、安全的飼料添加劑來替代抗生素，為辣木葉粉作為鵪鶉飼料添加劑的應(yīng)用推廣提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與飼糧

實(shí)驗(yàn)用辣木葉由四川通江縣石墩子有限公司提供，品種為印度改良種辣木（Moringa oleiferaLam.），將收集的盛產(chǎn)期新鮮辣木葉放于60℃烘箱中烘干，粉碎機(jī)粉碎后，過60目篩，備用?；A(chǔ)日糧為玉米-豆粕型日糧，購自眉山金字塔飼料有限公司（四川），其組成和營養(yǎng)成分見表1。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

酶標(biāo)儀（Thermo公司，美國）；高速冷凍離心機(jī)（Thermo公司，美國）；恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）；分析天平（賽多利斯公司，德國）；電子秤等。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)成分Table 1 Composition and nutritional ingredient of basal diet

1.3 實(shí)驗(yàn)動物分組與飼養(yǎng)管理

采用單因子完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，選取7日齡雌性黃羽鵪鶉1 600只（購自眉山佳業(yè)鵪鶉養(yǎng)殖專業(yè)合作社），分為4個處理組，每組4個重復(fù)，每個重復(fù)100只，處理組按照0%、2%、4%和8%比例添加辣木葉粉于基礎(chǔ)日糧中，即空白組、2%辣木葉組、4%辣木葉組和8%辣木葉組，實(shí)驗(yàn)期28 d。飼養(yǎng)方式采用三層立體式籠養(yǎng)，自由采食和飲水，舍內(nèi)溫度、濕度、光照均等嚴(yán)格按照常規(guī)飼養(yǎng)管理要求進(jìn)行，常規(guī)免疫。辣木葉粉及各組飼糧主要營養(yǎng)水平見表2。

表2 辣木葉粉及各組飼糧處理組主要營養(yǎng)成分（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 2 Nutritional composition of diet in M.oleifera leaf powder and each treatment(dry material basis)

1.4 生產(chǎn)性能測定

實(shí)驗(yàn)期間觀察記錄各實(shí)驗(yàn)組鵪鶉的生理和精神狀況，記錄死淘數(shù)；準(zhǔn)確記錄每日每個重復(fù)的給料量，分別在鵪鶉7、14、21、28、35日齡時將其空腹處理12 h，于次日早晨以每個重復(fù)為單位逐組稱量，同時稱取每個重復(fù)組的剩余飼料量，并計(jì)算各周的平均日采食量、日增質(zhì)量和料質(zhì)量比。

1.5 免疫指標(biāo)測定

于實(shí)驗(yàn)14、28 d后稱量，每個重復(fù)隨機(jī)抽取3只鵪鶉，頸靜脈采血，收集后于室溫靜置2 h，4 000 r/min離心10 min，分離血清，于－20℃條件下保存，待測。隨后將鵪鶉處死[按照四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物福利與使用委員會的法律和指南（批準(zhǔn)號2012—024）執(zhí)行]，解剖，取胸腺、脾臟和法氏囊，迅速稱其鮮質(zhì)量。

1.5.1 免疫器官指數(shù)計(jì)算

免疫器官指數(shù)=免疫器官鮮質(zhì)量/g÷活體質(zhì)量/kg。

1.5.2 新城疫抗體測定

按照GB/T 16550—2008新城疫診斷技術(shù)方法，采用血凝和血凝抑制實(shí)驗(yàn)測定21和35日齡鵪鶉新城疫抗體效價水平，抗體水平以log2x表示。

1.5.3 血清蛋白和細(xì)胞因子測定

測定鵪鶉35日齡時血清總蛋白（total protein,TP）和白蛋白（albumin,Alb）含量。分別按照試劑盒說明，采用考馬斯亮藍(lán)法和溴甲酚綠比色法進(jìn)行測定，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

按照試劑盒說明，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定鵪鶉35日齡時血清白介素2（IL-2）和γ-干擾素（IFN-γ）含量，試劑盒購自武漢伊萊瑞特生物科技有限公司。

1.6 血清抗氧化指標(biāo)檢測

按照試劑盒說明檢測血清總抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）、總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase,T-SOD）活力、谷胱甘肽過氧化氫酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）活力及丙二醛（malondialdehyde,MDA）的含量，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.7 數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 17.0軟件中的方差分析法（ANOVA）進(jìn)行單因素方差分析，用最小顯著差異（least significant difference,LSD）法進(jìn)行兩兩比較檢驗(yàn)，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 日糧中添加辣木葉粉對鵪鶉生產(chǎn)性能的影響

由表3可知：2%辣木葉組和4%辣木葉組15日齡、21日齡、28日齡鵪鶉體質(zhì)量均顯著高于空白組和8%辣木葉組（P＜0.05）；4%辣木葉組35日齡體質(zhì)量顯著高于空白組（P＜0.05）；8%辣木葉組和空白組相比各階段體質(zhì)量均無顯著性差異（P＞0.05）。平均日采食量方面，8%辣木葉組在7～14日齡顯著低于其他各組（P＜0.05），在15～21日齡顯著低于2%辣木葉組和4%辣木葉組（P＜0.05）。平均日增質(zhì)量方面，2%辣木葉組在7～14、15～21、22～28日齡和7～35日齡均顯著高于空白組（P＜0.05）；4%辣木葉組在實(shí)驗(yàn)期各個階段均顯著高于空白組（P＜0.05）。料質(zhì)量比方面，2%辣木葉組在7～14、15～21、22～28日齡和7～35日齡均顯著低于空白組（P＜0.05）；4%辣木葉組在實(shí)驗(yàn)期各個階段均顯著低于空白組（P＜0.05）；8%辣木葉組在7～14、15～21和7～35日齡均顯著低于空白組（P＜0.05）。

表3 添加辣木葉粉對鵪鶉生產(chǎn)性能的影響（n=1 600）Table 3 Effects of M.oleifera leaf powder on production performance of quails(n=1 600)

2.2 日糧中添加辣木葉粉對鵪鶉免疫器官指數(shù)的影響

由表4可知，各實(shí)驗(yàn)組與空白組相比，免疫器官指數(shù)均有增長趨勢。在21日齡時，4%辣木葉組和8%辣木葉組脾臟指數(shù)顯著高于空白組（P＜0.05）；8%辣木葉組法氏囊指數(shù)顯著高于空白組和2%辣木葉組（P＜0.05）；各實(shí)驗(yàn)組與空白組相比胸腺指數(shù)均有不同程度的提高，但無顯著性差異（P＞0.05）。在35日齡時，4%辣木葉組和8%辣木葉組脾臟指數(shù)顯著高于空白組（P＜0.05）；4%和8%辣木葉組法氏囊指數(shù)均顯著高于空白組（P＜0.05）；8%辣木葉組胸腺指數(shù)顯著高于空白組和2%辣木葉組（P＜0.05）。

2.3 日糧中添加辣木葉粉對鵪鶉新城疫抗體水平的影響

由表5可知，各實(shí)驗(yàn)組新城疫抗體水平與空白組相比均有不同程度的提高。21日齡時，8%辣木葉組顯著高于空白組（P＜0.05）；2%、4%辣木葉組與空白組相比差異不顯著（P＞0.05）。35日齡時，4%辣木葉組和8%辣木葉組顯著高于空白組（P＜0.05）；2%辣木葉組與空白組相比差異不顯著（P＞0.05）。

表4 添加辣木葉粉對鵪鶉免疫器官指數(shù)的影響（n=48）Table 4 Effects of M.oleifera leaf powder on the immune organ indices of quails(n=48) g/kg

表5 添加辣木葉粉對鵪鶉新城疫抗體水平的影響（n=48）Table 5 Effects of M.oleifera leaf powder on Newcastle disease antibody level of quails(n=48)

2.4 日糧中添加辣木葉粉對鵪鶉血清蛋白含量和細(xì)胞因子的影響

由表6可知：各實(shí)驗(yàn)組與空白組相比血清總蛋白含量均無顯著性差異（P＞0.05）；實(shí)驗(yàn)組與空白組相比血清白蛋白含量有提高的趨勢，但組間無顯著性差異（P＞0.05）；各實(shí)驗(yàn)組白介素2和γ-干擾素含量與空白組相比均有提高的趨勢，其中，4%辣木葉組和8%辣木葉組白介素2和γ-干擾素含量都顯著高于空白組（P＜0.05）。

表6 添加辣木葉粉對鵪鶉血清蛋白和細(xì)胞因子的影響（n=48）Table 6 Effects of M.oleifera leaf powder on serum proteins and cytokines of quails(n=48)

2.5 日糧中添加辣木葉粉對鵪鶉血清抗氧化能力的影響

由表7可知，各實(shí)驗(yàn)組與空白組相比，血清抗氧化能力均有不同程度的增強(qiáng)。21日齡時，4%辣木葉組和8%辣木葉組總超氧化物歧化酶活力均顯著高于空白組（P＜0.05），且丙二醛含量顯著低于空白組（P＜0.05）；8%辣木葉組總抗氧化能力顯著高于空白組（P＜0.05）；各組谷胱甘肽過氧化物酶活力無顯著性差異（P＞0.05）。35日齡時，4%辣木葉組和8%辣木葉組總抗氧化能力均顯著高于空白組（P＜0.05）；2%、4%、8%辣木葉組丙二醛含量均顯著低于空白組（P＜0.05）；各實(shí)驗(yàn)組谷胱甘肽過氧化物酶含量與空白組相比均有提高，但無顯著性差異（P＞0.05）。

表7 添加辣木葉粉對鵪鶉血清抗氧化指標(biāo)的影響（n=48）Table 7 Effects of M.oleifera leaf powder on serum antioxidant indexes of quails(n=48)

3 討論

3.1 添加辣木葉粉對鵪鶉生產(chǎn)性能的影響

辣木葉中含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素和礦物質(zhì)等，將其作為飼料添加劑用于畜禽生產(chǎn)保健的實(shí)驗(yàn)已有不少報道[7]。習(xí)欠云等[8]報道，用辣木葉粉逐步替代達(dá)到8%的飼糧對蛋雞的生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、蛋黃營養(yǎng)成分、血清生化指標(biāo)等均無不良影響。李樹榮等[9]報道，用添加辣木葉粉的飼糧飼喂狄高雞，對促進(jìn)體質(zhì)量增加和降低料肉比方面效果顯著，且添加量以10%～15%為最佳，但同時發(fā)現(xiàn)，辣木葉作為添加劑，狄高雞的前期生長速率比后期要慢許多。本實(shí)驗(yàn)表明，日糧中添加不同比例的辣木葉粉對鵪鶉的平均日采食量無顯著影響，添加2%和4%辣木葉粉可顯著提高鵪鶉的體質(zhì)量和平均日增質(zhì)量，顯著降低各個日齡階段的料質(zhì)量比。這可能是因?yàn)槔蹦救~粉中豐富的營養(yǎng)物質(zhì)促進(jìn)了幼期鵪鶉腸道的生長發(fā)育，從而提高了鵪鶉的消化吸收功能。但是本實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，當(dāng)辣木葉粉添加量提高至8%時，鵪鶉采食量、平均日增質(zhì)量有一定的降低，特別是在鵪鶉7～21日齡階段。這與李樹榮等[9]的報道類似。筆者認(rèn)為，對于消化系統(tǒng)發(fā)育尚不完善的幼鵪鶉而言，過多的辣木葉粉添加量導(dǎo)致飼料中粗纖維增多，影響其對飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，隨著鵪鶉的生長，機(jī)體消化吸收能力增強(qiáng)，這種負(fù)面的影響也逐漸消除。

3.2 添加辣木葉粉對鵪鶉免疫功能的影響

免疫器官的發(fā)育情況和功能強(qiáng)弱直接決定了禽類的免疫水平，免疫器官指數(shù)是反映免疫器官生長發(fā)育狀況的重要指標(biāo)[10]。據(jù)報道，植物糖苷類可提高肉雞免疫器官質(zhì)量和指數(shù)[11]。本實(shí)驗(yàn)表明，添加不同水平辣木葉粉對鵪鶉21日齡和35日齡時免疫器官指數(shù)均有一定的增長趨勢，特別是添加4%和8%辣木葉粉對脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)提高效果顯著，說明辣木葉粉有促進(jìn)鵪鶉免疫器官發(fā)育成熟的作用。研究表明，多種中藥對新城疫抗體水平有增強(qiáng)效果[12]。劉建平等[13]報道，將辣木和葛花多糖提取物通過飲水喂給白羽肉雞，顯著提高了41日齡時禽流感和新城疫抗體滴度。本實(shí)驗(yàn)表明：添加不同水平辣木粉對新城疫抗體水平均有不同程度的提高，這可能是因?yàn)槔蹦局械狞S酮類化合物具有抗菌、消炎、清除自由基等作用，提高了新城疫抗體的合成能力，從而增強(qiáng)了機(jī)體的特異性免疫功能。

細(xì)胞因子是細(xì)胞在刺激應(yīng)答時產(chǎn)生的小分子物質(zhì)，在免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[14]。白介素-2在傳遞信息，激活與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞，介導(dǎo)T、B細(xì)胞活化、增殖與分化及在炎癥反應(yīng)中起重要作用，γ-干擾素具有抗病毒、抗腫瘤、抗細(xì)胞增殖和免疫調(diào)節(jié)等作用[15]。VONGSAK等[16]發(fā)現(xiàn)，在辣木葉的乙醇提取物中含有的槲皮素3-O-葡萄糖苷、綠原酸和山柰酚3-O-葡萄糖苷有抑制中性粒細(xì)胞氧化反應(yīng)的作用，并且能夠抑制中性粒細(xì)胞的趨化性遷移、調(diào)節(jié)人體吞噬細(xì)胞的免疫反應(yīng)，這說明辣木葉有調(diào)節(jié)細(xì)胞活性的功能。本實(shí)驗(yàn)表明：添加辣木葉粉對血清白介素-2和γ-干擾素含量均有提高作用，且與辣木葉粉添加量呈量效關(guān)系，其中添加4%、8%辣木葉粉與空白組相比提高顯著。這可能是因?yàn)槔蹦救~中的黃酮和多糖類化合物通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的活性，提高了血清中免疫細(xì)胞因子的含量，從而對機(jī)體的非特異性免疫功能起到了增強(qiáng)的作用。

3.3 添加辣木葉粉對鵪鶉血清抗氧化能力的影響

辣木葉含有大量的抗氧化物質(zhì)，如抗壞血酸、類胡蘿卜素、多酚和黃酮類物質(zhì)，是有很強(qiáng)活性的天然抗氧化物質(zhì)[17]。梁鵬等[18]報道，在辣木莖葉中提取的多糖組分對羥自由基及超氧陰離子均有清除作用，半數(shù)抑制率分別是7.252 8和2.501 1 mg/mL。RATSHILIVHA等[19]報道，辣木葉的醇提取物有一定的自由基清除能力，半數(shù)抑制率為34.72～109.62 μg/mL。DAS等[3]報道，辣木葉提取物能有效減輕由高脂食物飼喂小鼠引起的肝損傷，同時顯著增加體內(nèi)抗氧化指數(shù)及較好地抑制脂質(zhì)過氧化情況。本實(shí)驗(yàn)表明，添加不同水平辣木葉粉能提高鵪鶉血清中總超氧化物歧化酶活力和總抗氧化能力，降低丙二醛含量，且與辣木葉粉添加量存在量效關(guān)系。以上結(jié)果說明，辣木葉粉對鵪鶉部分血清抗氧化指標(biāo)產(chǎn)生了積極的影響，從而增強(qiáng)了鵪鶉的抗氧化能力，提高了機(jī)體的抵抗力和抗衰老能力。

4 結(jié)論

在日糧中添加2%和4%辣木葉粉能提高鵪鶉的生產(chǎn)性能，添加4%和8%辣木葉粉能提高鵪鶉免疫器官指數(shù)、新城疫抗體效價水平和血清白介素-2、γ-干擾素含量，增強(qiáng)鵪鶉的特異性和非特異性免疫功能，添加4%和8%辣木葉粉能改善鵪鶉血清抗氧化指標(biāo)，提高機(jī)體抗氧化能力。建議鵪鶉飼料中辣木葉粉最佳添加量為4%。