松香法應(yīng)用于犬的全身肌肉干制標(biāo)本制作技術(shù)的探討

付玉潔,鄭從森,孫代鵬,沈 銘,王婷婷,鄧素丹,劉 田,胡玉苗

(1.沈陽工學(xué)院生命工程學(xué)院,遼寧 撫順 113122；2.沈陽森林動(dòng)物園管理有限公司,遼寧 沈陽 110165)

動(dòng)物干制標(biāo)本不僅能夠真實(shí)、直觀的反映動(dòng)物的骨骼、肌肉、腸道和內(nèi)臟器官等組織的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、分布和解剖位置[1],而且其作為教學(xué)材料和直觀教具在動(dòng)物解剖教學(xué)中也發(fā)揮著重要作用。目前,已報(bào)道的現(xiàn)有動(dòng)物干制標(biāo)本技術(shù)主要是高分子多聚物塑化法[2-3]、甘油半干燥法[4]、聚乙二醇-浸漬法[5]、低溫凍干法[1]等方法,而將松香應(yīng)用于動(dòng)物全身肌肉干制標(biāo)本的制作技術(shù)尚未見報(bào)道。筆者參考上述方法中以特定試劑置換取代組織細(xì)胞水分的技術(shù)原理；結(jié)合乙醇的固定置換脫水性；松節(jié)油的透化能力,松香的疏水防潮、防腐、防霉、驅(qū)蟲、黏性佳等特點(diǎn)；在解剖上利用這些特性,探索性將松香應(yīng)用于犬的全身干制標(biāo)本的制作。將犬尸體經(jīng)梯度乙醇脫水徹底,再用自制封固液滲入并置換組織細(xì)胞內(nèi)無水乙醇,隨著無水乙醇、松節(jié)油的揮發(fā),松香粘附滯留在組織細(xì)胞內(nèi)外,取代組織中水分,保存其組織形態(tài),達(dá)到長久防腐保存標(biāo)本目的。其制作過程介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料 成年雄性金毛犬,體重23 kg,犬瘟熱后期無繼續(xù)治療價(jià)值,由沈陽森林動(dòng)物園動(dòng)物醫(yī)院提供。

1.2 試劑及器械 速眠新Ⅱ注射液,購自敦化市圣達(dá)動(dòng)物藥品有限公司(批號(hào)：20170801)；37%甲醛溶液(分析純)、冰乙酸(分析純)、無水乙醇(分析純)、松節(jié)油(分析純),均購自沈陽瑞豐精細(xì)化學(xué)品有限公司；醇酸清漆、松香,購自撫順五金建材市場；防腐液(市售甲醛、水和冰乙酸的體積比為,市售甲醛∶水∶冰乙酸 =100∶870∶30)；封固液(松香、松節(jié)油和無水乙醇的質(zhì)量比為,松香∶松節(jié)油∶無水乙醇=12∶5∶4)；常規(guī)手術(shù)器械,購自上海聯(lián)輝醫(yī)療用品有限公司；常規(guī)玻璃儀器,購自泰州市飛躍玻璃儀器廠；塑料盆、收納箱,購自撫順生活用品批發(fā)商場。

1.3 取材及灌注定形 將犬保定確實(shí)后,以0.08 mL/kg·bw,肌肉注射“速眠新”深度麻醉。將頭、胸部和腹部用紗布吊起,四肢加以固定,使其處于自然站立狀態(tài)。沿頸正中線切開皮膚,找到并分離右側(cè)頸動(dòng)脈、頸靜脈,靜脈注射肝素500 IU/kg·bw,使全身肝素化；絲線結(jié)扎動(dòng)脈遠(yuǎn)心端、動(dòng)脈夾鉗夾近心端,間距3 cm～5 cm；在已封閉血管上,作V字形斜切口,將插管導(dǎo)管由切口向心臟方向插入,用絲線扎緊并固定放血插管,將放血插管出口連接盛血容器,緩慢放開動(dòng)脈夾,使犬失血致死。采用吊桶灌注法,向動(dòng)脈灌注防腐固定液,灌注量約為體重的20%,灌至皮下微呈水腫,口鼻涌出藥液,用手按壓有堅(jiān)實(shí)的彈性感時(shí)停止。最后通過肛門、口腔和胸腹腔作局部補(bǔ)充灌注。將犬以躍起姿勢固定在固定架上,放置3 d,使防腐固定液充分滲透到機(jī)體組織內(nèi)。

1.4 分離肌肉 將已硬化的犬尸體放于解剖臺(tái)上,用帶針頭氣筒刺入皮下鼓氣,使全身皮膚與肌肉分離,用手術(shù)器械逐塊分離皮膚與肌肉[6]。分離原則：順著肌纖維的方向分離肌肉,避免起毛,剔除貼敷于肌肉的淺筋膜、皮下脂肪和其他無關(guān)組織,保留淺在主要淋巴結(jié)。根據(jù)目的和需要顯示頭、頸、軀干和四肢的淺層主要肌肉和部分深層肌肉。具體操作方法：前肢,環(huán)切腕部皮膚,依次分離暴露腕尺側(cè)屈肌、指外側(cè)伸肌、指內(nèi)側(cè)伸肌、指總伸肌、腕橈側(cè)伸肌、臂肌、臂三頭肌、三角肌、岡上肌、岡下肌、肩胛下肌等。頸部和頭部,分離斜方肌、臂頭肌、胸頭肌等,切除一側(cè)部分頸部肌肉,暴露食管、氣管、頸靜脈、頸動(dòng)脈等；剔除頭頸部皮下脂肪、淺筋膜和多余結(jié)締組織,分離頭皮肌、頸皮肌、面肌、咬肌、頜下腺和顳?。画h(huán)切眼和口唇部皮膚,暴露眼闊匝肌及牙齒。軀干,分離背闊肌、胸肌、腹外斜肌、胸升肌、腹側(cè)鋸肌、肋間外肌、肋間肌、腹直肌等肌肉。后肢,分離闊筋膜張肌、臀中肌、臀淺肌、臀股二頭肌、半膜肌、半腱肌、股四頭肌、腓骨長肌、趾外側(cè)伸肌、腓腸肌等,環(huán)切跖部皮膚。剔除右側(cè)胸部部分第4至第10肋間肌肉,顯示肋外斜肌、肋間內(nèi)肌、肋骨、肺臟、心臟、膈肌等；作右腹壁切口,上部沿腰錐橫突頂端,前部沿肋弓,下部沿腹白線上5 cm～8 cm的平行線,后部沿骨盆腔前口切除腹壁,保留腹底壁肌肉,充分暴露出肝臟、腸管、腎臟等。應(yīng)當(dāng)注意的是：對(duì)已分離的肌肉應(yīng)裹以濕毛巾或紗布,防止肌肉失水皺縮。

1.5 防腐固定 將上述制作完成的犬全身肌肉標(biāo)本,完全浸沒于防腐固定液中,覆蓋一層脫脂棉,密封固定10 d,期間更換防腐固定液1次,換液時(shí)剔除肌肉表面殘存的筋膜、脂肪、結(jié)締組織。

1.6 梯度乙醇脫水 經(jīng)上述處理完畢,將犬依次在乙醇體積濃度為70%、85%、95%、100%、100%乙醇溶液中密封脫水處理7 d左右。以酒精比重計(jì)測得乙醇濃度不在變化為更換乙醇梯度原則。應(yīng)當(dāng)注意的是：犬肌肉組織脫水須徹底。

1.7 封固液滲透 按照封固液配方(質(zhì)量比,松香∶松節(jié)油∶無水乙醇 =12∶5∶4),在常溫下充分?jǐn)嚢枞芙獠⒚芊忪o置1 d,用雙層紗布過濾除去雜質(zhì)后待用。取出脫水完全的犬尸體,完全浸沒在封固液中,覆蓋一層脫脂棉,密封浸泡4 d左右。應(yīng)當(dāng)注意的是：須保持封固液在滲透過程中松香始終處于飽和狀態(tài),并以松節(jié)油滲至深層肌肉3/4厚度為宜。

1.8 固化定型 經(jīng)上述處理完畢,吊起,清理干凈殘余封固液,固定姿勢,擺放在陰涼通風(fēng)處干燥固化定型5 d,對(duì)犬的表層肌肉進(jìn)行修整。當(dāng)肌肉組織整體呈90%左右固化程度時(shí)刷漆包被。

1.9 刷漆包被 用紗布蘸取無水乙醇擦拭上述步驟犬的肌肉組織表面析出的白色松香結(jié)晶,均勻涂刷一遍清漆,通風(fēng)晾干4 d,再次涂刷一遍清漆,晾干后對(duì)標(biāo)本進(jìn)行最終整體修整,標(biāo)注各部位肌肉名稱,裝在玻璃罩中密封保存。

2 結(jié)果

通過松香法干制技術(shù),制得了犬的全身肌肉干制標(biāo)本,見中插彩版圖1。與原尸體相比,干制后標(biāo)本整體呈淡琥珀色,組織器官皺縮不明顯,可清晰反映出其肌肉、器官位置、解剖學(xué)構(gòu)造與形態(tài)特點(diǎn),標(biāo)本形態(tài)栩栩如生,適合在解剖教學(xué)中使用。經(jīng)長時(shí)間放置不曾出現(xiàn)蟲蛀、霉變、油脂滲出以及腐敗等現(xiàn)象,且標(biāo)本全身肌肉及相關(guān)組織固有形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰,提高了標(biāo)本質(zhì)量和保存效果,收到滿意效果。

圖1 松香法犬的全身肌肉干制標(biāo)本(右側(cè))

3 討論

3.1 制作原理和效果探討 松香法干制技術(shù)是依據(jù)相似相溶原理及松節(jié)油的透化性,將封固液中松香短時(shí)間內(nèi)快速滲入脫水徹底的肌肉組織細(xì)胞內(nèi),利用乙醇和松節(jié)油易揮發(fā)性加速松香對(duì)機(jī)體組織細(xì)胞的支撐和固化定形過程,有效減緩肌肉組織細(xì)胞皺縮,維持結(jié)構(gòu)形態(tài)特征[7],達(dá)到長期保存標(biāo)本的目的。從制作原理上,松香法干制標(biāo)本與高分子多聚物塑化標(biāo)本和甘油半干燥標(biāo)本,既相似又有區(qū)別；三者都是以特定試劑置換取代組織細(xì)胞水分的技術(shù)原理,松香法干制法是用松香,而高分子多聚物塑化法是高分子多聚物(如硅膠),甘油半干燥標(biāo)本是甘油。從效果上,松香法干制標(biāo)本與塑化標(biāo)本在外觀和形狀上相似,經(jīng)長時(shí)間放置組織器官皺縮不明顯,可清晰反映出其肌肉、器官等生理解剖位置,且基于松香的理化性質(zhì),標(biāo)本呈淡琥珀色且具有很強(qiáng)驅(qū)蟲、防腐、防潮和防滲脂效果,無需額外防腐措施,能有效解決標(biāo)本保存中蟲蛀、霉變、腐敗和滲脂等問題,是可以達(dá)到塑化標(biāo)本的防腐效果。從制作周期和成本上,松香法干制標(biāo)本最快可2個(gè)月內(nèi)完成,設(shè)備要求和試劑成本比高分子多聚物塑化標(biāo)本和甘油半干燥標(biāo)本便宜得多。此外,封固液配方組分簡單,可重復(fù)利用,適于制作中、大型動(dòng)物全身或局部組織的干制標(biāo)本制作,也便于實(shí)驗(yàn)教學(xué)和示教。

3.2 操作步驟中注意事項(xiàng) (1)采用皮下臌氣方法能使皮膚與肌層分開,既便于剝皮又減少肌肉損傷[6]；(2)分離肌肉時(shí),順著肌纖維的方向分離,避免起毛,對(duì)已分離肌肉要注意保濕,防止組織失水干化(因?yàn)榻铍?、筋膜和管道組織失水干化后會(huì)阻礙松香滲入)；(3)乙醇梯度脫水浸泡時(shí)間要足夠,材料脫水要徹底；(4)務(wù)必保證在封固液中滲透過程中松香始終處于飽和狀態(tài),滲透深度以深層肌肉3/4厚度處為宜；(5)配置封固液時(shí),應(yīng)選擇淺色、不宜結(jié)晶、雜質(zhì)少的松香,保證標(biāo)本的質(zhì)量和色澤。

4 小結(jié)

松香法與高分子多聚物塑化法和甘油半干燥法都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)。相較于塑化技術(shù)與甘油半干燥技術(shù),松香法干制技術(shù)更具資金優(yōu)勢,該標(biāo)本組織器官皺縮不明顯,組織形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰,適于普通院校制作中、大型動(dòng)物的全身或局部組織的干制標(biāo)本,也便于實(shí)驗(yàn)教學(xué)和示教；尤其是松香法干制標(biāo)本中松香、松節(jié)油和乙醇等試劑綠色無毒性,制得的標(biāo)本呈淡琥珀色,基于松香的理化性質(zhì),標(biāo)本具有較高皮膚親和性,防腐效果優(yōu)越。因此,松香法干制標(biāo)本技術(shù)是一種很好的動(dòng)物組織器官保存方法,很適合在動(dòng)物解剖教學(xué)中作為直觀教具和教學(xué)材料。