Skp2、P27和CyclinE在宮頸癌組織中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系

吳金訓(xùn)

福建省連江縣醫(yī)院病理科，福建連江 350500

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤，位居女性惡性腫瘤第三位，嚴(yán)重威脅婦女健康，具有較高的發(fā)病率與死亡率[1-2]。我國(guó)每年因該病的死亡人數(shù)達(dá)5.3萬(wàn)，且每年新發(fā)病例數(shù)高達(dá)13.15萬(wàn)[3]。研究表明，多種因素長(zhǎng)期共同作用促進(jìn)了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展，在此過(guò)程中涉及多基因、多分子水平的改變。S期激酶相關(guān)蛋白2（S-phase kinase associated protein2，Skp2）屬于F-box蛋白家族成員，研究表明，Skp2主要參與細(xì)胞周期的調(diào)控，與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4]。P27和細(xì)胞周期蛋白E1（Cyclin E1）是與增殖相關(guān)的細(xì)胞周期調(diào)控基因，檢測(cè)P27蛋白在宮頸癌及其周圍正常宮頸組織的表達(dá)，有利于探討它們與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。有研究結(jié)果顯示，Cyclin E1/CDK2激活加上FBW7丟失途徑，通過(guò)CENP-A-介導(dǎo)的著絲粒功能障礙促進(jìn)染色體不穩(wěn)定和腫瘤進(jìn)展[5]。本研究通過(guò)過(guò)檢測(cè)浸潤(rùn)性宮頸癌（infiltrating cervical carcinoma，ICC）患者標(biāo)本中Skp2、P27和CyclinE表達(dá)，旨在探討它們與宮頸癌臨床病理因素及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年1月～2018年1月我院病理科存檔石蠟包埋ICC組織標(biāo)本70例為ICC組，年齡35～67歲，平均47.5歲，收集患者具有完整的臨床、病理資料及隨訪情況，排除術(shù)前放、化療病例。另選取宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）組織標(biāo)本30例為CIN組和正常子宮頸鱗狀上皮（NCE）組織標(biāo)本50例為NCE組。

1.2 方法

采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組標(biāo)本中Skp2、P27和CyclinE表達(dá)情況，以購(gòu)買的陽(yáng)性片免疫組化染色結(jié)果為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS替代第一抗體的免疫組化染色結(jié)果為陰性對(duì)照。按說(shuō)明書操作，石蠟切片經(jīng)過(guò)二甲苯脫蠟→梯度酒精脫水→抗原修復(fù)→檸檬酸緩沖液高溫高壓抗原修復(fù)→過(guò)氧化物酶阻斷溶液阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶→封閉非特異性抗原→加一抗→過(guò)夜→二抗→三抗（鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶溶液）→DAB染色→蘇木素復(fù)染→脫水、透明→封片。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組Skp2、P27、CyclinE表達(dá)的比較

ICC組、CIN組、NCE組Skp2、CyclinE蛋白表達(dá)的陽(yáng)性呈明顯降低趨勢(shì)，P27蛋白表達(dá)的陽(yáng)性呈明顯升高趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.2 ICC組Skp2、P27及CyclinE蛋白表達(dá)情況

在ICC組中，Skp2蛋白、CyclinE蛋白及P27蛋白表達(dá)與年齡、腫瘤大小、臨床分期無(wú)明顯關(guān)系（P＞0.05）；而與組織學(xué)Ⅲ級(jí)、間質(zhì)浸潤(rùn)＞淺肌層、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性和脈管浸潤(rùn)陽(yáng)性者Skp2蛋白、CyclinE蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別顯著高于組織學(xué)≤Ⅱ級(jí)、間質(zhì)浸潤(rùn)≤淺肌層、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性和脈管浸潤(rùn)陰性者，P27蛋白表達(dá)陽(yáng)性率于分別顯著低于組織學(xué)≤Ⅱ級(jí)、間質(zhì)浸潤(rùn)≤淺肌層、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性和脈管浸潤(rùn)陰性者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05），見表 2。

2.3 ICC組Skp2、P27及CyclinE的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

隨訪資料顯示，ICC組生存期≥5年者38例，生存期≥5年者Skp2和CyclinE蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于生存期＜5年者，P27蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于生存期＜5年者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表2 ICC組Skp2、P27及CyclinE蛋白陽(yáng)性表達(dá)的情況[n（%）]

表3 Skp2、P27及CyclinE蛋白表達(dá)陽(yáng)性率與預(yù)后的關(guān)系[n（%）]

3 討論

Skp2是zhang等于1995年從大量的惡變細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種能與S期激酶CyclinA-CDK2相互作用的蛋白。因其主要存在于惡變細(xì)胞的S期，且與CyclinA-CDK2活性相關(guān)，故命名為Skp2（S-phase kinase-associated proteins）。P27是從靜息細(xì)胞抽提物中發(fā)現(xiàn)的一種分子量為27kD的熱穩(wěn)定蛋白[6-7]。P27作為細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)控因子，廣泛抑制各種細(xì)胞周期蛋白和激酶的活性，P27在細(xì)胞周期的調(diào)控中起重要作用，作為細(xì)胞周期Gl期的重要限速因子，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有著密切的關(guān)系。在人類幾乎所有的上皮性腫瘤中都有P27蛋白表達(dá)的下降或缺失[8-10]。CyclinE是細(xì)胞周期G1期的正性調(diào)控因子，在控制細(xì)胞由G1進(jìn)入S期過(guò)程中起限速作用。CyclinE的過(guò)度表達(dá)參與宮頸癌的發(fā)生及惡性進(jìn)展。CyclinE是細(xì)胞周期正性調(diào)控因子，促進(jìn)細(xì)胞周期由G1期向S期轉(zhuǎn)化，是細(xì)胞進(jìn)入S期的關(guān)鍵性調(diào)節(jié)基因，過(guò)度表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控，形成腫瘤。P27是細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)控因子[11]。

本研究結(jié)果顯示，ICC組、CIN組、NCE組Skp2、CyclinE蛋白表達(dá)的陽(yáng)性呈明顯降低趨勢(shì)，P27蛋白表達(dá)的陽(yáng)性呈明顯升高趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05）。在ICC組中，Skp2蛋白、CyclinE蛋白及P27蛋白表達(dá)與年齡、腫瘤大小、臨床分期無(wú)明顯關(guān)系（P＞0.05）；而與組織學(xué)Ⅲ級(jí)、間質(zhì)浸潤(rùn)＞淺肌層、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性和脈管浸潤(rùn)陽(yáng)性者Skp2蛋白和CyclinE蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別顯著高于組織學(xué) ≤Ⅱ級(jí)、間質(zhì)浸潤(rùn)≤淺肌層、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性和脈管浸潤(rùn)陰性者，P27蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別顯著低于組織學(xué) ≤Ⅱ級(jí)、間質(zhì)浸潤(rùn)≤淺肌層、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性和脈管浸潤(rùn)陰性者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 隨訪資料顯示，ICC組生存期≥5年者38例，生存期≥5年者Skp2和CyclinE蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于生存期＜5年者，P27蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于生存期＜5年者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。本研究結(jié)果提示，三者聯(lián)合檢測(cè)可預(yù)示宮頸癌的高惡性度，并提示腫瘤預(yù)后不良。隨著宮頸癌分化程度降低，Skp2、CyclinE的表達(dá)逐漸增高，而P27的表達(dá)逐漸降低。有研究發(fā)現(xiàn)Skp2與P27蛋白之間呈負(fù)相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，肺腺癌和鱗狀細(xì)胞癌、卵巢腫瘤，前列腺癌均與Skp2和P27有關(guān)[12-13]。多數(shù)研究者認(rèn)為，Skp2的一個(gè)最重要功能是靶向降解P27，Skp2過(guò)量表達(dá)可下調(diào)P27，從而促進(jìn)腫瘤的產(chǎn)生，發(fā)揮其致瘤作用[14-15]。

綜上所述，Skp2、CyclinE的高表達(dá)和P27的低表達(dá)或表達(dá)缺失可能與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。Skp2和CyclinE蛋白高表達(dá)可能是宮頸組織惡變的重要生物學(xué)標(biāo)志，P27蛋白表達(dá)降低提示腫瘤具有更高的侵襲性及不良預(yù)后。