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    體外產(chǎn)氣法評估蕎麥秸稈、油菜、苜蓿干草和玉米青貯的組合效應(yīng)

    2019-05-20 03:14:30李海慶周玉香
    飼料工業(yè) 2019年9期
    關(guān)鍵詞:蕎麥消化率苜蓿

    ■李海慶 王 萌 周玉香

    (寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院,寧夏銀川750021)

    我國秸稈種類較多,但動物消化率較低,利用率不高[1]。蕎麥在我國種植廣泛,蕎麥秸稈也是一種較好的粗飼料來源[2]。近年來我國油菜因其生產(chǎn)總量呈持續(xù)增長的趨勢,也成為了重要的農(nóng)作物秸稈之一[3]。苜蓿是一種蛋白含量高的豆科飼草。研究證明,秸稈作為日糧中唯一的粗飼料時,無法在瘤胃微生物中完全發(fā)酵,容易造成消化率降低[4],通過將低質(zhì)的秸稈與其它優(yōu)質(zhì)的粗飼料進行組合飼喂,可以提高秸稈的利用率,緩解我國秸稈資源浪費等問題[5]。布同良(2006)[5]通過體外產(chǎn)氣法研究在日糧中用青貯玉米與羊草組合時,可產(chǎn)生正組合效應(yīng)。張吉鹍等(2007)[6]研究在玉米秸稈日糧中補充40%~60%的苜??梢愿咝У睦媒斩捹Y源。

    本試驗擬采用體外培養(yǎng)技術(shù),通過將蕎麥秸稈、油菜、苜蓿干草和青貯玉米進行不同比例的組合搭配,在體外進行培養(yǎng)試驗。通過檢測多項發(fā)酵指標,用以評估這幾種粗飼料的組合效應(yīng)。

    1 試驗材料與方法

    1.1 試驗動物及飼養(yǎng)管理

    選用4月齡,體重在23 kg左右,體況良好的灘羊公羊3只,進行瘤胃瘺管手術(shù),待瘤胃瘺管固定后護理30 d開始試驗。試驗前,對圈舍進行消毒,對羊只進行驅(qū)蟲、健胃等管理。飼養(yǎng)日糧按照《肉羊飼養(yǎng)標準》(NY/T816—2004)合理配制營養(yǎng)全面的基礎(chǔ)日糧。基礎(chǔ)日糧營養(yǎng)配方見表1。每日飼喂2次,自由飲水。

    表1 基礎(chǔ)日糧營養(yǎng)配方(DM基礎(chǔ))

    稱取4.0 g精粗比為3∶7的日糧作為體外培養(yǎng)底物,精料按照基礎(chǔ)日糧配方中的精料配方。粗飼料按照粉碎過40目篩后的蕎麥秸稈、油菜、苜蓿干草和青貯玉米按不同配比組合。組合比例(%)為油菜20∶青貯80,蕎麥20∶苜蓿80,蕎麥40∶苜蓿60,油菜20∶苜蓿80,油菜40∶苜蓿60,蕎麥20∶青貯80。并按此組合順序設(shè)定為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組,Ⅰ組設(shè)定為對照組。每種組合3個重復(fù),采用體外發(fā)酵技術(shù),在0、3、6、12、24 h測得各時間點發(fā)酵指標,最后所測值根據(jù)組合效應(yīng)綜合指數(shù)(MFAEI)的計算公式,整理數(shù)據(jù)。

    1.2 體外試驗準備

    1.2.1 瘤胃液采集

    試驗期間在早飼前通過瘤胃瘺管抽取瘤胃液,取出后立即放入預(yù)熱39 ℃并通有CO2的保溫瓶中,帶回實驗室。隨后經(jīng)8層紗布過濾后迅速分裝進通有CO2的恒溫培養(yǎng)瓶中,每個培養(yǎng)瓶裝入40 ml瘤胃液。

    1.2.2 培養(yǎng)液制備

    培養(yǎng)液參照張愛忠(2005)[7]的方法進行配制,每個培養(yǎng)瓶中加入80 ml 培養(yǎng)液。試驗前39 ℃預(yù)熱并通入CO2。

    1.2.3 模擬人工瘤胃產(chǎn)氣裝置

    取250 ml 培養(yǎng)瓶,置于恒溫水浴搖床中,搖床溫度設(shè)置為39 ℃、搖速50次/min。試驗過程中培養(yǎng)瓶內(nèi)產(chǎn)生的氣體可排出到注射器,用于記錄產(chǎn)氣量,記錄后將氣體通過三通閥注入集氣袋中,用于檢測甲烷含量。

    1.3 測定指標與方法

    各試驗點結(jié)束后,分別統(tǒng)計和測定各組合的產(chǎn)氣量、pH值、干物質(zhì)消化率、氨態(tài)氮濃度、揮發(fā)性脂肪酸(VFA)、微生物蛋白(MCP)、甲烷含量。

    1.3.1 產(chǎn)氣量的測定

    分別在發(fā)酵開始后0、3、6、12、24 h通過三通閥上端的注射器讀取并記錄不同時間點的產(chǎn)氣量。

    1.3.2 pH值的測定

    發(fā)酵結(jié)束后用pHS-2 型酸度計直接測定培養(yǎng)瓶中的瘤胃液的pH值。

    1.3.3 干物質(zhì)消化率的測定

    1.3.4 氨態(tài)氮濃度的測定

    參照馮宗慈等(1993)[8]的方法測定。

    1.3.5 揮發(fā)性脂肪酸的測定

    用GC-2010 氣相色譜儀測定。汽化室中載氣為N2,分流比為20∶1,溫度250 ℃,筑爐溫度100 ℃,火焰監(jiān)測器(FID)溫度250 ℃,檢測器載氣為H2流量40 ml/min,空氣流量450 ml/min。檢測樣品進樣量為1 μl。

    1.3.6 微生物蛋白的測定

    用差速離心法將,將細菌沉淀,再用考馬斯亮藍G-250法測定[8]。

    1.3.7 甲烷排放量的測定

    利用島津GC-2010 氣相色譜儀測定。測定條件為筑爐溫度60 ℃,檢測器70 ℃;載氣為氮氣(N2),檢測樣品進樣量為1 ml/次。

    甲烷排放量=產(chǎn)氣量×每毫升甲烷濃度

    1.3.8 單項組合效應(yīng)指數(shù)及多項組合效應(yīng)綜合指數(shù)的計算

    式中:A1——對照組各個培養(yǎng)時間點各指標數(shù)值;

    A2——各組各個培養(yǎng)時間點各指標數(shù)值;

    A3——在每個時間點A2總和的平均數(shù)。

    多項組合綜合效應(yīng)指數(shù)(MFAEI)為各單項指標的加和值。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理

    試驗數(shù)據(jù)用Excel 記錄并作簡單處理后,采用SAS 8.2軟件包中的ANOVA過程進行方差分析,多重比較用Duncan's法。

    A:改革開放初期,力嘉從香港搬遷到深圳橫崗,逐漸從單一的紙品包裝業(yè)務(wù)擴張到彩色印刷市場領(lǐng)域,較早享受到了國家對外資企業(yè)進駐內(nèi)地投資所給予的各種優(yōu)惠政策。隨著改革開放進程的不斷深化,內(nèi)地市場經(jīng)濟越發(fā)蓬勃,給包裝印刷帶來巨大的發(fā)展機遇,這些環(huán)境因素對力嘉的發(fā)展起到了重要的推動作用,使力嘉迅速打開內(nèi)地市場,實現(xiàn)了從小到大以及到強的跨越。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同比例秸稈組合體外發(fā)酵指標的綜合評定(見表2)

    表2 不同比例秸稈組合體外發(fā)酵指標的綜合指數(shù)評定

    在精粗比為3∶7的日糧條件下,以蕎麥100%組為發(fā)酵參考組,對產(chǎn)氣量、pH值、干物質(zhì)消化率、揮發(fā)性脂肪酸、氨態(tài)氮濃度、微生物蛋白、甲烷濃度進行單項組合效應(yīng)和多項組合效應(yīng)綜合指數(shù)(MFAEI)評定。以SFAEI 評定時,VFA 以油菜20∶苜蓿80 組值最高,消化率以油菜40∶苜蓿60組最高,氨態(tài)氮以油菜20∶苜蓿80組最高,產(chǎn)氣量以蕎麥20∶青貯80組最高,pH 值以蕎麥20∶苜蓿80 組最高,MCP 以油菜20∶苜蓿80組最高。用MFAEI對各項指標進行評定時發(fā)現(xiàn),油菜20∶青貯80組合效應(yīng)值最高,蕎麥20∶苜蓿80組次之。

    2.2 不同比例秸稈組合對體外培養(yǎng)揮發(fā)性脂肪酸的影響(見表3)

    在日糧精粗比3∶7 情況下,由表3 可知,揮發(fā)性脂肪酸的濃度均隨培養(yǎng)時間的增加而有所增加。3 h對照組與試驗Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ組均差異極顯著(P<0.01),與試驗Ⅳ組無顯著差異(P>0.05);6 h對照組與各試驗組均有極顯著的差異(P<0.01),試驗Ⅱ組與試驗Ⅵ組無顯著性差異(P>0.05);24 h對照組與試驗組均有極顯著的差異(P<0.01),12、24 h 試驗Ⅱ組和試驗Ⅵ組無顯著性的差異(P>0.05)。

    表3 不同比例秸稈組合的體外培養(yǎng)VFA總濃度(mmol/l)

    2.3 不同比例秸稈組合對體外培養(yǎng)干物質(zhì)消化率影響(見表4)

    在日糧精粗比3∶7情況下,由表4可見各試驗組的干物質(zhì)消化率隨培養(yǎng)時間逐漸升高。3 h對照組與試驗Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組均差異不顯著(P>0.05),與試驗Ⅵ組差異顯著(P<0.05),與試驗Ⅴ組差異顯著(P<0.05);6 h對照組與試驗Ⅱ組、試驗Ⅲ組、試驗Ⅳ組均差異不顯著(P>0.05),與試驗Ⅴ、Ⅵ組差異極顯著(P<0.01);12 h對照組與試驗Ⅱ組、試驗Ⅲ組、試驗Ⅳ組、試驗Ⅵ組均差異極顯著(P<0.01),與試驗Ⅴ組差異不顯著(P>0.05);24 h對照組與試驗各組均差異極顯著(P<0.01)。

    表4 不同比例秸稈組合的體外培養(yǎng)干物質(zhì)消化率(%)

    2.4 不同比例秸稈組合對體外培養(yǎng)產(chǎn)氣量的影響(見表5)

    表5 不同比例秸稈組合的體外培養(yǎng)產(chǎn)氣量(ml)

    在日糧精粗比3∶7情況下,由表5可見,3 h對照組與試驗Ⅱ、Ⅲ組差異不顯著(P>0.05),與試驗Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組差異極顯著(P<0.01);6 h對照組與試驗Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ組差異極顯著(P<0.01),與試驗Ⅱ組和試驗Ⅴ組差異不顯著(P>0.05);12 h對照組與試驗Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組差異極顯著(P<0.01),與試驗Ⅱ組差異不顯著(P>0.05);24 h 對照組與試驗Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組均差異極顯著(P<0.01),與試驗Ⅱ組、試驗Ⅲ組差異不顯著(P>0.05)。

    2.5 不同比例秸稈組合對體外培養(yǎng)氨態(tài)氮濃度的影響(見表6)

    表6 不同比例秸稈組合的體外培養(yǎng)氨態(tài)氮濃度的影響(mg/100 ml)

    在日糧精粗比3∶7 情況下,由表6 可見,在試驗開始3 h對照組與其它五組試驗組均差異不顯著(P>0.05);6 h 對照組與試驗Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ組差異顯著(P<0.05);12 h 時,對照組與試驗Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組差異極顯著(P<0.01),;24 h 對照組與試驗Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ組差異顯著(P<0.05),與試驗Ⅲ組差異不顯著(P>0.05)。

    2.6 不同比例秸稈組合對體外培養(yǎng)甲烷排放量的影響(見圖1)

    圖1 不同比例未處理秸稈組的體外培養(yǎng)甲烷排放量

    在日糧精粗比3∶7 情況下,由圖1 可見,對經(jīng)過24 h的體外培養(yǎng)后產(chǎn)生的氣體進行甲烷濃度的測定,發(fā)現(xiàn)試驗Ⅲ組甲烷排放量最多,對照組較其它五組排放量都低,并且差異極顯著(P<0.01)。甲烷排放量的順序依次為:試驗Ⅲ組>試驗Ⅴ組>試驗Ⅳ組>試驗Ⅵ組>試驗Ⅱ組>試驗Ⅰ組。

    2.7 不同比例秸稈組合對體外培養(yǎng)微生物蛋白含量的影響(見表7)

    表7 不同比例秸稈組合的體外培養(yǎng)微生物蛋白含量(mg/100 ml)

    在日糧精粗比3∶7 情況下,各試驗組微生物蛋白含量隨著培養(yǎng)時間的增長呈下降趨勢。試驗在3 h直到試驗結(jié)束24 h 對照組與試驗組均差異極顯著(P<0.01)。在24 h試驗Ⅱ組微生物蛋白含量最高,順序依次為:試驗Ⅱ組>試驗Ⅲ組>試驗Ⅳ組>對照組>試驗Ⅵ組>試驗Ⅴ組。

    2.8 不同比例秸稈組合對體外培養(yǎng)pH值的影響(見表8)

    表8 不同比例秸稈組合的體外培養(yǎng)pH值

    3 討論

    通過對不同飼料進行組合,可以提高單個飼料的消化率,組合后的飼料其能量和蛋白利用率也會有所改變。如果不考慮飼料間的互作效應(yīng),將會導(dǎo)致對日糧營養(yǎng)價值評估的不準確[9]。飼料組合后指標較復(fù)雜,如果只考慮其中一種或幾種指標很難達到準確的權(quán)衡。因此組合效應(yīng)的綜合指數(shù)就解決了這個難題。王旭(2003)[10]在2003年運用體外法研究了粗飼料混合后的組合效應(yīng),并且首次用多項組合效應(yīng)指數(shù)(MFAEI)進行研究。于騰飛等(2012)[11]利用體外瘤胃發(fā)酵技術(shù)對花生蔓與其他粗飼料之間組合效應(yīng)進行研究,得出了與花生蔓產(chǎn)生最優(yōu)組合的粗飼料及最佳搭配比例。本試驗采用人工模擬瘤胃發(fā)酵體外培養(yǎng)法,并采用多項組合效應(yīng)指數(shù)(MFAEI)評估蕎麥秸稈、油菜秸稈與苜蓿干草、青貯玉米間的組合效應(yīng)。

    瘤胃內(nèi)揮發(fā)性脂肪酸是碳水化合物經(jīng)過微生物發(fā)酵的主要產(chǎn)物,是衡量瘤胃內(nèi)微生物活性的主要指標,更是反芻動物生存、生長、泌乳、繁殖的重要能源[12]。當(dāng)瘤胃中總揮發(fā)性脂肪酸提高時,可以間接的說明瘤胃內(nèi)的消化率提高,瘤胃的發(fā)酵效果較好[13]。本試驗中揮發(fā)性脂肪酸的含量隨著體外培養(yǎng)時間的增長均呈上升的趨勢。

    消化率是評定飼料組合效應(yīng)的重要指標,飼料組合后的表觀消化率不等于各單一飼料消化率的總和,因此也就有了組合效應(yīng)[14]。夏科等(2012)[15]通過對粗飼料組合效應(yīng)中能量、消化率指標的研究,得出了飼料間可以產(chǎn)生正組合效應(yīng)的飼料組合,提高了飼料的消化率。本試驗中試驗Ⅰ組24 h 消化率達到了37.19%,其組合效應(yīng)綜合指數(shù)也最高.

    瘤胃內(nèi)微生物作用會產(chǎn)生氣體,微生物活力越高,產(chǎn)氣量越大,發(fā)酵程度也就越好。本試驗中對照組的產(chǎn)氣量最高,達到了532 ml,同時對照組的消化率也較其它試驗組高,證明產(chǎn)氣量和消化率是呈高度正相關(guān)的,這與Blummel 等(1997)[16]的研究是一致的。唐賽勇(2009)[17]通過對玉米青貯和稻秸之間進行組合效應(yīng)研究,發(fā)現(xiàn)瘤胃干物質(zhì)降解率和產(chǎn)氣量的組合效應(yīng)排序是一致的。本試驗中,24 h的干物質(zhì)消化率大小的順序為對照組>試驗Ⅱ組>試驗Ⅲ組>試驗Ⅴ組>試驗Ⅵ組>試驗Ⅳ組,24 h的產(chǎn)氣量的順序為對照組>試驗Ⅱ組>試驗Ⅲ組>試驗Ⅴ組>試驗Ⅵ組>試驗Ⅳ組,同干物質(zhì)消化率的排序也是一致的。

    瘤胃NH3-N 是綜合反映反芻動物蛋白質(zhì)營養(yǎng)價值的重要參數(shù)。瘤胃內(nèi)NH3-N 含量是一個動態(tài)平衡的過程,被降解后產(chǎn)生NH3-N,產(chǎn)生的NH3-N 可以與酮酸合成微生物蛋白質(zhì),而大多數(shù)情況下飼料降解產(chǎn)NH3-N 的速率遠超過利用NH3-N 的速率。本試驗NH3-N濃度并無規(guī)律性變化,試驗經(jīng)過24 h發(fā)酵后其NH3-N濃度均呈正組合效應(yīng),說明試驗的組合日糧有利于蛋白的分解。

    甲烷的產(chǎn)氣量多少可以在一定程度上反映出能量的消化率[18]。趙麗媛等(2014)[19]通過研究添加商業(yè)外源性纖維分解酶制劑及其組合對玉米秸稈體外發(fā)酵和甲烷生成的影響,發(fā)現(xiàn)這種方法可以降低甲烷的排放量。本試驗中對照組甲烷排放量最低,組合效應(yīng)綜合指數(shù)最高。

    瘤胃內(nèi)微生物蛋白質(zhì)的濃度是檢測微生物對NH3-N 的利用率的重要指標[20]。微生物生長的過程中能量和蛋白質(zhì)重要的營養(yǎng)物質(zhì),動物機體中能氮比例適中,可以提高瘤胃微生物合成微生物蛋白的效率[21]。試驗Ⅱ組中苜蓿占80%,苜蓿中蛋白含量較高補充了蕎麥秸稈蛋白含量低的缺點,試驗結(jié)果顯示24 h 的試驗Ⅱ組的微生物蛋白濃度最高。本試驗各試驗組微生物蛋白含量均差異極顯著,這也可以更直觀的表現(xiàn)出飼料之間組合效應(yīng)差異[22]。

    本試驗經(jīng)過人工瘤胃發(fā)酵處理后的飼料組合pH值維持在5.57~5.93 的正常范圍內(nèi),表明模擬瘤胃裝置是正常的。維持正常的pH 值是瘤胃發(fā)酵的前提。本試驗從開始到結(jié)束,各試驗組pH值均差異不顯著。

    4 結(jié)論

    通過對蕎麥秸稈、油菜秸稈、苜蓿干草、青貯玉米6種不同比例的組合,進行體外培養(yǎng)和綜合評定發(fā)現(xiàn),油菜20∶青貯80 組合效應(yīng)值最高,蕎麥20∶苜蓿80組次之。

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