高效液相色譜法測定40%硫磺·三環(huán)唑懸浮劑中硫磺的含量

洪陳艷，王學(xué)林，李學(xué)院，安燕萍

（昆明農(nóng)藥有限公司，云南 昆明 650401）

水稻稻瘟病可采用的藥劑較多，有稻瘟靈、稻瘟凈、三環(huán)唑等，單一使用某一種農(nóng)藥容易誘導(dǎo)稻瘟病菌產(chǎn)生抗藥性以致藥劑用量越來越大，藥效卻越來越差[1]。40%硫磺·三環(huán)唑懸浮劑是一種具有保護(hù)和內(nèi)吸治療作用的復(fù)配殺菌劑，該藥具有流動性較好、懸浮率較高、黏著力較強、較耐雨水沖刷、易被作物吸收等特點，是防治水稻稻瘟病的理想藥劑。

40%硫磺·三環(huán)唑懸浮劑中的有效成份硫磺（英文通用名:sulfur）為無機物，其測定方法通常采用化學(xué)法。化學(xué)法操作復(fù)雜、對人員的操作熟練程度要求高、測定結(jié)果重現(xiàn)性不好、測定準(zhǔn)確度差。本文通過實驗研究建立了一種高效液相色譜分析方法，更能準(zhǔn)確、方便、快捷地測定40%硫磺·三環(huán)唑懸浮劑中的硫磺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

1 實驗方法

1.1 溶液和試劑

硫磺標(biāo)樣（質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%）；甲醇（色譜純、流動相用）；甲醇（分析純）；N,N二甲基甲酰胺（分析純）；水（新蒸二次蒸餾水）。

1.2 操作儀器

液相色譜儀:液相色譜儀（具有可調(diào)節(jié)波長紫外檢測器和定量進(jìn)樣閥）；色譜數(shù)據(jù)工作站:N2000色譜工作站；色譜柱:200mm×4.6mm（i.d）不銹鋼柱，內(nèi)裝DOS（C18）5μm填充物；微量進(jìn)樣注射器:50μL；定量進(jìn)樣器5 μL；超聲波清洗器。

1.3 高效液相色譜操作條件

柱溫:相當(dāng)于室溫；流動相:甲醇,經(jīng)濾膜過濾并用超聲波脫氣。流速:1.25mL/min；波長:265nm；進(jìn)樣體積:5μL；保留時間:4.690min。

1.4 實驗步驟

1.4.1 配制標(biāo)樣溶液

稱取0.05g(精確至0.0001g)硫磺標(biāo)樣置于50 mL容量瓶內(nèi)，加5 mL蒸餾水搖勻使之溶解，再加入5 mL N,N二甲基甲酰胺，最后再用甲醇溶解到刻度，超聲5 min，直到標(biāo)樣完全溶解，冷卻搖勻后用移液管移取此溶液10 mL于另一個50 mL容量瓶內(nèi)，加甲醇溶解到刻度，搖勻后過濾用。

1.4.2 配制試樣溶液

稱取0.1g(精確至0.0001g)40%硫磺·三環(huán)唑試樣置于50 mL容量瓶內(nèi)，加5 mL蒸餾水搖勻使之溶解，再加入5 mL N,N二甲基甲酰胺，最后再用甲醇溶解到刻度，超聲5min，直到試樣完全溶解，冷卻搖勻后用移液管移取此溶液10 mL于另一個50 mL容量瓶內(nèi)，加甲醇溶到刻度，搖勻后過濾用。

1.4.3 測定方法

在以上色譜操作條件下、儀器基本穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰兩針標(biāo)樣溶液中的硫磺峰面積相對變化小于1.5%后。按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣進(jìn)行測定[2]。40%硫磺·三環(huán)唑懸浮劑的高效液相色譜圖（圖1）。保留時間為2.157min的是三環(huán)唑色譜峰，保留時間為4.690min的是硫磺色譜峰。

圖1 40%硫磺·三環(huán)唑懸浮劑的液相色譜圖

1.4.4 計算方法

將測得的兩針試樣溶液,以及試樣前后兩針標(biāo)樣溶液中硫磺峰面積，分別進(jìn)行平均。試樣中硫磺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w1(%)按下列公式計算:

式中:R2為試樣溶液中硫磺與內(nèi)標(biāo)物峰面積的平均比值；m1為標(biāo)樣硫磺的質(zhì)量，g；w為標(biāo)品硫磺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；R1為標(biāo)樣溶液中硫磺與內(nèi)標(biāo)物峰面積的平均比值；m2為試樣的質(zhì)量，g；w1為樣品中硫磺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

1.4.5 允許差

兩次平行測定結(jié)果之相對差不大于1.0%，取其算術(shù)平均值作為測定結(jié)果。

2 結(jié)果與討論

2.1 波長的選擇

用紫外可變波長檢測器，在不同波長下對硫磺進(jìn)行掃描，當(dāng)掃描波長為265nm時，硫磺的響應(yīng)值最大，且能與雜質(zhì)峰徹底分離，因此選擇265nm作為檢測波長。

2.2 色譜操作條件的選擇

為了保證40%硫磺·三環(huán)唑懸浮劑劑樣品中硫磺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定的準(zhǔn)確性，流動相的選擇十分重要。當(dāng)使用甲醇為流動相時，樣品色譜圖基線平穩(wěn)，峰型好，準(zhǔn)確度高，分離效果較好，出峰時間適宜，因此確定選用甲醇作為流動相。

2.3 試樣溶劑的選擇

根據(jù)硫磺的性質(zhì)，當(dāng)選用N,N二甲基甲酰胺和甲醇為試樣溶劑時，能較好地溶解試樣，且峰型分離較好，滿足試劑的選擇條件。

2.4 實驗方法中的線性相關(guān)性測定

各稱取硫磺標(biāo)樣 0.03、0.05、0.07、0.09、0.11g（精確至0.0002g），然后配制成幾種質(zhì)量濃度不同的標(biāo)準(zhǔn)溶液。按1.3、1.4中的方法進(jìn)行分析，得出了一系列色譜峰面積（表1）。以硫磺的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，擬合線性相關(guān)曲線，得出硫磺的線性方程y=14184x+10655，線性相關(guān)系數(shù)為0.9990，呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系。

表1 不同質(zhì)量濃度硫磺標(biāo)樣與對應(yīng)的峰面積

2.5 方法的精密度測定

各稱取5個平行試樣，按照以上色譜條件和測定步驟測定，硫磺的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.43%；變異系數(shù)為0.02%，具有良好的精密度（表2）。

表2 分析方法的精密度測定結(jié)果

2.6 方法的準(zhǔn)確度測定

稱取已知含量的試樣5份（0.1026、0.1064、0.1069、0.1043、0.1031g） 精確至0.0002g，各加入不同質(zhì)量的硫磺標(biāo)樣（含量99.5%）。在以上操作步驟及色譜條件下測定，硫磺的平均回收率為99.83%，故此方法的準(zhǔn)確度比較高（表3）。

3 結(jié)語

本文建立的高效液相色譜法測定40%硫磺·三環(huán)唑懸浮劑中有效成分硫磺含量，具有良好的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性，方法高效、快捷、準(zhǔn)確，能達(dá)到定量分析的要求，可用于該復(fù)配制劑中硫磺含量的檢測和質(zhì)量控制。

表3 方法的準(zhǔn)確度測定結(jié)果