• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    HPLC法同時(shí)測(cè)定毛菊苣根和種子中7種化學(xué)成分的含量

    2019-05-15 01:58:26駱旭東楊建華張海波胡君萍
    西北藥學(xué)雜志 2019年3期
    關(guān)鍵詞:秦皮槲皮苷菊苣

    駱旭東,楊建華,,張海波,,胡君萍*

    (1.新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,烏魯木齊 830011;2.新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院,烏魯木齊 830011)

    菊苣來(lái)源于菊科植物菊苣屬的毛菊苣CichoriumglandulosumBoiss et Huet或菊苣CichoriumintybusL.的干燥地上部分及根?!吨袊?guó)藥典》記載菊苣具有清肝利膽、健胃消食和利尿消腫的功效,主治濕熱黃疸、胃痛食少和水腫尿少[1]。

    毛菊苣主要分布在我國(guó)新疆維吾爾自治區(qū)南疆地區(qū)[2],化學(xué)成分研究表明,毛菊苣中含有倍半萜、香豆素、黃酮、多糖及微量元素[3]。藥理研究表明,毛菊苣對(duì)非酒精性脂肪肝(NAFLD)有顯著療效[4],對(duì)硫代乙酰基導(dǎo)致的大鼠肝纖維化具有保護(hù)作用[5],能降低實(shí)驗(yàn)性1型糖尿病[6]的發(fā)病率,對(duì)傷寒沙門菌也具有一定的抗菌活性[7]。此外,毛菊苣還具有鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛作用[8]。不同于《中國(guó)藥典》記載,毛菊苣根和種子是維吾爾醫(yī)學(xué)的習(xí)用藥材[9],不同比例毛菊苣根和種子的配伍常作為維吾爾傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的經(jīng)典保肝處方,如復(fù)方木尼孜其顆粒、護(hù)肝布祖熱顆粒和炎消迪娜爾糖漿等[10]。目前,有關(guān)新疆毛菊苣根和種子化學(xué)成分研究的文獻(xiàn)較少,本文擬建立同時(shí)測(cè)定毛菊苣根和種子中7種化學(xué)成分的HPLC含量測(cè)定方法,對(duì)不同來(lái)源的毛菊苣根和種子的含量進(jìn)行對(duì)比。

    1 儀器與試藥

    1.1儀器 Waters Alliance 2695高效液相色譜儀,Waters 2487紫外檢測(cè)器,Empower色譜工作站(美國(guó)Waters公司);Sartorius BP211D電子天平[賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司];UV2550紫外分光光度計(jì)(日本島津公司);KQ-200VDB型雙頻數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);R-3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士步琪BUCHI公司);FJY1002-UVF基因研究型超純水機(jī)(青島富勒姆科技有限公司);HHS型電熱恒溫水浴鍋(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)。

    1.2試藥 菊苣酸對(duì)照品(批號(hào) MUST-17031720)和咖啡酸對(duì)照品(批號(hào) MUST-16060613),均購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所;綠原酸對(duì)照品(批號(hào) LH40M57)和秦皮甲素對(duì)照品(批號(hào) 287421),均購(gòu)于百靈威科技有限公司;槲皮苷對(duì)照品(批號(hào)P01M8F30364),購(gòu)于上海源葉生物科技有限公司;蘆丁對(duì)照品(批號(hào)100080-200707),購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院;秦皮乙素對(duì)照品(批號(hào) 10128697),購(gòu)于阿法埃莎(中國(guó))化學(xué)有限公司;乙腈為色譜純(SIGMA公司);水為超純水;其他試劑均為分析純。

    藥材經(jīng)胡君萍教授鑒定為毛菊苣CichoriumglandulosumBoiss et Huet的干燥根及種子。具體信息見表1。

    表1 藥材信息

    Tab.1 Information of samples

    序號(hào)收集地藥用部位批號(hào)S1新疆買提牙孜公司根20161112S2和田縣維吾爾醫(yī)院根20160704S3新疆買提牙孜公司種子20161112S4洛浦縣維吾爾醫(yī)院根20151202S5醫(yī)學(xué)故鄉(xiāng)藥店根20171219S6醫(yī)學(xué)故鄉(xiāng)藥店種子20171219S7埃塔爾藥店根20171219S8和田地區(qū)維吾爾醫(yī)院種子20151207S9洛浦縣維吾爾醫(yī)院種子20151202S10埃塔爾藥店種子20171219S11娜克蘭穆藥店種子20171219S12特比薩瓦普藥店根20171219S13麥迪森維藥公司種子20160417S14墨玉縣維吾爾醫(yī)院根20151201S15和田維吾爾藥材市場(chǎng)根20161228S16墨玉縣維吾爾醫(yī)院種子20151201S17和田縣維吾爾醫(yī)院種子20160704S18芒萊鄉(xiāng)大汗村根20161228S19芒萊鄉(xiāng)大汗村種子20161228S20和田維吾爾藥材市場(chǎng)種子20161228S21特比薩瓦普藥店種子20171219S22和田地區(qū)維吾爾醫(yī)院根20160706

    2 方法與結(jié)果

    2.1色譜條件 Supersil ODS-B色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)。流動(dòng)相:乙腈(A)-2 mL·L-1甲酸水溶液(B),梯度洗脫(0~16 min,10%A;16~17 min,10%A~17%A;17~36 min,17%A;36~37 min,17%A~10%A;37~42 min,10%A)。流速:1.0 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng):330 nm;柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:10 mL。HPLC圖見圖1。

    圖1 HPLC圖

    A.混合對(duì)照品;B.毛菊苣根;C.毛菊苣種子;1.秦皮甲素;2.綠原酸;3.秦皮乙素;4.咖啡酸;5.蘆??;6.菊苣酸;7.槲皮苷。

    Fig.1 HPLC chromatograms

    A.mixed reference substance;B.roots ofCichoriumglandulosum;C.seeds ofCichoriumglandulosum;1.aesculin;2.chlorogenic acid;3.aesculetin;4.caffeic acid;5.rutin;6.cichoric acid;7.quercetin.

    2.2混合對(duì)照品溶液的制備 精密稱取秦皮甲素、綠原酸、秦皮乙素、咖啡酸、蘆丁、菊苣酸和槲皮苷對(duì)照品適量,置于同一10 mL量瓶中,用甲醇溶液稀釋至刻度,將上述7種化合物配制成質(zhì)量濃度分別為0.20,0.40,0.30,0.08,0.35,1.00和1.50 mg·mL-1的混合對(duì)照品溶液。

    2.3供試品溶液的制備 根據(jù)表1取毛菊苣根及種子(根S22批號(hào)20160706,種子S11批號(hào)20171219)粉碎,過40目篩。精密稱取粉末各10.0 g,置于具塞錐形瓶中,料液比為1∶25,加體積分?jǐn)?shù)為85%的甲醇溶液,于40 ℃超聲提取2次,每次20 min,過濾,濾液合并減壓濃縮,用體積分?jǐn)?shù)為85%的甲醇溶液定容至10 mL量瓶中,搖勻,用0.45 μm濾膜過濾,取續(xù)濾液,即得。

    2.4系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè),以綠原酸峰面積計(jì)算理論塔板數(shù)大于5 000,各色譜峰與相鄰峰的分離度均大于1.5。

    2.5方法學(xué)考察

    2.5.1線性關(guān)系考察 精密量取2.2項(xiàng)下制備的混合對(duì)照品溶液0.5,1.0,1.5,2.0,2.5和5.0 mL,分別置于10 mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,得到包括儲(chǔ)備液在內(nèi)的7個(gè)混合對(duì)照品溶液,進(jìn)樣量為10 μL。按照2.1項(xiàng)下色譜條件操作,以峰面積值(y)對(duì)質(zhì)量濃度(x)進(jìn)行線性回歸,分別得到秦皮甲素、綠原酸、秦皮乙素、咖啡酸、蘆丁、菊苣酸和槲皮苷的線性回歸方程,結(jié)果見表2。

    2.5.2定量限和檢測(cè)限 按照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定稀釋后的混合對(duì)照品溶液,檢測(cè)限信噪比為3∶1,定量限信噪比為10∶1,分別測(cè)定檢測(cè)限和定量限。結(jié)果見表2。

    表2 7種化學(xué)成分的回歸方程、線性范圍、檢測(cè)限和定量限

    Tab.2 Regression equations,linear ranges,detection limits and quantitative limits of the 7 compounds

    成分回歸方程r線性范圍/mg·mL-1檢測(cè)限/μg定量限/μg秦皮甲素y1=2×107x1-3 5820.999 60.010 0~0.200 03.2513.5綠原酸y2=3×107x2+93 8180.999 80.020 0~0.400 00.852.5秦皮乙素y3=1×107x3-5 195.90.999 60.015 0~0.300 01.203.5咖啡酸y4=8×107x4-21 4020.999 60.004 0~0.080 00.652.1蘆丁y5=7×106x5+49 7930.999 90.017 5~0.350 00.902.5菊苣酸y6=4×107x6-100 4750.999 80.050 0~1.000 01.103.8槲皮苷y7=2×107x7-420 1880.999 60.075 0~1.500 00.561.6

    2.5.3精密度實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取2.2項(xiàng)下制備的混合對(duì)照品溶液10 μL,按照2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積,計(jì)算各峰面積的RSD值分別為1.9%,1.6%,2.0%,1.4%,1.0%,1.9%和1.4%。結(jié)果表明,該方法精密度良好。

    2.5.4重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取6份同批次的毛菊苣根(S22,批號(hào)20160706),按照2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,分別記錄秦皮甲素、綠原酸、秦皮乙素、咖啡酸、蘆丁、菊苣酸和槲皮苷的峰面積,計(jì)算各峰面積的RSD值分別為1.5%,1.5%,0.8%,1.1%,0.8%,1.5%和1.6%。結(jié)果表明,該方法重復(fù)性良好。

    2.5.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取2.2項(xiàng)下制備的混合對(duì)照品溶液,在室溫下放置0,2,4,8,12和24 h后,按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積,計(jì)算峰面積RSD值分別為1.8%,1.0%,1.8%,1.5%,1.1%,2.0%和0.9%。結(jié)果表明,樣品24 h內(nèi)穩(wěn)定。

    2.5.6加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取9份同批次已知含量的毛菊苣根(S22,批號(hào)20160706),分別加入低、中和高質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液,按照2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定各供試品溶液中7種化學(xué)成分的峰面積,分別代入相應(yīng)的回歸方程,計(jì)算各供試品溶液中秦皮甲素、秦皮乙素、綠原酸、咖啡酸、蘆丁、菊苣酸和槲皮苷的含量,計(jì)算回收率,結(jié)果見表3。

    表3 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    Tab.3 Results of recovery test (n=3)

    成分取樣量/g樣品中量/mg加入量/mg測(cè)得量/mg回收率/%RSD/%秦皮甲素10.010.015 800.013 000.028 698.51.210.010.015 800.016 000.031 698.81.610.000.015 600.019 000.034 599.52.1秦皮乙素10.010.021 200.017 000.038 199.42.110.010.021 200.021 000.042 3100.51.010.000.021 000.025 000.046 4101.63.5綠原酸10.010.418 000.340 000.765 0102.10.310.010.418 000.410 000.829 0100.21.010.000.417 000.500 000.919 0100.41.4咖啡酸10.010.007 600.006 000.013 395.01.310.010.007 590.007 500.014 896.10.910.000.007 520.009 000.016 498.72.3蘆丁10.010.284 000.230 000.508 097.41.510.010.284 000.280 000.554 096.40.810.000.282 000.340 000.625 0100.92.2菊苣酸10.010.900 000.750 001.630 097.31.410.010.899 000.900 001.801 0100.22.310.000.893 001.100 001.989 0 99.61.6槲皮苷10.011.404 001.300 002.719 0101.20.410.011.404 001.400 002.768 097.41.710.001.400 001.500 002.928 0101.90.6

    3 提取工藝優(yōu)化

    3.1單因素分析

    3.1.1料液比的考察 精密稱取毛菊苣根粉末5份(S22,批號(hào)20160706),每份2.0 g,甲醇體積分?jǐn)?shù)為60%,提取溫度為50 ℃,提取時(shí)間為20 min,超聲1次,料液比分別為1∶10,1∶15,1∶20,1∶25和1∶30,制備樣品溶液,按照2.1項(xiàng)下色譜條件平行測(cè)定7種化合物含量之和,測(cè)定3次,取平均值,結(jié)果表明,最優(yōu)的料液比為1∶25。

    3.1.2甲醇體積分?jǐn)?shù)的考察 精密稱取毛菊苣根粉末5份(S22,批號(hào)20160706),每份2.0 g,固定料液比為1∶25,提取溫度為50 ℃,超聲1次,提取時(shí)間為20 min,分別加入體積分?jǐn)?shù)為60%,70%,80%,90%和100%的甲醇,制備樣品溶液,按照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定7種化合物的含量之和,測(cè)定3次,取平均值,結(jié)果表明,最優(yōu)的甲醇體積分?jǐn)?shù)為90%。

    3.1.3提取溫度的考察 精密稱取毛菊苣根粉末5份(S22,批號(hào)20160706),每份2.0 g,固定料液比為1∶25,甲醇體積分?jǐn)?shù)為90%,提取時(shí)間為20 min,超聲1次,提取溫度分別為40,50,60,70和80 ℃,制備樣品溶液,按照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定7種化合物的含量之和,測(cè)定3次,取平均值,結(jié)果表明,最優(yōu)的提取溫度為40 ℃。

    3.1.4提取時(shí)間的考察 精密稱取毛菊苣根粉末5份(S22,批號(hào)20160706),每份2.0 g,固定料液比為1∶25,甲醇體積分?jǐn)?shù)為90%,超聲1次,提取溫度為40 ℃,提取時(shí)間分別為20,30,40,50和60 min,制備樣品溶液,按照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定7種化合物的含量之和,測(cè)定3次,取平均值,結(jié)果表明,最優(yōu)的提取時(shí)間為 20 min。

    3.2正交實(shí)驗(yàn) 綜合以上單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選取甲醇體積分?jǐn)?shù)(A)、提取時(shí)間(B)、提取溫度(C)和提取次數(shù)(D)作為考察對(duì)象,以7種化合物的含量之和作為考察指標(biāo)進(jìn)行L9(34)正交實(shí)驗(yàn),直觀分析及方差分析。因素與水平見表4。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5,方差分析結(jié)果見表6。

    表4 正交實(shí)驗(yàn)的因素與水平

    Tab.4 The factors and levels of the orthogonal experiment (n=3)

    水平因素A,甲醇體積分?jǐn)?shù)/%B,提取時(shí)間/minC,提取溫度/℃D,提取次數(shù)185153512902040239525453

    表5 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    Tab.5 The results of the orthogonal experiment

    實(shí)驗(yàn)編號(hào)因素A,甲醇體積分?jǐn)?shù)/%B,提取時(shí)間/minC,提取溫度/℃D,提取次數(shù)含量/mg·g-1111110.553 1212220.911 0313330.665 7421230.611 0522310.554 2623120.737 3731320.629 2832130.591 8933210.377 9K12.129 81.793 31.882 21.485 2K21.902 52.057 01.899 02.277 5K31.598 91.780 91.849 11.868 5R0.530 90.276 10.050 80.792 3SS0.047 30.016 20.000 40.104 7

    由表5可知,RD>RA>RB>RC,故提取次數(shù)對(duì)7種化合物得率的影響最大,其次為甲醇體積分?jǐn)?shù)、提取時(shí)間和提取溫度。綜合直觀分析得出,最優(yōu)提取工藝為A1B2C2D2,即體積分?jǐn)?shù)為85%的甲醇,溫度為40 ℃,超聲提取2次,每次20 min。以提取溫度為誤差行列進(jìn)行方差分析,結(jié)果見表6。

    表6 方差分析結(jié)果

    Tab.6 Results of variance analysis

    因素SSfSFPA,甲醇體積分?jǐn)?shù)/%0.047 32.000 00.023 6106.702 3<0.01B,提取時(shí)間/min0.016 22.000 00.008 136.576 3<0.05C,提取溫度/℃0.000 42.000 00.000 21.000 0>0.05D,提取次數(shù)0.104 72.000 00.052 3236.102 2<0.01

    由表6可知,提取次數(shù)、甲醇體積分?jǐn)?shù)和提取時(shí)間對(duì)7種化合物的總提取率影響顯著。

    4 樣品含量的測(cè)定

    分別取毛菊苣種子及根,按照3.2項(xiàng)下優(yōu)化出的提取工藝制備供試品溶液,進(jìn)樣量為10 μL,按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行HPLC色譜系統(tǒng)測(cè)定。分別記錄7種化合物的峰面積,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,外標(biāo)法計(jì)算各化合物的含量,測(cè)定結(jié)果見表7。

    表7 含量測(cè)定結(jié)果

    Tab.7 Results of content determination (mg·g-1,n=3)

    序號(hào)秦皮甲素綠原酸秦皮乙素咖啡酸蘆丁菊苣酸槲皮苷總計(jì)S30.122 001.243 000.135 000.009 090.012 100.120 08.86910.51S60.031 301.250 000.076 000.017 100.027 000.128 010.81712.35S80.017 101.437 000.033 900.006 210.010 300.138 09.64011.28S90.016 401.125 000.076 300.009 310.022 600.148 09.83011.23S10-0.958 000.018 400.004 660.012 400.206 08.5309.73S110.251 000.700 000.520 000.017 800.092 800.337 05.2997.22S130.002 850.920 000.023 600.005 08-0.156 05.3305.49S160.008 781.390 000.061 600.010 100.020 800.101 012.20013.79S170.020 701.070 000.057 400.008 74-0.091 87.8407.93S190.015 901.190 000.047 500.009 910.024 100.050 411.35012.69S200.011 201.300 000.031 200.011 90-0.148 011.01011.16S210.019 801.110 000.088 300.008 520.027 100.160 09.90011.31S10.003 020.078 40-0.001 320.006 470.178 00.5910.78S20.003 290.099 800.002 250.001 960.009 080.196 00.7241.04S5-0.004 080.003 030.006 300.070 000.072 00.3220.48S70.001 380.028 60--0.007 160.165 00.1890.36S120.001 500.016 200.004 84-0.005 520.076 10.1750.26S140.028 100.032 800.090 400.012 700.034 600.641 01.2802.12S150.011 700.013 400.034 400.005 370.058 800.268 00.7871.18S180.001 700.041 10-0.001 360.012 300.053 70.4080.48S4-0.016 700.003 240.008 050.074 300.106 00.1480.36S220.001 580.041 200.002 200.000 800.028 900.090 00.1400.30

    注:-表示未檢測(cè)到。

    5 討論

    本課題組前期采用HPLC法同時(shí)測(cè)定了毛菊苣中秦皮甲素、秦皮乙素、菊苣酸、山萵苣素和山萵苣苦素5種化合物的含量[11]。綠原酸具有顯著的抗氧化[12-13]、消炎、抗菌[14-15]和保肝[16]等作用;槲皮苷具有抗腫瘤[17]、抗氧化[18]和鎮(zhèn)靜催眠[19]等作用;蘆丁具有抗病毒[20]、抗氧化[21]和拮抗血小板活化因子[22]等作用;咖啡酸具有抗炎[23]、抗血小板聚集[24]和抗腫瘤[25-26]等作用。鑒于上述化合物豐富的藥理作用,本實(shí)驗(yàn)建立了同時(shí)測(cè)定毛菊苣中秦皮甲素、綠原酸、秦皮乙素、咖啡酸、蘆丁、菊苣酸和槲皮苷7種化合物的HPLC法,該方法保留時(shí)間短(40 min內(nèi)),快速簡(jiǎn)便,重復(fù)性好,適合于毛菊苣藥材的質(zhì)量控制。

    采用單因素實(shí)驗(yàn)和L9(34)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了毛菊苣藥材中7種化合物的提取方法,分別對(duì)10批毛菊苣根和12批毛菊苣種子進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果顯示,毛菊苣根和毛菊苣種子中7種化合物含量差異較大,種子中化合物總含量是根中的13.4倍。毛菊苣種子中含量最大的為槲皮苷,占7種化合物總含量的86.3%,其次依次為綠原酸、菊苣酸、秦皮乙素、秦皮甲素、蘆丁和咖啡酸,含量分別為10.7%,1.4%,0.9%,0.4%,0.2%和0.1%。在毛菊苣根中槲皮苷含量最大,占7種化合物總含量的65.3%,其次依次為菊苣酸、綠原酸、蘆丁、秦皮乙素、秦皮甲素和咖啡酸,含量分別為24.8%,4.7%,2.1%,2.1%,0.8%和0.3%。毛菊苣種子中秦皮甲素、綠原酸、秦皮乙素、咖啡酸和槲皮苷的含量分別是根中的8.2,30.7,7.0,2.4和19.4倍。

    《中國(guó)藥典》2015年版收載的菊苣及毛菊苣的藥用部位為根及全草,未收載種子入藥,而維吾爾醫(yī)學(xué)中常采用毛菊苣的根和種子及其藥對(duì),如護(hù)肝布祖熱顆粒、炎消迪娜爾糖漿和復(fù)方木尼孜其顆粒等,前期研究顯示,毛菊苣根中的主要成分為山萵苣素和山萵苣苦素[11],結(jié)合本文研究結(jié)果,毛菊苣種子中7種有效成分總含量明顯高于根中的總含量,說(shuō)明維吾爾醫(yī)使用毛菊苣種子及種子-根藥對(duì)具有一定的科學(xué)性,但還需結(jié)合藥效實(shí)驗(yàn)深入分析。本實(shí)驗(yàn)可為毛菊苣藥用部位的開發(fā)和維吾爾復(fù)方研究提供理論依據(jù)。

    猜你喜歡
    秦皮槲皮苷菊苣
    HPLC-PDA雙波長(zhǎng)法同時(shí)測(cè)定四季草片中沒食子酸和槲皮苷的含量
    HPLC測(cè)定維藥玫瑰花瓣中金絲桃苷 異槲皮苷和槲皮苷的含量△
    HPLC法測(cè)定地耳草中槲皮苷和異槲皮苷含量的不確定度評(píng)定
    快樂環(huán)游記
    產(chǎn)地加工與炮制一體化工藝對(duì)秦皮飲片抗炎作用的影響*
    寄主樹種和采收期對(duì)廣西桑寄生槲皮苷含有量的影響
    中成藥(2014年9期)2014-02-28 22:28:59
    菊苣無(wú)公害栽培技術(shù)及利用
    紅旗農(nóng)場(chǎng)菊苣高產(chǎn)栽培
    初戀
    初 戀
    国产黄a三级三级三级人| 国产精华一区二区三区| 精品日产1卡2卡| 男男h啪啪无遮挡| 欧美日韩精品网址| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 51午夜福利影视在线观看| 制服诱惑二区| av国产精品久久久久影院| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 免费少妇av软件| 女性生殖器流出的白浆| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 麻豆一二三区av精品| 一级黄色大片毛片| 亚洲第一青青草原| 国产精华一区二区三区| 窝窝影院91人妻| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 18禁美女被吸乳视频| 免费在线观看亚洲国产| 咕卡用的链子| 91成人精品电影| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| av国产精品久久久久影院| 欧美日韩黄片免| 久久精品国产清高在天天线| 大香蕉久久成人网| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 在线观看免费视频网站a站| 中文字幕人妻丝袜制服| 精品欧美一区二区三区在线| 国产精品久久久久成人av| 精品人妻1区二区| 国产一区二区激情短视频| 真人一进一出gif抽搐免费| 91大片在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| 欧美在线黄色| 欧美激情高清一区二区三区| 中文字幕色久视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 成人三级黄色视频| cao死你这个sao货| 黑人猛操日本美女一级片| 色老头精品视频在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美成人性av电影在线观看| 精品欧美一区二区三区在线| 激情在线观看视频在线高清| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 久久久久九九精品影院| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲成人久久性| 99热只有精品国产| 欧美乱妇无乱码| 久久国产精品人妻蜜桃| 午夜视频精品福利| 日韩视频一区二区在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产伦一二天堂av在线观看| 啦啦啦免费观看视频1| 满18在线观看网站| 国产av一区在线观看免费| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 91成人精品电影| 午夜亚洲福利在线播放| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲午夜理论影院| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 黄色女人牲交| 久久精品亚洲av国产电影网| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲九九香蕉| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 一区二区三区精品91| 99国产精品一区二区蜜桃av| 18美女黄网站色大片免费观看| 夜夜爽天天搞| 丝袜美腿诱惑在线| 国产黄a三级三级三级人| 交换朋友夫妻互换小说| 这个男人来自地球电影免费观看| 中文字幕色久视频| 中亚洲国语对白在线视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 99国产精品一区二区蜜桃av| 99热只有精品国产| 99riav亚洲国产免费| 制服人妻中文乱码| 99国产极品粉嫩在线观看| 大陆偷拍与自拍| 极品人妻少妇av视频| 韩国av一区二区三区四区| 搡老岳熟女国产| 亚洲av第一区精品v没综合| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲一区中文字幕在线| 精品人妻在线不人妻| 男人的好看免费观看在线视频 | av有码第一页| 欧美成人免费av一区二区三区| 九色亚洲精品在线播放| 免费高清视频大片| 免费在线观看亚洲国产| 一二三四在线观看免费中文在| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲人成电影观看| 脱女人内裤的视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 又大又爽又粗| 男男h啪啪无遮挡| 波多野结衣av一区二区av| 满18在线观看网站| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 97碰自拍视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 日韩欧美在线二视频| 久久精品91蜜桃| 女性生殖器流出的白浆| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 少妇 在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 美女福利国产在线| 国产av在哪里看| 欧美在线一区亚洲| 黄色a级毛片大全视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲七黄色美女视频| 日韩欧美在线二视频| 动漫黄色视频在线观看| 国产午夜精品久久久久久| 免费在线观看亚洲国产| 97人妻天天添夜夜摸| 国产精品免费一区二区三区在线| 99热国产这里只有精品6| 在线观看舔阴道视频| 免费少妇av软件| 亚洲人成电影观看| 又黄又粗又硬又大视频| 精品国产美女av久久久久小说| 午夜免费激情av| av国产精品久久久久影院| 男女午夜视频在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 午夜精品在线福利| 老司机亚洲免费影院| 欧美黑人精品巨大| 人人妻人人澡人人看| 女性被躁到高潮视频| 久久中文看片网| 人人妻人人澡人人看| 亚洲国产精品合色在线| 欧美日本中文国产一区发布| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲精品成人av观看孕妇| 一二三四社区在线视频社区8| 两人在一起打扑克的视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 99热只有精品国产| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 岛国在线观看网站| 日韩三级视频一区二区三区| e午夜精品久久久久久久| 97人妻天天添夜夜摸| 老汉色av国产亚洲站长工具| 免费不卡黄色视频| 在线观看www视频免费| 午夜福利免费观看在线| 伦理电影免费视频| 亚洲国产精品999在线| 啪啪无遮挡十八禁网站| 高潮久久久久久久久久久不卡| av天堂在线播放| 夜夜爽天天搞| 国产1区2区3区精品| 国产不卡一卡二| 青草久久国产| 亚洲国产精品合色在线| 免费高清在线观看日韩| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲国产欧美一区二区综合| netflix在线观看网站| 少妇被粗大的猛进出69影院| www国产在线视频色| 九色亚洲精品在线播放| 久久久国产精品麻豆| 日韩欧美在线二视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 免费看十八禁软件| 欧美人与性动交α欧美软件| 在线天堂中文资源库| 久久草成人影院| 天堂俺去俺来也www色官网| 俄罗斯特黄特色一大片| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| avwww免费| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 精品国内亚洲2022精品成人| 在线观看一区二区三区| 香蕉国产在线看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 在线免费观看的www视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 露出奶头的视频| www.熟女人妻精品国产| 国产男靠女视频免费网站| 麻豆av在线久日| 热re99久久国产66热| 精品一品国产午夜福利视频| 性少妇av在线| 丝袜在线中文字幕| 欧美成人性av电影在线观看| 91在线观看av| 久久久水蜜桃国产精品网| 欧美成人免费av一区二区三区| 超碰97精品在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 看黄色毛片网站| 另类亚洲欧美激情| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 精品久久久久久成人av| 老司机靠b影院| 日日干狠狠操夜夜爽| 日日夜夜操网爽| 国产在线观看jvid| 午夜老司机福利片| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产精品九九99| 夫妻午夜视频| 精品一区二区三卡| 性少妇av在线| 大型黄色视频在线免费观看| 成人手机av| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 嫩草影院精品99| av天堂久久9| 波多野结衣av一区二区av| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| www日本在线高清视频| 女性生殖器流出的白浆| 看免费av毛片| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲男人的天堂狠狠| 自线自在国产av| 1024视频免费在线观看| 老司机在亚洲福利影院| 国产伦人伦偷精品视频| 黄色毛片三级朝国网站| 天堂√8在线中文| 黑人猛操日本美女一级片| 国产三级在线视频| 99在线视频只有这里精品首页| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产一区二区在线av高清观看| 成人亚洲精品av一区二区 | 美女扒开内裤让男人捅视频| 丁香欧美五月| 国产精品亚洲av一区麻豆| 免费在线观看影片大全网站| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲精品成人av观看孕妇| 18禁美女被吸乳视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 深夜精品福利| 久久国产精品人妻蜜桃| 午夜免费观看网址| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产男靠女视频免费网站| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产99白浆流出| 日韩人妻精品一区2区三区| 精品国产国语对白av| 日本黄色日本黄色录像| xxx96com| 午夜免费观看网址| 国产片内射在线| 日韩成人在线观看一区二区三区| 中文字幕人妻熟女乱码| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 丝袜人妻中文字幕| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产亚洲精品久久久久5区| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲精品美女久久av网站| www.熟女人妻精品国产| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 成人国语在线视频| 久久国产乱子伦精品免费另类| 久9热在线精品视频| 亚洲三区欧美一区| 日韩人妻精品一区2区三区| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲色图综合在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 搡老乐熟女国产| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲国产精品999在线| 人人妻人人澡人人看| 国产成人欧美| 制服诱惑二区| 悠悠久久av| 91国产中文字幕| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美在线一区亚洲| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 久久人妻熟女aⅴ| 咕卡用的链子| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 在线观看舔阴道视频| 成人免费观看视频高清| 国产精品野战在线观看 | 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 深夜精品福利| xxxhd国产人妻xxx| 国产午夜精品久久久久久| 午夜免费鲁丝| 国产精品一区二区三区四区久久 | a在线观看视频网站| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 51午夜福利影视在线观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 51午夜福利影视在线观看| netflix在线观看网站| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 99久久综合精品五月天人人| 精品国产一区二区三区四区第35| 欧美成人免费av一区二区三区| 成人三级黄色视频| 一级片'在线观看视频| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 少妇粗大呻吟视频| 欧美精品一区二区免费开放| 老司机靠b影院| 一区在线观看完整版| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲人成电影免费在线| 99久久人妻综合| 国产麻豆69| 纯流量卡能插随身wifi吗| av福利片在线| 久久久久亚洲av毛片大全| 操出白浆在线播放| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产成人av教育| 国产精品综合久久久久久久免费 | 久久久久国产一级毛片高清牌| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 大码成人一级视频| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产精品久久电影中文字幕| 两个人免费观看高清视频| 亚洲avbb在线观看| 国产av一区二区精品久久| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲片人在线观看| 成人18禁在线播放| 岛国视频午夜一区免费看| 91大片在线观看| 在线免费观看的www视频| 国产在线精品亚洲第一网站| www.999成人在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 淫秽高清视频在线观看| 在线国产一区二区在线| 国产精品av久久久久免费| 日韩免费高清中文字幕av| 国产伦人伦偷精品视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 日韩高清综合在线| 妹子高潮喷水视频| 99久久国产精品久久久| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 神马国产精品三级电影在线观看 | 91麻豆精品激情在线观看国产 | 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲av成人一区二区三| 91av网站免费观看| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 免费人成视频x8x8入口观看| 中文字幕最新亚洲高清| 十八禁网站免费在线| 国产精品野战在线观看 | 美女国产高潮福利片在线看| 日韩高清综合在线| 国产高清视频在线播放一区| 免费不卡黄色视频| 亚洲国产看品久久| 成人18禁在线播放| 十八禁网站免费在线| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 夜夜夜夜夜久久久久| 午夜影院日韩av| 老司机福利观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产高清videossex| 亚洲成人国产一区在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 黄色视频,在线免费观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 电影成人av| 又紧又爽又黄一区二区| 久久香蕉激情| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲精品国产一区二区精华液| 一进一出好大好爽视频| 窝窝影院91人妻| 嫩草影院精品99| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 成人影院久久| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 99久久99久久久精品蜜桃| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 成在线人永久免费视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 欧美中文日本在线观看视频| 无遮挡黄片免费观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 1024香蕉在线观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲精华国产精华精| 亚洲中文字幕日韩| 99热国产这里只有精品6| 欧美日本亚洲视频在线播放| av网站在线播放免费| 80岁老熟妇乱子伦牲交| av国产精品久久久久影院| av在线天堂中文字幕 | 久久久精品欧美日韩精品| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲黑人精品在线| 久久精品91蜜桃| 99久久国产精品久久久| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 99国产精品免费福利视频| 久久 成人 亚洲| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 欧美日韩精品网址| 久久香蕉激情| 国产在线观看jvid| 欧美久久黑人一区二区| 国产免费现黄频在线看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 日韩大码丰满熟妇| 三上悠亚av全集在线观看| 操美女的视频在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| xxxhd国产人妻xxx| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲三区欧美一区| 亚洲欧美激情综合另类| 精品人妻在线不人妻| 一级毛片女人18水好多| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 午夜激情av网站| 在线观看午夜福利视频| 成人国产一区最新在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 午夜免费观看网址| 色播在线永久视频| 亚洲精华国产精华精| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲激情在线av| 国产激情欧美一区二区| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产极品粉嫩免费观看在线| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 欧美大码av| 露出奶头的视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 麻豆国产av国片精品| 国产男靠女视频免费网站| 免费av中文字幕在线| 亚洲精品粉嫩美女一区| 美女国产高潮福利片在线看| 男人操女人黄网站| 波多野结衣av一区二区av| 91大片在线观看| 午夜福利在线免费观看网站| 欧美精品啪啪一区二区三区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产三级在线视频| 最近最新中文字幕大全电影3 | 村上凉子中文字幕在线| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲国产精品sss在线观看 | 国产不卡一卡二| 夫妻午夜视频| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 女性被躁到高潮视频| 久久久国产欧美日韩av| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产精品影院久久| 桃色一区二区三区在线观看| 在线观看一区二区三区激情| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产不卡一卡二| 成人三级做爰电影| 一区福利在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产成人啪精品午夜网站| 另类亚洲欧美激情| 久久影院123| 在线永久观看黄色视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 女性被躁到高潮视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 日韩精品中文字幕看吧| 日本a在线网址| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产午夜精品久久久久久| 啦啦啦在线免费观看视频4| 少妇被粗大的猛进出69影院| 久久青草综合色| 亚洲九九香蕉| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 一夜夜www| 欧美日韩精品网址| 两性夫妻黄色片| 日本五十路高清| 91麻豆av在线| 免费av毛片视频| 制服人妻中文乱码| 啦啦啦 在线观看视频| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲精品国产区一区二| 午夜老司机福利片| 国产不卡一卡二| 国产精品一区二区免费欧美| 一个人免费在线观看的高清视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 一边摸一边抽搐一进一小说| 激情视频va一区二区三区| 一区二区三区精品91| 亚洲精品中文字幕在线视频| 一进一出抽搐动态| 亚洲少妇的诱惑av| 国产精品 欧美亚洲| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 丁香六月欧美| 亚洲av电影在线进入| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 超色免费av| 久久婷婷成人综合色麻豆| 在线av久久热| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 黄片播放在线免费| 99国产综合亚洲精品| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 午夜两性在线视频| 国产麻豆69| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产1区2区3区精品| 交换朋友夫妻互换小说| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲 欧美一区二区三区| 日日干狠狠操夜夜爽| 超碰97精品在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| 婷婷六月久久综合丁香| 久久国产亚洲av麻豆专区| 交换朋友夫妻互换小说| 久久久久久人人人人人| av网站在线播放免费| 男女床上黄色一级片免费看| 真人做人爱边吃奶动态| 久久久久久久精品吃奶| 超碰97精品在线观看| 欧美色视频一区免费| 男女午夜视频在线观看| 欧美大码av| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 午夜成年电影在线免费观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 精品国产乱子伦一区二区三区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 国产精品爽爽va在线观看网站 | 亚洲七黄色美女视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲人成电影免费在线| 国产精品久久久av美女十八|