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    HPLC法測定新疆棉籽中棉酚含量

    2019-05-14 09:44毛瓊玲崔銀倉陳國通韓飛郭偉張玉霞
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年1期
    關(guān)鍵詞:棉酚棉籽高效液相色譜法

    毛瓊玲 崔銀倉 陳國通 韓飛 郭偉 張玉霞

    (1.新疆維吾爾自治區(qū)分析測試研究院,新疆烏魯木齊830000;2.烏魯木齊市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心,新疆烏魯木齊830000;3.新疆工程學(xué)院,新疆烏魯木齊830000)

    摘要[目的]通過建立高效液相色譜法(HPLC)進(jìn)行棉籽中游離棉酚的含量測定。[方法]樣品用乙醇提取,用HPLC進(jìn)行檢測。液相條件為:AgilentSB-C18(250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相為甲醇∶0.1%磷酸=85∶15,檢測波長235nm,柱溫35℃,流速0.8mL/min,進(jìn)樣量10μL。[結(jié)果]游離棉酚在1.06~42.40μg/mL線性關(guān)系良好,精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性的RSD<2%。對(duì)全疆20個(gè)棉籽進(jìn)行含量測定,樣品含量為25~4887mg/kg。[結(jié)論]該方法具有良好的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度、靈敏度和回收率,可以適用于棉籽中游離棉酚的含量測定。

    關(guān)鍵詞棉籽;棉酚;高效液相色譜法

    中圖分類號(hào)TS207文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

    文章編號(hào)0517-6611(2019)01-0216-02

    doi:10.3969/j.issn.0517-6611.2019.01.063

    開放科學(xué)(資源服務(wù))標(biāo)識(shí)碼(OSID):

    棉酚(gossypol),又稱棉花毒素,是一種黃色多羥基雙萘醛化合物,主要分布在錦葵科植物樹棉、草棉或陸地棉根皮、成熟種子、莖稈中色素腺體中[1]。棉酚可分為左旋棉酚[(-)-棉酚]和右旋棉酚[(+)-棉酚]2種光學(xué)異構(gòu)體。(+)-棉酚幾乎無活性,而(-)-棉酚表現(xiàn)出更強(qiáng)的藥用活性,如抗生育[2]、抗腫瘤[3]、抗病毒[4]和抗菌作用[5]。

    新疆是我國棉花的主產(chǎn)區(qū),未脫毒或脫毒未完全的棉籽飼料中含有棉酚,棉酚會(huì)在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)生代謝或蓄積[6]。人們食用這類動(dòng)物源性食品后,游離棉酚及其主要代謝產(chǎn)物(棉酚酮)可能會(huì)通過食物進(jìn)入人體各組織,危害人體健康[7]。為了防止棉籽餅粕中棉酚對(duì)人的傷害,對(duì)其含量的測定顯得尤為重要。目前,檢測游離棉酚的方法主要有分光光度法[8]、薄層層析法[9]、高效液相色譜法[10]等。該研究采用高效液相色譜檢測技術(shù),建立了HPLC法測定棉籽中棉酚含量的定量分析方法,并對(duì)新疆近年來棉籽中棉酚含量進(jìn)行測定和監(jiān)控。

    1材料與方法

    1.1試材棉酚參照品(濃度為88.2%以上),甲醇、乙腈為色譜純,磷酸為優(yōu)級(jí)純,乙醇、乙酸為分析純,水為一級(jí)水。

    1.2儀器Agilent1260高效液相色譜儀、萬分之一電子天平、渦旋混勻器(IKA公司)、數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

    1.3樣品制備采摘棉花后,剝?nèi)ッ奁?,取出棉花,留下棉籽。?duì)棉籽進(jìn)行初步打碎,把棉籽殼取出進(jìn)行再次粉碎,最后粉碎過200目篩子。

    1.4試驗(yàn)方法

    1.4.1標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。稱取棉酚標(biāo)準(zhǔn)品0.0060g,加甲醇超聲溶解,待完全溶解后定容至25mL容量瓶中,搖勻備用,-20℃條件保存。棉酚標(biāo)準(zhǔn)濃度為212μg/mL。有效期為3個(gè)月。取不同體積上述標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇稀釋成不同濃度的溶液,備用。

    1.4.2前處理的優(yōu)化。提取溶劑為丙酮∶水=70∶30、甲醇、乙醇、乙腈。因丙酮屬于易制毒試劑,在液相色譜圖上有響應(yīng)高的干擾峰;乙腈毒性大,且成本高;甲醇屬于工業(yè)乙醇;而乙醇提取效率高、安全性較可靠、性價(jià)比較高,對(duì)于人體的危害較小。因此,最終選用乙醇為提取溶劑。

    1.4.3最大吸收波長。對(duì)棉酚標(biāo)準(zhǔn)品在200~800nm條件下進(jìn)行分光光度計(jì)全波掃描,最終確定最大吸收波長為235nm。

    1.4.4色譜條件。Agilent1260高效液相色譜儀,紫外檢測器;色譜柱:AgilentSB-C18(250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸=85∶15;流速0.8mL/min;檢測波長為235nm;進(jìn)樣時(shí)間20min;柱溫35℃;進(jìn)樣量10μL。

    2結(jié)果與分析

    2.1穩(wěn)定性試驗(yàn)取濃度為8.48μg/mL棉酚標(biāo)準(zhǔn)溶液分別以2、4、6、8、10、12、16、20、24h連續(xù)進(jìn)樣9針。結(jié)果發(fā)現(xiàn),峰面積分別為801、798、791、785、768、773、749、732、721,可見峰面積穩(wěn)定,表明該方法穩(wěn)定性良好。

    2.2精密度試驗(yàn)取濃度為10μg/mL棉酚標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6針,峰面積分別為890、894、888、890、890、885,通過峰面積計(jì)算RSD值為0.32%,表明該方法精密度良好。

    2.3重復(fù)性試驗(yàn)取6份同一樣品中棉酚含量進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)峰面積分別為411、421、420、417、421、423,計(jì)算峰面積的RSD值為1.0%,表明該方法重復(fù)性良好。

    2.4回收率試驗(yàn)對(duì)空白樣品進(jìn)行高、中、低3個(gè)濃度回收率試驗(yàn)檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)(表1),棉酚回收率為85.7%~95.8%,回收率較好。

    2.5校正曲線的繪制取濃度為21.20μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.05、0.20、0.40、0.50、1.00、2.00mL分別置于10mL容量瓶中,加甲醇定容,搖勻、備用。以標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1),通過計(jì)算得知回歸方程為(r=0.999945),表明標(biāo)準(zhǔn)曲線在1.06~42.40μg/mL線性關(guān)系良好。

    2.6樣品測定稱取已制備的棉酚樣品0.2g(準(zhǔn)確至

    0.0001g),加入乙醇10mL,超聲提取15min,3000r/min離

    心5min,將上清液轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中;加入乙醇5mL,超

    聲10min,離心,重復(fù)提取2次。將3次提取的上清液全部轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中,定容,搖勻,避光備用。按“1.4.4”液相色譜條件進(jìn)行測定,發(fā)現(xiàn)棉酚含量為25~4887mg/kg。

    3結(jié)論與討論

    該研究建立了棉籽粕中游離棉酚的HPLC測定。樣品用乙醇提取,用HPLC進(jìn)行檢測。液相條件為AgilentSB-C18(250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相為甲醇∶0.1%磷酸=85∶15,檢測波長235nm,柱溫35℃,流速0.8mL/min,進(jìn)樣量10μL。游離棉酚在1.06~42.40μg/mL線性關(guān)系良好,精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性的RSD<2%。該方法具有良好的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度、靈敏度和回收率,可以適用于棉籽中游離棉酚的含量測定。

    對(duì)全疆不同地區(qū)25個(gè)棉籽樣品進(jìn)行含量測定,由于棉花品種及產(chǎn)地的不同,棉酚含量為25~4887mg/kg。棉酚含量較高,存在潛在的隱患風(fēng)險(xiǎn),棉籽需要進(jìn)行脫毒處理后,才能安全使用。

    參考文獻(xiàn)

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    [3]陳黃鴻,吳勇.棉酚及其衍生物抗腫瘤機(jī)制的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2017,23(19):3769-3773.

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    [6]袁潔,任麗君,李東雨,等.UPLC-MS/MS法測定游離棉酚及其代謝產(chǎn)物棉酚酮在大鼠體內(nèi)的組織分布[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2017,40(11):1458-1461.

    [7]周衛(wèi)東,鄭文新,高維明,等.畜禽產(chǎn)品中游離棉酚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究進(jìn)展[J].草食家畜,2014,35(5):12-15.

    [8]中華人民共和國技術(shù)監(jiān)督局.飼料中游離棉酚的測定方法:GB/T13086—1991[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,1991.

    [9]沈靜,陽勝,于紅,等.高效薄層色譜法測定棉籽油中游離棉酚含量[J].光譜實(shí)驗(yàn)室,2011,28(1):235-238.

    [10]吳偉偉,許贛榮.HPLC法測定棉籽餅粕飼料中的游離棉酚[J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2009,32(5):105-107,118.

    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),J.AnhuiAgric.Sci.2019,47(1):218-220

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