三七傷藥片中重金屬及有害元素的測定及安全性評價

馬昌豪，曲智雅，仝桂平，李懷偉

(菏澤市食品藥品檢驗檢測研究院,山東 菏澤 274000)

三七傷藥片為《中國藥典》2015年版一部收載品種。該制劑由三七、制草烏、骨碎補、接骨木、赤芍、紅花、冰片、雪上一枝蒿8味藥材制成，除冰片外，制草烏、三七、雪上一枝蒿粉碎成細粉；冰片研細；其余四味加水煎煮后與細粉混合制成。該藥為活血消腫劑，具有舒筋活血，散瘀止痛功效[1-2]。該藥療效顯著，臨床應用較多?，F(xiàn)行研究主要集中在該藥的藥理作用及活性成分，對其重金屬及有害元素的分析尚無報道，重金屬及有害元素容易在體內(nèi)蓄積，超過一定量后易對人體產(chǎn)生較大的危害[3]，該藥部分藥材為原粉投料，制劑存在重金屬污染的風險，因此測定三七傷藥片的重金屬及有害元素對于保證人民群眾用藥安全和藥品質(zhì)量具有重要的意義。

目前重金屬及有害元素的測定方法有原子吸收分光光度法、原子熒光法、電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)。其中電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)可以同時測定多種元素，具有準確、快速、靈敏度高的特點[4]。本研究采用微波消解對樣品進行前處理，利用ICP-MS對三七傷藥片中的五種重金屬及有害元素(鉛、鎘、砷、汞、銅)進行同時測定。

1 儀器與試藥

ETHOS UP微波消解儀(Milestonesrl公司)，7700 Series ICP-MS(Agilent Technologies),XS-105電子天平(瑞士梅特勒公司)，Milli-Q超純水儀(Millipore公司)雙氧水為分析純，硝酸為優(yōu)級純。

鉛、鎘、砷、銅、汞單元素標準溶液(國家有色金屬及電子材料分析測試中心 濃度均為1000μg/mL)，金標準溶液(中國計量科學研究院 濃度：1000μg/mL 批號：GSB 04-1715-2004)，內(nèi)標標準溶液(Agilent Technologies 濃度：100μg/mL批號：20-41VYY2)。

標樣(按照三七傷藥片處方比例自制)，其余樣品為抽檢樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 標準溶液的制備

分別精密量取鉛、鎘、砷、銅、汞各元素標準溶液適量，加10%硝酸逐級稀釋，制成每1mL含鉛、砷0ng、1ng、5ng、10ng、20ng，含鎘0ng、0.5ng、2.5ng、5ng、10ng，含銅0ng、50ng、100ng、200ng、500ng，含汞0ng、0.2ng、0.5ng、1ng、2ng、5ng的混合標準品溶液。

2.2 內(nèi)標溶液的制備

精密量取內(nèi)標標準溶液適量，用水稀釋制成每1mL含Ge、In、Bi各1μg的混合溶液。精密量取金標準溶液適量，用1.5mol/L的HCl逐級稀釋，制成濃度為1μg/mL的金單元素標準溶液。

2.3 供試品溶液的制備

將供試品粉碎，取粗粉0.5g，精密稱定，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸7mL和3mL雙氧水，混勻，放置過夜。密閉，置微波消解儀中按照表1中的程序消解，消解完畢后，將消解液轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，用少量水洗滌消解罐3次，洗液合并于量瓶中，加入金單元素標準溶液(1μg/mL)200μL，用水稀釋至刻度，離心取上清液，即得。除不加金單元素標準溶液外，余同法制備試劑空白溶液。

表1 程序升溫表

2.4 測定方法

測定時選取的同位素為63Cu、75As、114Cd、202Hg和208Pb，其中63Cu、75As以72Ge作為內(nèi)標，114Cd以115In作為內(nèi)標，202Hg、208Pb以209Bi作為內(nèi)標。依次將儀器的樣品管插入各個濃度的標準品溶液中進行測定(濃度依次遞增)，以測量值(3次讀數(shù)的平均值)為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。將儀器的樣品管插入供試品溶液中，測定，取3次讀數(shù)的平均值。從標準曲線上計算得相應的濃度。

2.5 方法學考察

2.5.1 線性關(guān)系考察

參照2.4項下測定方法，以測量值為縱坐標，以各元素濃度為橫坐標，繪制標準曲線。標準曲線見表2 。

表2 五種元素標準曲線及線性范圍

2.5.2 精密度試驗

取自制標樣一份，按照2.3項下方法處理，重復測定6次，分別計算各元素的響應值的相對標準偏差，鉛、鎘、砷、銅、汞的分別為1.1%、1.0%、0.9%、1.3%、0.6%，精密度良好。

2.5.3 重復性試驗

取自制標樣六份，按照2.3項下方法處理，分別測定，計算各元素的響應值的相對標準偏差，鉛、鎘、砷、銅、汞的分別為1.6%、2.2%、1.7%、1.3%、2.6%，重復性良好。

2.5.4 檢測限

制備樣品空白，連續(xù)測定7次，以3倍空白溶液的標準偏差除以線性關(guān)系系數(shù)作為不同元素的檢測限。鉛、鎘、砷、銅、汞的檢測限分別為0.02mg/kg、0.01mg/kg、0.005mg/kg、0.03mg/kg、0.007mg/kg。

2.5.5 回收試驗

取自制標樣六份各0.5g，精密稱定，分別加入適量濃度的對照品溶液，按照2.3項供試品溶液制備方法處理樣品，計算回收率，結(jié)果見表3。根據(jù)表3可知，該方法準確度良好。

表3 五種元素回收率

2.6 樣品測定結(jié)果

三七傷藥片無重金屬限度檢查，但該藥品中有部分原粉投料，并無礦石類藥材投料，可參照《中國藥典》中藥材重金屬及有害元素檢查項下的限度作為評判標準。對16批次三七傷藥片樣品進行測定，結(jié)果見表4。

表4 16批次樣品五種元素含量

根據(jù)測定結(jié)果可知：16批次樣品的重金屬及有害元素均低于限度要求。

3 討論

三七傷藥片為復方制劑，含有較多的有機物，微波消解程度對重金屬及有害元素測定數(shù)據(jù)的準確性有重要的影響，通過比較不同消解溶液，結(jié)合微波消解儀的使用要求，最終確定采用硝酸7mL和3mL雙氧水作為消解液。

藥物安全性評價藥品質(zhì)量的重要因素，中藥材及飲片受生長環(huán)境及產(chǎn)地加工的影響，重金屬及有害元素的限量一直是評價其質(zhì)量的關(guān)鍵性因素，現(xiàn)行藥典標準中僅對部分藥材的重金屬及有害元素的限度進行規(guī)定，制劑標準很少涉及到安全性評價指標，通過ICP-MS通過測定三七傷藥片中重金屬及有害元素的測定，是對其安全性評價評價方法的探索，該方法準確、快捷、重現(xiàn)性好，靈敏度高，能夠滿足方法學要求，為完善三七傷藥片標準的安全性評價指標要求提供參考。按照該方法檢驗，抽檢的16批次三七傷藥片的重金屬及有害元素含量均低于的限度要求，說明生產(chǎn)企業(yè)的原料采購及生產(chǎn)過程控制在重金屬攝入方面安全性能夠滿足標準要求。