Ezrin及L1CAM蛋白表達水平與結腸癌發(fā)生發(fā)展的關系研究

趙金，黃濤，趙磊，張偉，杜彥斌

北京市大興區(qū)人民醫(yī)院普外科 北京 102600

伊朗的一項流行病學研究報道顯示，結腸癌的發(fā)病率約為438/10 000人［1］，而在具有相關高危因素的群體中，結腸癌的發(fā)病率可能更高［2］。早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷及早期治療結腸癌可以延長患者生存時間，改善生存質量。近年來，腫瘤相關基因和蛋白表達水平的改變在結腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用逐漸受到臨床重視，其中腫瘤相關蛋白表達量的改變在結腸癌的病情進展過程中發(fā)揮著重要調(diào)控作用［3-4］，因而檢測腫瘤相關蛋白的表達對結腸癌診治具有一定的指導意義。Ezrin蛋白的表達上調(diào)會通過提高癌細胞內(nèi)肌動蛋白的激活程度，提高癌細胞的浸潤和粘附能力，進一步加劇癌細胞的上皮間質轉換，進而促進惡性腫瘤細胞分裂增殖，加快腫瘤進展［5］；細胞黏附分子L1（L1CAM）是粘附分子家族成員，其能夠通過促進癌細胞的粘附，促進癌細胞通過血管及淋巴管進行轉移，進而參與惡性腫瘤的進展過程［6］。已有研究表明Ezrin、L1CAM蛋白異常表達與胃癌、食管癌的發(fā)生發(fā)展關系密切［7-8］，其異常表達會加速癌癥的進展。然而目前臨床上關于Ezrin、L1CAM蛋白的表達與結腸癌的發(fā)生發(fā)展研究相對比較少［9］。因此，為進一步探討Ezrin、L1CAM蛋白表達與結腸癌發(fā)生發(fā)展的關系，為臨床對結腸癌患者的診療提供理論依據(jù)，本次研究選取本院2016年1月至2018年6月期間手術切除獲取的80例結腸癌組織標本作為觀察組，采用免疫組織化學法檢測Ezrin、L1CAM蛋白在結腸癌組織中的表達情況，并分析其與結腸癌患者的臨床病理特征的關系，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2018年6月期間本院手術切術獲取的80例結腸癌組織標本作為觀察組，同期選取另外40例癌旁正常結腸組織標本作為對照組。兩組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05），見表1。本研究經(jīng)醫(yī)學倫理委員會批準。

表1 兩組一般資料對比

續(xù)表1

1.2 納入與排除標準

納入標準：（1）患者經(jīng)腸鏡組織活檢及術后病理學檢查證實為結腸癌［10］；（2）手術前患者無放化療病史；（3）患者的病史資料、病理學資料收集完整。排除標準：（1）轉移性結腸癌；（2）伴有血液系統(tǒng)疾?。唬?）伴有感染性疾??；（4）伴有免疫系統(tǒng)疾病。

1.3 免疫組織化學檢測方法

觀察組取腫瘤病理組織標本（1.0 cm×1.0 cm），對照組取癌旁組織標本（1.0 cm×1.0 cm）。兩組標本均進行石蠟包埋，連續(xù)性切片厚度為3μm的組織，60℃烤片60 min，常規(guī)脫水后，采用EDTA抗原修復液進行抗原修復，加入10μL蒸餾水，加入10%過氧化氫溶液5μL，室溫下孵育30 min，磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌3次，每次3 min，加入Ezrin、L1CAM蛋白的單克隆抗體（1:1 000，購自羅氏公司），37℃孵育60 min，PBS洗滌3次，每次3 min，加入HRP標記的Ezrin、L1CAM蛋白二抗（1:2 000，購自羅氏公司），37℃孵育20 min，PBS洗滌3次，每次3 min，加入DAB后，PBS沖洗和復染，脫水后在顯微鏡下（×400倍視野）進行觀察。

1.4 觀察指標

免疫組織化學結果判定：Ezrin蛋白的陽性著色表達于細胞質、細胞膜，L1CAM蛋白的陽性著色表達于細胞質，陽性染色為黃色或者更深。依據(jù)染色深淺分為：無色為0分、淡黃色為1分、棕黃色為2分、褐色或者黑色為3分。于顯微鏡400倍視野下隨機選取5個有代表性的不同區(qū)域，依據(jù)陽性細胞占視野中總細胞數(shù)的比例進行評分：占比范圍≤10%為1分、占比范圍11%～50%為2分、占比范圍51%～75%為3分、占比范圍＞75%為4分，取5個視野平均值為最后得分。染色深淺評分與陽性細胞占比評分之乘積總分＜3為陰性、≥3為陽性。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 16.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料采用（xˉ±s）表示，組間比較采用兩樣本t檢驗；計數(shù)資料以［n(%)］表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組標本中的Ezrin蛋白、L1CAM蛋白陽性表達率比較

觀察組標本中Ezrin蛋白、L1CAM蛋白陽性表達率分別為71.25%、68.75%，分別高于對照組的35.00%、25.00%，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。圖1、圖2分別為Ezrin蛋白、L1CAM蛋白免疫組織化學染色結果。

表2 兩組標本中的Ezrin蛋白、L1CAM蛋白陽性表達率比較［n(%)］

圖1 Ezrin蛋白免疫組化結果（×400）

圖2 LICAM蛋白免疫組化結果（×400）

2.2 結腸癌組織中Ezrin蛋白陽性表達率與不同病理學特征的關系

在Dukes分期為C～D期、發(fā)生漿膜侵犯、發(fā)生淋巴結轉移的結腸癌組織中Ezrin蛋白陽性表達率高于Dukes分期為A～B期、不發(fā)生漿膜侵犯、不發(fā)生淋巴結轉移者，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。見表3。

表3 不同病理學特征的結腸癌組織中Ezrin蛋白陽性表達率比較［n(%)］

2.3 結腸癌組織中L1CAM蛋白陽性表達率與不同病理學特征的關系

在Dukes分期為C～D期、發(fā)生淋巴結轉移的結腸癌組織中L1CAM蛋白陽性表達率高于Dukes分期為A～B期、不發(fā)生淋巴結轉移者，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。見表4。

表4 不同病理學特征的結腸癌組織中L1CAM蛋白陽性表達率比較［n(%)］

3 討論

結腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，相關臨床研究結果顯示，結腸癌早期治療可提高患者生存率、降低復發(fā)率［11］，提示早期診斷和治療對于改善結腸癌患者預后具有重要意義?，F(xiàn)階段仍探尋評估結腸癌病情較敏感的腫瘤學指標，雖然有研究者認為，糖鏈蛋白（CA125）或者癌胚抗原（CEA）在結腸癌的診斷及治療預后方面有一定的預測作用［12］，但有研究結果顯示，采用CA125或者CEA評估結腸癌病情的靈敏度均不超過30%，其假陽性率較高、一致性率較差［13］。本次研究通過分析結腸癌病理組織中及癌旁組織中Ezrin、L1CAM的蛋白表達情況，進一步分析結腸癌組織中Ezrin、L1CAM蛋白陽性表達率與不同病理學特征的關系，以探討Ezrin蛋白、L1CAM蛋白與結腸癌病情進展關系，從而為臨床上對結腸癌患者的診療及病情評估提供參考依據(jù)。

Ezrin蛋白能夠通過促進癌細胞骨架成分的重塑，提高癌細胞的遷移和浸潤能力［14］。Ezrin蛋白結構上含有的脯氨酸和絲氨酸結構，能夠通過結合正常組織細胞膜上的糖蛋白配體，進而加劇腫瘤信號通路的激活。L1CAM是粘附分子家族成員，其能夠通過影響腫瘤細胞的轉錄調(diào)控，增加癌細胞基因的擴增，進而促進癌細胞的異常增殖［15,16］。

本次研究采用免疫組織化學方法檢測Ezrin、L1CAM在結腸癌組織及癌旁組織中的表達，結果發(fā)現(xiàn)在結腸癌組織中Ezrin、L1CAM的陽性表達率均高于癌旁正常結腸組織，與李艷等人的研究結果相一致［17］，提示Ezrin、L1CAM蛋白的高表達可能與結腸癌的發(fā)生發(fā)展有關，考慮如下［18-19］：（1）Ezrin蛋白的表達上調(diào)，能夠提高結腸腺體上皮細胞的變形能力，促進腺體細胞突破腸道上皮基底膜組織；（2）L1CAM蛋白的表達上調(diào)，能夠加劇腸道腺體上皮細胞核DNA的異常裂變能力，導致腺體上皮細胞周期G1/S比例的上升。劉艷等［20］研究者發(fā)現(xiàn)，在結腸癌患者病理組織中Ezrin蛋白的陽性表達率水平可以平均上升36%以上，在具有明顯的腫瘤惡病質或者遠處轉移的患者中，Ezrin蛋白的陽性表達率水平可進一步的上升。進一步分析Ezrin、L1CAM蛋白的表達與結腸癌患者臨床病理特征的關系中，發(fā)現(xiàn)在Dukes分期較晚、發(fā)生淋巴結轉移、發(fā)生漿膜浸潤的患者中，Ezrin蛋白的陽性表達率水平均上升，提示Ezrin蛋白的表達與結腸癌患者Dukes分期、淋巴結轉移、漿膜浸潤有關。Ezrin蛋白表達上調(diào)，可激活腫瘤細胞內(nèi)信號通路的傳導、加快腫瘤細胞侵襲轉移。在Dukes分期較晚、發(fā)生了淋巴結轉移的患者中，L1CAM的表達也上調(diào)，提示L1CAM的高表達與結腸癌患者的Dukes分期、淋巴結轉移有關，臨床檢測Ezrin、L1CAM的表達情況有助于評估結腸癌腫瘤生物學行為，為評估患者預后提供參考。但本次研究并未發(fā)現(xiàn)Ezrin、L1CAM的高表達與腫瘤細胞分化程度的關系，提示Ezrin和L1CAM的高表達可能不影響腫瘤細胞的分化成熟過程，但這有待今后大樣本量研究驗證。

綜上所述，Ezrin及L1CAM蛋白在結腸癌組織中表達均上調(diào)，且在不同病理特征的結直腸癌組織中表達水平不同，可能與結腸癌的發(fā)生發(fā)展有關。