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    江西省2005~2017年鯉春病毒血癥病毒感染流行病學(xué)研究

    2019-05-09 05:54:46田飛焱歐陽敏謝世紅徐節(jié)華劉文珍孟霞銀旭紅花麒
    水產(chǎn)學(xué)雜志 2019年2期
    關(guān)鍵詞:漁場錦鯉草魚

    田飛焱,歐陽敏,謝世紅,徐節(jié)華,劉文珍,孟霞,銀旭紅,花麒

    (江西省水產(chǎn)技術(shù)推廣站,江西 南昌 330046)

    鯉春病毒血癥病毒(Spring Viremia of Carp Virus,SVCV)可引起鯉科魚類大規(guī)模暴發(fā)鯉春病毒血癥(Spring Viremia ofCarp,SVC),該病是一種急性、高致病性的傳染性疾病,曾在歐洲很多國家發(fā)生,給當?shù)仵庰B(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失[1,2]。2003年以來我國不斷檢測到SVCV,在個別地區(qū)暴發(fā)SVC疫情,表明SVC在我國逐步蔓延[3,4]。SVC發(fā)生和傳播對我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè),特別是鯉科魚類的養(yǎng)殖構(gòu)成潛在威脅,因此深入研究其病原的自然感染率、地區(qū)分布、遺傳變異等流行病學(xué)特征,對疾病的監(jiān)測、防控及診斷試劑和疫苗的研發(fā)都具有重要意義。

    本研究于2005—2017年間,應(yīng)用細胞分離法和反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,PCR)方法監(jiān)測了江西省一些重要漁場養(yǎng)殖鯉科魚類SVCV,比較了不同地區(qū)SVCV分離株的分子特征,旨在摸清本省SVCV流行情況,提高疫病風(fēng)險預(yù)警防控能力,保障江西省養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展。

    1 材料與方法

    1.1 樣品來源

    2005—2017 年春秋季,根據(jù)SC/T 7103-2008[5]的采樣要求,組織縣級水生動物防疫站在全省范圍內(nèi)的漁場采集鯉科魚類活體樣品,采樣水溫范圍11~20℃,每個漁場每年只采集一份樣品,每份樣品采集數(shù)≥150尾(假定某一魚類養(yǎng)殖群體≥100 000尾,2%感染率),依照GB/T15805.5-2008檢測方法[6]進行檢測。

    1.2 病原監(jiān)測

    按照GB/T 15805.5-2008規(guī)范,將樣品組織懸液接種到鯉上皮瘤細胞(EPC)中培養(yǎng),觀察細胞是否出現(xiàn)細胞病變效應(yīng)(cytopathic effect,CPE);用套式RT-PCR方法擴增SVCV的糖蛋白(G)基因片段,依照標準綜合判定是否存在SVCV感染。引物序列為:SVCV-R2:5’-AGATGGTATGGACCCCAA TACATHACNCAY-3’;SVCV-R4:5’-CTGGGGTTT CCNCCTCAAAGYTGY-3’;SVCV-F1:5’-TCTTGGA GCCAA ATAGCTCARRTC-3’。其中F1和R2用于擴增714bp片段,而F1和R4則從中再擴增606bp的片段。

    1.3 序列分析

    陽性樣品的PCR產(chǎn)物經(jīng)基因測序后用DNAS-tar對測序結(jié)果進行核苷酸序列同源性分析,從GenBank中選取與陽性序列相似的參考毒株,用MEGA7.0軟件采用鄰位相連法(Neighbor-joining)構(gòu)建進化樹。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 檢測結(jié)果

    2005—2017 年的春秋季在江西11個地市的69個縣(市、區(qū))隨機采集、檢測了576份樣品(表1)。其中錦鯉樣品64份,鯉樣品113份,鯽Carassius auratus樣品177份,草魚Ctenopharynogodon idellus樣品202份,草金魚Carassius auratus樣品2份,鰱Hypophthal michthys molitrix樣品13份,鳙Aristichthysnobilis樣品3份,鳊Parabramis pekinensis樣品1份,刺鲃Spinibarbus caldwelli樣品1份。共監(jiān)測到SVCV陽性樣品23份(表2),總的陽性檢出率為3.99%,其中2009以前的5年僅2007年有2份陽性樣品檢出,2010年起陽性樣品檢出增多,其中2012—2016年連續(xù)5年均有陽性檢出。

    表1 2005~2017年江西省漁場SVCV監(jiān)測情況Tab.1 SVCV surveillance in Jiangxi Province,China,from 2005 to 2017

    2.2 流行特征

    2.2.1 種類分布

    本研究采樣的(品)種類覆蓋度較高,包含鯉科的錦鯉、鯉、草魚、鯽、草金魚、鰱、鳙、鳊和刺鲃,其中從錦鯉、鯉、草魚、鯽中檢出陽性樣品數(shù)分別是4、2、3和14個,占各(品)種類樣品數(shù)的6.25%、1.77%、1.48%和 7.91%,草金魚、鰱、鳙、鳊、刺鲃樣品中未檢出陽性樣品。鯽的陽性檢出率最高,其次是錦鯉,鯉和草魚陽性檢出率相對較低。統(tǒng)計分析與χ2檢驗表明,鯽的SVCV的攜帶率與鯉(P<0.05)、草魚(P<0.01)具有統(tǒng)計學(xué)意義,與錦鯉的SVCV的攜帶率差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

    2.2.2 季節(jié)分布

    2005—2017 年在江西省春季采集樣品312份,水溫范圍11~20℃,檢出陽性15份,陽性檢出率4.81%;秋季采集樣品264份,水溫范圍11~20℃,檢出陽性8份,陽性檢出率3.03%。春、秋季的SVCV的陽性檢出率差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),即春秋季節(jié)SVCV的陽性檢出率無顯著差異(表2)。

    表2 江西省漁場2005—2017年SVCV陽性樣品信息Tab.2 Information regarding SVCV isolates in Jiangxi Province,China,from 2005 to 2017

    2.2.3 遺傳進化分析

    根據(jù)SVCV G基因序列的遺傳進化,SVCV分離株可分為4個基因亞型:Ⅰa、Ⅰb、Ⅰc和Ⅰd[7,8]。用MEGA7.0將獲得的部分江西分離株的G基因部分序列和SVCV各基因型序列構(gòu)建的遺傳進化樹表明,江西分離株與中國株772、461、A1、BJ0505-02、SVCV-265;亞洲株 D148、英國株 H264、G108;美國株 North Carolina Isolate of2002、500549、316715;加拿大株HHOcarp06等在同一分支上,親緣關(guān)系較近,聚為一類,同屬于Ⅰa基因亞型;與其他基因型分離株在不同的分支上,親緣關(guān)系較遠(圖1)。江西分離株的同源性分析顯示:獲得的江西分離株同源性非常高,達到95.5%,部分江西分離株之間同源性達到了100%,SVCV江西分離株間的親緣關(guān)系較近,本地區(qū)存在SVCV的近距離傳播

    圖1 江西省SVCV分離株與其他地區(qū)的SVCV分離株部分G基因序列的遺傳進化樹Fig.1 Phylogenetic trees based on partial glycoprotein gene sequences of SVCV isolates from Jiangxi Province and other SVCV species in Genbank

    2.2.4 區(qū)域分布

    本研究采樣區(qū)域較廣,覆蓋了全省11個地市的69個縣(市、區(qū))。2009年以前江西省僅在南昌縣發(fā)現(xiàn)SVCV,2010年起發(fā)現(xiàn)SVCV分布范圍逐步擴大,截止目前江西省僅新余市、撫州市未發(fā)現(xiàn)SVCV分布,其余9個地市均發(fā)現(xiàn)SVCV,陽性漁場主要集中在贛中的南昌縣、新建縣、上高縣;贛西的安??h、吉安縣、上栗縣;贛東的廣豐區(qū)、貴溪市;贛北的彭澤縣、廬山市;贛南的信豐縣、石城縣。江西省SVCV陽性樣本分布區(qū)域較為分散,陽性漁場在地理上呈零星分布,分布范圍較廣。

    3 討論

    鯉春病毒血癥(Spring Viremia of Carp,SVC)是鯉科魚類的一種急性出血性并高度傳染的流行病,通常在春季水溫10~20℃時流行,引發(fā)幼魚和成魚大量死亡。100多年來SVC在歐洲各國(包括俄羅斯)流行,給歐洲的鯉養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失[2,9,10]。本研究2005—2017年持續(xù)進行SVCV感染流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn):在錦鯉、鯉、草魚、鯽中均檢出SVCV,鯉科魚類帶毒較為廣泛,陽性檢出率從高至低依次為:鯽7.91%、錦鯉 6.25%、鯉1.77%、草魚1.48%,其中鯽和錦鯉的陽性檢出率相對較高。Eveline等[11]用浸泡和注射方式將SVCV美國株(AY527273/North Carolina Isolate of 2002)感染錦鯉、黃鱸Diploprion bifasciatum、大馬哈魚Oncorhynchus keta等6種不同科的魚類,結(jié)果表明SVCV對錦鯉高度易感染。統(tǒng)計分析與χ2檢驗表明:江西省采集的樣品中鯽的SVCV的攜帶率與鯉(P<0.05)、草魚(P<0.01)具有統(tǒng)計學(xué)意義,與錦鯉的SVCV的攜帶率差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),即鯽的SVCV的攜帶率顯著高于鯉、草魚,與錦鯉相當。說明在本地區(qū)除錦鯉外,鯽也是一種SVCV高度易感種,發(fā)生該疫病的風(fēng)險也較高。在江西省春、秋兩季均能檢測到陽性樣品,春、秋季節(jié)與陽性檢出率間無相關(guān)性,11~20℃的水溫范圍內(nèi)有陽性樣品檢出。

    系統(tǒng)進化樹顯示,江西分離株與中國株(SVCV-265、772、461、G067、A1、BJ0505-2)、亞洲株(D148)、英國株(H264,G108)、美國株(North Carolina Isolate of 2002、316715、500549)、 加 拿 大 株(HHOcarp06)等在同一分支上,親緣關(guān)系較近,聚為一類,屬于Ⅰa基因亞型,這與Zhang等[12]構(gòu)建的進化樹中亞洲分離株主要屬于Ⅰa基因亞型的結(jié)論一致。聚為一類可認為來源相近,表明江西分離株與已發(fā)表的中國分離株、美國株來源相近。2005—2017年江西省所有檢測出SVCV的陽性漁場經(jīng)流行病學(xué)現(xiàn)場調(diào)查均未發(fā)生SVC。Xiao等[13]將SVCV中國株(SVCV-265)人工感染錦鯉,試驗亦未觀察到錦鯉有明顯的臨床癥狀和死亡現(xiàn)象,但同屬于Ⅰa基因亞型的美國株(North Carolina Isolate of2002)曾導(dǎo)致2002年美國的北卡羅來鈉州暴發(fā)SVC[14,15],表明不同區(qū)域的環(huán)境因素影響Ⅰa型SVCV的致病性。因此,Ⅰa型SVCV感染鯉科魚類并引起發(fā)病的因素還有待進一步的研究,Ⅰa型SVCV陽性的鯉科魚類養(yǎng)殖場依然存在發(fā)生SVC的風(fēng)險。

    2009年以前江西省僅在南昌縣發(fā)現(xiàn)SVCV,2010年起陸續(xù)在全省其他漁區(qū)發(fā)現(xiàn),SVCV存在省內(nèi)近距離傳播,分布點近些年也有所擴散,表明感染區(qū)域范圍有逐漸擴大的趨勢。SVCV主要是水平傳播(帶毒魚、被污染的水、網(wǎng)具等)[16]。江西省主要有贛江、撫河、信江、饒河、修河等五大水系,水流均最終匯入鄱陽湖及周邊湖泊。本研究主要監(jiān)測江西省內(nèi)漁場的養(yǎng)殖鯉科魚類情況,尚未監(jiān)測野生魚類。從江西水系分布來看,全省主要水系通過鄱陽湖密切相連,一旦SVCV傳染到河流內(nèi)的野生魚類,通過帶毒魚和病毒污染的水體傳播,可能會加劇該病疫情在江西更大范圍傳播的風(fēng)險。因此,為了降低SVC病原的傳播和擴散風(fēng)險,需要擴大疫情監(jiān)測范圍(包括野生魚類),加強生物安保意識的宣傳,提高漁民在養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中對染疫對象的生物無害化處理意識,筑牢生物安全屏障。

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