慢性乙型肝炎患者病毒相關(guān)指標(biāo)與肝脂肪變性的相關(guān)性研究

牛蕊

我國(guó)乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染患者約9 300萬，其中慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者約2 000萬例[1]。近些年來，隨著生活水平和飲食結(jié)構(gòu)的變化，非酒精性脂肪性肝病的發(fā)病率逐漸增加，約12%～24%[2]。既往研究已證實(shí)，慢性丙型肝炎病毒與肝脂肪變性密切相關(guān)，并且脂肪變性的嚴(yán)重程度與肝臟纖維化有關(guān)，但是國(guó)內(nèi)關(guān)于HBV與肝脂肪變性的報(bào)道較少[3]。近期研究發(fā)現(xiàn)HBV合并肝脂肪變性的發(fā)病率有所增加，因此CHB合并肝脂肪變性的現(xiàn)象越來越受到重視[4]。

Shi等[5]發(fā)現(xiàn)，CHB患者肝脂肪變性與性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)和血脂水平有關(guān)，但是與HBV DNA和HBeAg含量無關(guān)。值得注意的是，既往關(guān)于HBV與肝脂肪變性的研究多僅針對(duì)血清病毒相關(guān)指標(biāo)，缺少組織病毒相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。本研究通過對(duì)CHB患者血清和肝組織病毒相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，旨在進(jìn)一步探討CHB與肝脂肪變性的相關(guān)性。

資料與方法

一、一般資料

2013年1月至2018年1月在我院治療的CHB患者600例作為研究對(duì)象。CHB的診斷參考《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：①甲、丙、丁和戊型肝炎等；②酒精性肝??；③自身免疫性疾病。600例患者中男性384例，女性216例；年齡21～72歲，平均(39.8±6.7)歲；體質(zhì)指數(shù)(23.4±4.1)kg/m2；總膽固醇(4.6±2.5) mmol/L；三酰甘油(1.4±0.4) mmol/L。

根據(jù)CHB患者是否合并肝脂肪變性，分為變性組和非變性組。本研究已經(jīng)過我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均知情同意。

二、研究方法

(一)血清學(xué)檢查 患者入院當(dāng)天采集肘正中靜脈血15 mL，靜置1 h，2 500 轉(zhuǎn)/min離心15 min，收集血清置于-70℃下待測(cè)。采用全自動(dòng)免疫分析儀(DxI 800，美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特)檢測(cè)HBsAg、HBeAg含量；采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)HBV DNA含量，檢測(cè)儀器為美國(guó)ABI ProFlexTMPCR儀，HBV DNA檢測(cè)試劑盒購(gòu)于安徽達(dá)健醫(yī)學(xué)科技有限公司(貨號(hào)TGFQ01-002)；血清膽固醇、三酰甘油和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)采用全自動(dòng)生化檢測(cè)儀(AU680，美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特)。

(二)肝組織病理學(xué)檢查 患者入院當(dāng)天，超聲引導(dǎo)下用16G精細(xì)活檢針(深圳市永鑫凱金屬材料有限公司)進(jìn)行穿刺。獲取肝組織長(zhǎng)度為2.0 cm，甲醛固定→脫水→石蠟包埋，HE染色、MASSON和網(wǎng)織纖維染色后在光鏡下進(jìn)行觀察。根據(jù)結(jié)果進(jìn)行炎癥活動(dòng)度分級(jí)(G)和纖維化分期(S)；分級(jí)為G0～G4，分期為SO～S4[7]。根據(jù)肝細(xì)胞脂肪變性所占程度，將脂肪肝分為F0(<5%)、F1(5%～30%)、F2(31%～50%)、F3(51%～75%)、F4(>75%)。采用兩步法進(jìn)行HBsAg和HBcAg免疫組化染色，檢測(cè)試劑盒購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司，根據(jù)染色陽(yáng)性細(xì)胞比值進(jìn)行標(biāo)記：<5%為(-)，5%～30%為(+)，31%～50%為(++)，51%～75%為(+++)，>75%為(++++)[8]。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、一般資料

600例CHB患者中，合并肝脂肪變性者178例，占29.7%。1∶1傾向值匹配前，兩組一般資料比較均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。傾向值匹配后，變性組和非變性組各178例，兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，如表1。

二、血清病毒相關(guān)指標(biāo)的比較

如表2所示，兩組血清HBeAg(+)、HBV DNA、HBsAg和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

三、肝組織病毒相關(guān)指標(biāo)的比較

如表3所示，兩組肝組織HBsAg染色陽(yáng)性率和HBcAg染色陽(yáng)性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

四、肝脂肪變性程度與血清、肝組織病毒相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系

如表4所示，肝脂肪變性F1級(jí)組與F2～F4級(jí)組患者血清和肝組織病毒相關(guān)指標(biāo)的比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

五、肝脂肪變性程度與肝組織病理結(jié)果的關(guān)系

如表5所示，脂肪變性F1級(jí)組炎癥分級(jí)和纖維化分期的平均秩分別為127.6和125.3，而F2～F4級(jí)組分別為102.3和103.0，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 傾向值匹配后兩組一般資料的比較(±s)

表2 血清病毒相關(guān)指標(biāo)的比較(±s)

表3 肝組織病毒相關(guān)指標(biāo)的比較[例(%)]

表4 肝脂肪變性程度與血清、肝組織病毒相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系(±s)

表5 肝脂肪變性程度與肝組織病理結(jié)果的關(guān)系[例(%)]

六、肝脂肪變性程度與肝組織病理結(jié)果的相關(guān)性

Pearson分析發(fā)現(xiàn)，脂肪變性程度與炎癥活動(dòng)度和纖維化分期呈負(fù)相關(guān)(r=-0.124，P=0.014；r=-0.117，P=0.036)。

討 論

HBV感染呈現(xiàn)世界流行性，世界衛(wèi)生組織報(bào)道，全球約有2.4億慢性HBV感染患者，每年死于HBV感染所致的肝硬化、肝癌和肝衰竭的患者約65萬[9]。非酒精性脂肪性肝病是指除酒精之外的以彌散性肝細(xì)胞大泡性脂肪變性為特征的肝病。肝脂肪變性與飲酒、血糖、血脂、肥胖和高血壓等有關(guān)。既往一項(xiàng)meta分析顯示，CHB合并肝脂肪變性的發(fā)病率約為29.6%。本研究600例CHB患者中，發(fā)生肝脂肪變性178例，發(fā)病率為29.7%。

病毒因素在CHB合并肝脂肪變性的發(fā)病中究竟起多大作用？目前尚無定論。有研究發(fā)現(xiàn)，HBV X蛋白可以通過激活固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARs-γ)，誘導(dǎo)肝臟脂肪沉積，結(jié)果提示HBV可以導(dǎo)致肝脂肪變性[10]。但是也有相反的觀點(diǎn)認(rèn)為，肝脂肪變性時(shí)有大量HBsAg清除，說明脂肪肝可能對(duì)CHB有保護(hù)作用[1]。研究結(jié)果的不一致性可能與樣本量、年齡和病程等有關(guān)。為了保證組間匹配，本研究采用鄰近匹配法和卡鉗法對(duì)患者的性別、年齡等資料進(jìn)行校正，兩組1∶1進(jìn)行匹配。結(jié)果表明，血清HBV DNA、HBeAg、HBsAg和肝組織HBsAg染色、HBcAg染色均與肝脂肪變性無關(guān)。進(jìn)一步，本研究還發(fā)現(xiàn)肝脂肪變性程度與血清、肝組織病毒相關(guān)指標(biāo)無關(guān)，說明肝脂肪變性可能與病毒狀態(tài)無關(guān)。

臨床上，慢性HBV感染可以進(jìn)展為肝硬化甚至肝癌。既往研究發(fā)現(xiàn)，肝脂肪變性可以促進(jìn)慢性丙型肝炎患者肝臟纖維化。而目前關(guān)于肝脂肪變性對(duì)CHB影響的報(bào)道較少，且結(jié)論不一。有研究發(fā)現(xiàn)，CHB患者肝脂肪變性與肝臟炎癥分級(jí)和纖維化分期無關(guān)[12]。還有研究發(fā)現(xiàn)，肝脂肪變性是肝纖維化的高危因素[13]，但是該研究中脂肪變性組的年齡高于無脂肪變性組，這些因素可以影響到肝纖維化。本研究校正了年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)等因素后發(fā)現(xiàn)，中重度肝脂肪變性患者肝臟炎癥和纖維化分期均低于輕度脂肪變。Pearson分析發(fā)現(xiàn)，脂肪變性程度與炎癥活動(dòng)度和纖維化分期呈負(fù)相關(guān)，與Shi等[5]研究結(jié)果一致。王明芳等[14]回顧性分析了874例CHB患者，發(fā)現(xiàn)肝脂肪變性率為30.9%(270/874)，CHB患者血清和肝組織病毒學(xué)因素均與肝脂肪變性及其嚴(yán)重程度無關(guān)，肝脂肪變性并不會(huì)影響組織中HBsAg和HBcAg的表達(dá)，隨著肝脂肪變性程度加重，肝臟炎癥活動(dòng)度分級(jí)和纖維化分期反而改善。以上結(jié)果提示，隨著脂肪變性病情加重，肝臟炎癥和纖維化反而減輕。其可能機(jī)制是肝脂肪變性的病情嚴(yán)重程度與脂聯(lián)素水平負(fù)相關(guān)，而脂聯(lián)素是肝纖維化的高危因素[15]。

本研究的局限性：①為單中心回顧性研究；②未對(duì)年齡進(jìn)行分層分析；③未考慮CHB病程的因素。