血漿miRNA-126表達與妊娠期高血壓疾病的相關性分析

何曉焱 彭詩寒 趙磊 羅玉萍 劉霞

[摘要] 目的 研究血漿miRNA-126表達與妊娠期高血壓疾病的相關性。 方法 選取2015年2月～2018年2月四川省瀘州市人民醫(yī)院診治的妊娠高血壓疾病患者93例作為研究對象，并將其按照疾病進行分組。其中妊娠期高血壓組30例，輕度子癇前期組29例，重度子癇前期組34例。另取同期體檢的健康妊娠婦女20名作為對照組。分別采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）技術檢測各組研究對象的血漿miRNA-126表達情況;同時比較各組收縮壓、舒張壓、24 h蛋白尿水平，并將其與miRNA-126表達進行相關性分析。 結果 與對照組比較，妊娠期高血壓組血漿miRNA-126表達下調(diào)，而輕度子癇前期組血漿miRNA-126表達低于妊娠期高血壓組，重度子癇前期組血漿miRNA-126表達低于輕度子癇前期組，差異均有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。妊娠期高血壓組收縮壓、24 h蛋白尿水平均明顯高于對照組;輕度子癇前期組收縮壓、24 h蛋白尿水平高于妊娠期高血壓組;重度子癇前期組收縮壓、24 h蛋白尿水平高于輕度子癇前期組;對照組舒張壓水平低于妊娠期高血壓組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組，差異均有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。經(jīng)Spearman相關性分析，妊娠期高血壓疾病患者miRNA-126基因表達與其收縮壓、舒張壓、24 h蛋白尿水平均呈負相關（r = -0.583、-0.626、-0.611、均P < 0.05）。 結論 妊娠期高血壓疾病患者血漿miRNA-126表達明顯下調(diào)，且隨著病情的逐漸加重，血漿miRNA-126表達下調(diào)越明顯。血漿miRNA-126表達下調(diào)可能在妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著至關重要的作用。

[關鍵詞] 妊娠期高血壓疾病;miRNA-126;血漿;輕度子癇前期;重度子癇前期

[中圖分類號] R714.246? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）03（b）-0076-04

妊娠期高血壓疾病主要是指特發(fā)于女性妊娠期的一種疾病，其具體病因尚未完全明確，發(fā)病率在所有妊娠婦女中為7%～15%[1]。有研究報道[2]顯示，妊娠期高血壓疾病是導致妊娠婦女死亡的第二大原因，其導致的妊娠婦女死亡比例占所有妊娠相關死亡人數(shù)的10%～16%，對妊娠婦女以及新生兒的生命健康安全造成了嚴重影響。該病主要是發(fā)生在妊娠20周后，臨床主要表現(xiàn)為血壓升高，可伴有蛋白尿以及多臟器損傷。如不給予及時有效的治療，隨著病情日益加重，患者會出現(xiàn)抽搐、昏迷、心力衰竭、腦出血以及死亡等[3]。內(nèi)皮祖細胞功能紊亂是導致子癇前期內(nèi)皮細胞損失的基礎，其中miRNA-126在內(nèi)皮細胞中存在明顯高表達，在血管的新生及維持血管完整性中發(fā)揮著至關重要的作用。另有研究[4]表明，miRNA-126可通過增強血管的內(nèi)皮生長因子及成纖維細胞生長因子的血管新生作用，同時可通過調(diào)節(jié)控制多種基因的表達介導血管發(fā)育、血管新生以及血管炎性反應等生理、病理過程。鑒于此，本研究探討了血漿miRNA-126表達與妊娠期高血壓疾病的相關性，以期為臨床診治提供數(shù)據(jù)指導，現(xiàn)作以下報道：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年2月～2018年2月四川省瀘州市人民醫(yī)院（以下簡稱“我院”）診治的妊娠期高血壓疾病患者93例作為研究對象。納入標準：①所有患者均為首次妊娠;②均符合第7版《婦產(chǎn)科與內(nèi)科學》教材所制訂的相關診斷標準[5];③年齡>18歲;④入院前未接受任何相關治療。排除標準：①伴有其他產(chǎn)科并發(fā)癥或合并癥者;②合并高血壓病3級或繼發(fā)性高血壓者;③存在心、肝、腎等臟器功能嚴重障礙者。參照診斷標準[5]將所有妊娠期高血壓疾病患者進行分組，妊娠期高血壓組：妊娠20周后血壓高于140/90 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），且血壓在產(chǎn)后12周內(nèi)恢復正常;輕度子癇前期組：妊娠20周后血壓高于140/90 mmHg，且伴有蛋白尿≥0.3 g/2 h或隨機蛋白尿弱陽性，且血壓在產(chǎn)后12周內(nèi)恢復正常;重度子癇前期組：妊娠20周后血壓高于160/110 mmHg，蛋白尿≥2.0 g/2 h或隨機蛋白尿陽性，且血壓在產(chǎn)后12周內(nèi)水平恢復正常。其中妊娠期高血壓組30例，年齡24～37歲，平均（30.41±5.88）歲;孕齡37～41周，平均（38.76±1.20）周。輕度子癇前期組29例，年齡25～38歲;平均（29.04±6.23）歲;孕齡37～41周，平均（37.59±1.83）周。重度子癇前期組34例，年齡22～38歲，平均（29.11±6.28）歲;孕齡36～41周，平均（37.44±1.80）周。另取同期于我院進行體檢的健康妊娠婦女20名作為為對照組，年齡22～38歲，平均（28.48±6.33）歲;孕齡37～42周，平均（38.01±1.75）周。各組年齡、孕齡等情況比較，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 方法

分別采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）技術檢測各組研究對象血漿miRNA-126表達情況，具體方式如下：分別采集各組研究對象清晨空腹靜脈血10 mL，將其注入乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管，并于1 h內(nèi)以4℃、3000 r/min離心10 min，提取血漿轉(zhuǎn)移至新的EP管中。以16 000 g離心10 min，轉(zhuǎn)移至EP管中保存于-80℃冰箱中待檢。采用QIAGEN公司的miRNeasy Serum/Plasma Kit總RNA提取試劑盒提取血漿總RNA，采用Thermo生物分光光度計測定RNA樣品OD260/OD280的值，初步判斷RNA純度。參照GeneBank數(shù)據(jù)庫中的相關序列設計miRNA-126引物，以U6為參照基因。采用莖-環(huán)逆轉(zhuǎn)錄熒光技術進行定量PCR，內(nèi)參為小核RNA U6。其中miRNA-126引物序列如下：上游引物：5′-GTCCGCTCGTACCGTGAGTAATA-3′，下游引物：5′-GTGCGTGTCGTGGAGTC-3′。采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（購自美國TAKARA公司）進行逆轉(zhuǎn)錄反應，其中反應條件為37℃，30 min;75℃，5 min，獲取逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物后馬上根據(jù)RT-PCR試劑盒（購自美國TAKARA公司）進行檢測，具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行，每個逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物樣本檢測3次，循環(huán)閾值（Ct值）取平均值，配成20 μL的反應體系，其中PCR參數(shù)如下：95℃ 預變性15 min，94℃變性20 s，60℃退火34 s，72℃延伸60 s，40個循環(huán)。實驗重復3次。采用2-△△Ct法計算miRNA-126的相對表達量。

1.3 觀察指標

比較各組miRNA-126基因表達水平，同時比較各組收縮壓、舒張壓、24 h蛋白尿水平，并將其與miRNA-126基因表達水平進行相關性分析。收縮壓、舒張壓、24 h蛋白尿水平采用全自動生化分析儀進行檢測。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析;相關性采用Spearman相關性分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組miRNA-126基因表達、收縮壓、舒張壓、蛋白尿水平比較

與對照組比較，妊娠期高血壓組血漿miRNA-126表達明顯下調(diào)，而輕度子癇前期組血漿miRNA-126表達低于妊娠期高血壓組，重度子癇前期組血漿miRNA-126表達低于輕度子癇前期組，差異均有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）;妊娠期高血壓組收縮壓、24 h蛋白尿水平均明顯高于對照組，輕度子癇前期組收縮壓、24 h蛋白尿水平高于妊娠期高血壓組，重度子癇前期組收縮壓、24 h蛋白尿水平高于輕度子癇前期組;對照組舒張壓水平低于妊娠期高血壓組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組，差異均有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 相關性分析

經(jīng)Spearman相關性分析可知，妊娠期高血壓疾病患者miRNA-126基因表達與收縮壓、舒張壓、蛋白尿水平均呈負相關（r = -0.583、-0.626、-0.611，均P < 0.05）。

3 討論

妊娠期高血壓疾病可能是多種復雜因素共同作用導致的結果，其中主要因素包括免疫調(diào)節(jié)功能紊亂、遺傳因素、營養(yǎng)因素、母體內(nèi)病理改變以及胎盤結構與胎兒發(fā)育異常等[6-10]。隨著相關研究的逐漸深入，越來越多的學者認為妊娠期高血壓疾病屬于一種血管內(nèi)皮細胞疾病，且與血管的形成、血管完整性以及血管損傷存在密切相關[11-13]。另有研究[14-15]顯示，miRNA-126在內(nèi)皮細胞中呈現(xiàn)高表達，其可促進血管新生，同時對維持內(nèi)皮細胞穩(wěn)態(tài)與血管的完整性起著至關重要的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，妊娠期高血壓組血漿miRNA-126表達較低，而輕度子癇前期組血漿miRNA-126表達低于妊娠期高血壓組，重度子癇前期組血漿miRNA-126表達低于輕度子癇前期組，差異均有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），這與既往研究[16-17]相符，提示血漿miRNA-126可能在妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中起著至關重要的作用。分析原因，筆者認為血漿miRNA-126可能是通過以下途徑參與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展：①血漿miRNA-126可能參與子宮螺旋動脈重鑄異常，從而導致母胎界面血壓供應缺乏，促使胎盤有效灌注降低，造成胎盤局部組織缺血、缺氧，進一步促進了異常胎盤結構的形成，繼而導致血管炎癥反應與內(nèi)皮細胞功能障礙，并最終引發(fā)妊娠期高血壓疾病。②在miRNA-126表達下調(diào)時，其靶基因SPRED與PI3KR2均呈過表達狀態(tài)，從而會對絲裂原活化蛋白激酶與磷脂酰肌醇-3-激酶信號途徑產(chǎn)生較明顯的抑制作用，進一步影響血管新生因子信號的傳遞，兩者共同作用導致血管生成受阻、血液供應不足，導致處于氧化應激狀態(tài)下的母胎界面形成，并相互影響造成惡性循環(huán)，從而促使母體血液循環(huán)緩慢進入胎盤釋放部分細胞碎片，最終引起全身免疫反應，導致妊娠期高血壓疾病的發(fā)生。目前，臨床上已有不少研究報道[18-21]證實收縮壓、舒張壓、24 h蛋白尿水平是臨床上評價妊娠期高血壓疾病的金標準。經(jīng)Spearman相關性分析可知，妊娠期高血壓疾病患者miRNA-126基因表達與收縮壓、舒張壓、尿蛋白水平均呈負相關（r = -0.583、-0.626、-0.611，均P < 0.05）。這充分證明了上述結果，并提示miRNA-126可能在妊娠期高血壓的發(fā)生、發(fā)展過程中起著至關重要的作用。臨床上可通過聯(lián)合檢測血漿miRNA-126與收縮壓、舒張壓、24 h蛋白尿水平，從而對妊娠期高血壓患者病情進行準確評估[22-24]。

綜上所述，妊娠期高血壓疾病患者血漿miRNA-126表達存在明顯下調(diào)，且隨著病情的逐漸加重，血漿miRNA-126表達下調(diào)越明顯。血漿miRNA-126表達下調(diào)可能在妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著至關重要的作用。

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（收稿日期：2018-08-03? 本文編輯：王? ?蕾）