蝦青素、二十二碳六烯酸、磷脂酰絲氨酸相互配伍功效作用研究

曲 輝，李麗杰，劉 霞

(1.聊城大學(xué) 藥學(xué)院，山東 聊城 252000；2.青島海佑海洋生物工程有限公司，山東 青島 266100；3.榮成市人民醫(yī)院，山東 威海 264300)

我國保健食品行業(yè)發(fā)展迅速，新資源食品成為現(xiàn)代研究的熱點(diǎn)。有資料表明含有蝦青素、二十二碳六烯酸(DHA)、磷脂酰絲氨酸的保健食品具有增強(qiáng)免疫和輔助改善記憶力的功效[1-6]。本文根據(jù)中國科學(xué)院心理研究所編制《臨床記憶量表》[7]評價(jià)該保健食品對受試者的記憶力水平的影響，并參照《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》[8]進(jìn)行輔助改善記憶力的人體試食實(shí)驗(yàn)和增強(qiáng)免疫力的動物功能實(shí)驗(yàn)，判定蝦青素、DHA、磷脂酰絲氨酸相互配伍的功效作用。

1 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1.1 受試物

蝦青素、DHA、磷脂酰絲氨酸復(fù)合物軟膠囊由某公司提供，人體每日推薦量為2 g；分別含蝦青素(5%)10 mg/d、DHA(35%)210 mg/d、磷脂酰絲氨酸(50%)200 mg/d。將該受試物按成人5、10、30倍量設(shè)置低、中、高劑量組進(jìn)行設(shè)計(jì)動物實(shí)驗(yàn)，受試物以灌胃的方式進(jìn)行給予實(shí)驗(yàn)動物，并用大豆油補(bǔ)足，灌胃量為20 mL/kg。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

本實(shí)驗(yàn)參考《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》中輔助改善記憶力與增強(qiáng)免疫力功能的檢驗(yàn)方法，并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)研究的需要，設(shè)計(jì)改良實(shí)驗(yàn)方案，除試驗(yàn)分組及實(shí)驗(yàn)給藥劑量外，其余實(shí)驗(yàn)步驟、數(shù)據(jù)分析等均參照《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》，來探索蝦青素、DHA以及磷脂酰絲氨酸在輔助改善記憶力和增強(qiáng)免疫力方面的作用。

1.2.1 輔助改善記憶力實(shí)驗(yàn)

1.2.1.1 受試人群及材料

受試者為8～9歲成績不太理想，身體健康的小學(xué)三年級學(xué)生，男女各半。臨床記憶測試使用中國科學(xué)院心理研究所研制的甲、乙兩套測試材料及量表手冊。

1.2.1.2 實(shí)驗(yàn)分組及方法

在學(xué)生及監(jiān)護(hù)人自愿的情況下，通過填寫基本調(diào)查表和處理前記憶量表測試，剔除正在服用與本產(chǎn)品功能類似的學(xué)生和剔除高記憶商學(xué)生，保留受試者60名。受試者按照處理前記憶商各組進(jìn)行均衡，分為受試組和對照組。采用雙盲法，受試組服用復(fù)合物2 g/d，對照組服用安慰劑(服用除有效成分外，其劑型、口感、外觀和包裝與復(fù)合物完全相同)，連續(xù)服用30 d，采用臨床記憶量表測試指向記憶、聯(lián)想學(xué)習(xí)、圖象自由回憶、無意義圖形再認(rèn)和人像特點(diǎn)回憶。處理前后甲、乙兩套記憶量表交叉使用，每一受試者前、后兩次測試在同一地點(diǎn)由同一主試者作單個(gè)測試。

1.2.2 增強(qiáng)免疫力實(shí)驗(yàn)

1.2.2.1 主要儀器材料

RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液、小牛血清、2-巰基乙醇(2-ME)、青霉素、鏈霉素、刀豆蛋白A(ConA)、鹽酸、異丙醇、MTT、Hank's液、PBS緩沖液(pH值7.2～7.4)、紗布或200目篩網(wǎng)、24孔培養(yǎng)板、96孔培養(yǎng)板(平底)、手術(shù)器械、二氧化碳培養(yǎng)箱、酶標(biāo)儀、721分光光度計(jì)、超凈工作臺、高壓來滅菌器、無菌濾器；計(jì)時(shí)器、計(jì)時(shí)器、血色素吸管、印度墨汁、Na2CO3；恒溫水浴、離心機(jī)、玻片架、200目篩網(wǎng)、SRBC、補(bǔ)體(豚鼠血清)、SA緩沖液，瓊脂糖；YAC-1細(xì)胞、Hank's液(pH值7.2～7.4)、RPMI1640完全培養(yǎng)液、乳酸鋰或乳酸鈉、硝基氯化四氮唑(INT)、吩嗪二鉀酯硫酸鹽(PMS)、NAD、0.2 mol/L的Tris-HCl緩沖液(pH值8.2)、1%NP40或2.5%Trito等。

1.2.2.2 實(shí)驗(yàn)動物

SPF級雌性昆明種成年小鼠50只，體重18～22 g。由濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動物繁育有限公司提供；實(shí)驗(yàn)動物飼料由北京科奧協(xié)力飼料有限公司提供。

1.2.2.3 實(shí)驗(yàn)分組

將160只小鼠分為4個(gè)免疫大組，每個(gè)免疫大組再分別為空白組、低、中、高劑量組，分別進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)、小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)、抗體生成細(xì)胞測定實(shí)驗(yàn)以及NK細(xì)胞活性測定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

各實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用SPSS軟件對原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表1 實(shí)驗(yàn)前各組各分測驗(yàn)量表分和記憶商比較

由表1可知，參與實(shí)驗(yàn)的受試者均能完成整套實(shí)驗(yàn)。受試組與對照組均有50人，每組男生25人、女生25人；處理前受試組與對照組各測驗(yàn)量表分和記憶商比較，差異均無顯著差異性(P>0.05)，說明處理前受試組與對照組水平均衡。

表2 實(shí)驗(yàn)后各組各分測驗(yàn)量表分和記憶商比較

由表2可知，受試組服用蝦青素DHA磷脂酰絲氨酸軟膠囊30 d前后的各分測驗(yàn)量表分和記憶商差異均有高度顯著性，指向記憶、聯(lián)想學(xué)習(xí)、圖象自由回憶、無意義圖形再確認(rèn)、人像特點(diǎn)回憶、記憶商(顯示受試組的語文和非語文記憶能力以及整體記憶水平)均有顯著改善(P值均<0.01)；受試組與對照組的各分測驗(yàn)量表分和記憶商差異均有高度顯著性(P值均<0.01)。

表3 受試物對ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的影響-細(xì)胞免疫功能

注：*P<0.05，**P<0.01。

由表3可知，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的蝦青素DHA磷脂酰絲氨酸軟膠囊30 d，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,其淋巴細(xì)胞增殖能力在正常對照組與低劑量組之間比較無顯著性(P>0.05)，在正常對照組與中、高劑量組比較差異均有顯著性(P<0.05，P<0.01)，即蝦青素DHA磷脂酰絲氨酸軟膠囊可增強(qiáng)小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力。

表4 受試物對小鼠血清溶血素的影響-體液免疫功能

注：*P<0.05，**P<0.01。

由表4可知，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的蝦青素DHA磷脂酰絲氨酸軟膠囊30d，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，其抗體積數(shù)在正常對照組與低劑量組之間比較差異無顯著性(P>0.05)，在正常對照組與中、高劑量組間比較差異性(P<0.05，P<0.01)，即蝦青素DHA磷脂酰絲氨酸軟膠囊可提高小鼠血清溶血素水平。

由表5可知，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的蝦青素DHA磷脂酰絲氨酸軟膠囊30 d，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，其單核-巨噬細(xì)胞碳廓清能力在正常對照組與低、中劑量組比較，差異均無顯著性(P>0.05)；在正常對照組與高劑量組間比較差異性(P<0.05)，即蝦青素DHA磷脂酰絲氨酸軟膠囊可以提高小鼠的單核-巨噬細(xì)胞碳廓清能力。

表5 受試物對小鼠單核-巨噬細(xì)胞碳廓清能力的影響-單核-巨噬細(xì)胞功能

注：*P<0.05，**P<0.01。

表6 受試物對小鼠NK細(xì)胞活性影響

注：*P<0.05，**P<0.01

由表6可知，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的蝦青素DHA磷脂酰絲氨酸軟膠囊30 d，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，其NK細(xì)胞活性在正常對照組與低劑量組之間比較，差異無顯著性(P>0.05)，在正常對照組與中、高劑量組之間比較，差異均有顯著性P<0.05或P<0.01)，即蝦青素DHA磷脂酰絲氨酸軟膠囊可增強(qiáng)小鼠NK細(xì)胞活性。

3 分析與結(jié)論

人體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)富含豐富的不飽和脂肪酸和鐵，并且極易受氧化損傷，而蝦青素超強(qiáng)的氧化性能夠透過血-腦脊液屏障，淬滅損傷性的活性氧，起到輔助改善記憶力的作用，同時(shí)蝦青素還能誘導(dǎo)細(xì)胞分裂的活性，起到免疫增強(qiáng)劑作用，具有提高免疫力的功效[9]；DHA來源為前體脂肪酸α-亞麻酸，DHA作為長鏈不飽和脂肪酸，在生物膜中含量的增加對膜的流動性、物質(zhì)的通過性、受體活性均會產(chǎn)生一定的影響，可提高膜的生理機(jī)能，有利于增強(qiáng)神經(jīng)信息的傳遞，增強(qiáng)腦和神經(jīng)系統(tǒng)的活性，對維持大腦發(fā)育、功能有著舉足輕重的作用。DHA還可以抑制癌癥的發(fā)生、生長和轉(zhuǎn)移，并通過抑制促炎癥因子產(chǎn)生，調(diào)節(jié)粘附分子表達(dá)來調(diào)節(jié)免疫功能[10]；磷脂酰絲氨酸是某種神經(jīng)的主要成分，能營養(yǎng)和活化腦中各種酶的活性、減緩神經(jīng)遞質(zhì)的減少，并對大腦具有修復(fù)作用，對維持大腦的功能平衡，以及消除神經(jīng)疲勞，活化腦細(xì)胞，提高活性酶的活性，保持機(jī)體各項(xiàng)生理功能穩(wěn)步運(yùn)行，以起到增強(qiáng)改善與記憶增強(qiáng)免疫的作用。

綜上所述，本品受試物軟膠囊中的有效成分蝦青素、DHA、磷脂酰絲氨酸均有確切的功能作用。

輔助改善記憶作用的人體試食實(shí)驗(yàn)，是參照《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》方法進(jìn)行，并在受試者和監(jiān)護(hù)人自愿的前提下開展。為了消除心理暗示，試驗(yàn)中使用安慰劑；為減少系統(tǒng)誤差，受試者前后兩次由同一主試者施測；為避免外界干擾與生物節(jié)律的影響，進(jìn)行單個(gè)測試并在同一地點(diǎn)進(jìn)行。臨床記憶量表的五項(xiàng)測試實(shí)驗(yàn)，均能很好的反映記憶的整體水平。對蝦青素DHA磷脂酰絲氨酸軟膠囊改善記憶力人體試食實(shí)驗(yàn)證明，該產(chǎn)品具有改善記憶水平的作用。

根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》增強(qiáng)免疫力功能實(shí)驗(yàn)中的判定結(jié)果，經(jīng)口給予蝦青素DHA磷脂酰絲氨酸軟膠囊30d，對小鼠的細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、小鼠單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能和NK細(xì)胞活性測定結(jié)果均呈陽性，結(jié)果表明蝦青素DHA磷脂酰絲氨酸軟膠囊具有增強(qiáng)免疫能力功能的作用。

因此，蝦青素DHA磷脂酰絲氨酸軟膠囊具有增強(qiáng)免疫和輔助改善記憶力的功效作用。