耐甲氧西林金黃色葡萄球菌在ICU物體表面的生存性研究

萬玉英，吳紅麗，何耀琴，劉偉芬，陳文才，孫 遲，郝 亮

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院：1.感染管理科；2.骨科 330006)

自1961年被發(fā)現(xiàn)后[1]，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)感染正以驚人的速度在世界范圍內(nèi)蔓延，成為醫(yī)院感染重要的革蘭陽性細(xì)菌，多重耐藥現(xiàn)象日益嚴(yán)重。由于其傳播速度快，致病性強(qiáng)，易致社區(qū)及院內(nèi)感染暴發(fā)流行，病死率高，MRSA感染已成為醫(yī)院感染中的嚴(yán)重問題，與乙型肝炎、艾滋病并列為世界三大感染性疾病[2]，成為全球性公共衛(wèi)生問題之一。相關(guān)報(bào)道顯示MRSA污染環(huán)境后生存周期有數(shù)周[3]，MRSA主要通過醫(yī)護(hù)人員手、衣物、敷料、診療器械物表等傳播，手接觸的物品表面是高度危險(xiǎn)的，最易被污染的物品表面有：工作服、呼吸機(jī)面板、輸液泵、吸引連接管、負(fù)壓調(diào)節(jié)開關(guān)、監(jiān)護(hù)儀操作面板、呼叫按鈕、血壓計(jì)袖帶、聽診器、體溫計(jì)、電話、治療盤、氣囊、床欄、床隔簾、掌上電腦、桌面、床單被套等。以上物品可歸類為7種不同材質(zhì)：棉布、聚氯乙烯樹脂塑料(poly vinyl chloride,PVC)、橡膠、銅、不銹鋼、鉻合金、銀。本課題模擬在ICU的室溫下(20 ℃、35 ℃)，將醫(yī)務(wù)人員頻繁接觸的物表分成此7種材質(zhì)，在滅菌后于其表面種植MRSA菌種，分別放入2種溫度(20 ℃、35 ℃)培養(yǎng)箱里分時間段觀察其付著MRSA的存活情況。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2015年1月至2017年1月本院綜合ICU、急診ICU、呼吸內(nèi)科監(jiān)護(hù)室、神經(jīng)內(nèi)科監(jiān)護(hù)及心胸外科監(jiān)護(hù)室共5個ICU中醫(yī)務(wù)人員頻繁接觸的物品分成7種材質(zhì)(由本院物資供應(yīng)科提供原材料)，模擬ICU的溫度為20 ℃及35 ℃，相對濕度40%～48%。7種材質(zhì)分別為：棉布(工作服、床單被套)、PVC(床、床欄)、橡膠(呼吸機(jī)面板、監(jiān)護(hù)儀操作面板、鍵盤鼠標(biāo)、電話、氣囊、掌上電腦)、銅(喉鏡)、不銹鋼(呼叫按鈕、治療盤)、鉻合金(輸液泵)、銀(體溫計(jì))。

1.2試驗(yàn)材料 試驗(yàn)用MRSA來自本院檢驗(yàn)科微生物室2014年1月至2016年1月從ICU住院患者標(biāo)本中分離的MRSA共37株，其中綜合ICU 18株，急診ICU 8株，呼吸內(nèi)科監(jiān)護(hù)室5株，神經(jīng)內(nèi)科監(jiān)護(hù)室4株，心胸外科監(jiān)護(hù)室2株。試驗(yàn)菌付著材料準(zhǔn)備：棉布取材于病房床單被套及醫(yī)務(wù)人員工作服(100%棉0.40 mm厚)，PVC取材于病床欄，鋸成1 cm厚度；橡膠取材于物資科廢棄的監(jiān)護(hù)儀操作面板；銅取材于喉鏡柄(純度99.9%，厚度0.15 mm)；不銹鋼取材于治療盤(純度99.0%，厚度0.56 mm)；鉻合金取材于輸液泵(厚度0.62 mm)；銀取材于溫度計(jì)(純度99.9%，厚度0.15 mm)；將以上材質(zhì)均分成同等大小16等分，4等分為1組。以上材質(zhì)均為滅菌物。

1.3菌懸液制備 將臨床分離的37株MRSA在血瓊脂平板上連續(xù)傳代2次，選取典型菌落接種培養(yǎng)，獲得純培養(yǎng)，用無菌生理鹽水洗下菌落。配制成含菌量為0.75×105cfu/mL的菌懸液備用。

1.4判別試驗(yàn)菌 臨床與實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)學(xué)會(CLSI)推薦用于金黃色葡萄球菌甲氧西林耐藥的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法[1]。采用Kirby-Bauer(K-B)紙片法判定MRSA：平皿中鋪MH瓊脂，厚度為4 mm，將配制成含菌量為1.5×108cfu/mL的菌懸液涂沫于水解酪蛋白瓊脂(MHA)平皿上，貼30 μg頭孢西丁紙片，35 ℃孵育24 h，測量抑菌環(huán)直徑，抑菌環(huán)小于或等于21 mm,判定為MRSA。

1.5種植 無菌滴管吸1.5×108cfu/mL菌懸液分別滴入6種不同材質(zhì)物品表面，并放入不同溫度(溫度20 ℃，濕度41.5%；溫度35 ℃，濕度48.0%)的培養(yǎng)箱里進(jìn)行MRSA菌培養(yǎng)。后用蘸有蒸餾水的濕棉簽在不同材質(zhì)物表上對MRSA菌采樣監(jiān)測。20 ℃培養(yǎng)箱為上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)的霉菌培養(yǎng)箱(MJ-160-Ⅲ);35 ℃培養(yǎng)箱為上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)的恒溫恒濕培養(yǎng)箱(LRHS-250-Ⅲ)。

1.6懸液定量殺菌試驗(yàn) 采用菌懸液10 μL(1.5×106cfu/mL)分別加入到2種不同濃度含氯消毒液，490 μL(陽性對照用生理鹽水)中混勻。分別作用不同時間，取混合樣液100 μL加入到900 μL生理鹽水中，進(jìn)行稀釋中合法去除殘余消毒液作用10 min后[4]，將樣液全部倒入無菌平皿中，混入融化的血瓊脂培養(yǎng)基，凝固后培養(yǎng)進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，計(jì)算平均殺滅率。

1.7實(shí)驗(yàn)菌的存活判定 每種材質(zhì)滴MRSA菌懸液0.5 μL于物品表面，在20 ℃、35 ℃培養(yǎng)箱環(huán)境下分別于付著后8 h，干燥后即刻，干燥后第1、2、3、7、15、30天后監(jiān)測MRSA存活情況。

2 結(jié) 果

2.120 ℃的環(huán)境生存狀況 在20 ℃培養(yǎng)箱里各材質(zhì)物品表面上MRSA生存情況見表1。PVC片、橡膠片、不銹鋼片上付著的MRSA在30 d后仍存活著；銅片上MRSA付著后8 h內(nèi)仍生存著，但干燥后即刻全死亡；棉布片于干燥后第15天后有25% MRSA生存，干燥后30 d后未見MRSA生長；銀片于干燥后第15天MRSA依然存活，干燥后30 d后未見MRSA生長。

2.235 ℃的環(huán)境生存狀況 在35 ℃環(huán)境各材質(zhì)物品表面上MRSA的生存狀況見表2。銅片上MRSA付著后8 h內(nèi)仍生存著，但干燥后后即刻全死亡，與20 ℃培養(yǎng)箱相同；橡膠片及鉻合金片上付著的MRSA在干燥后第7天仍有25% MRSA存活，而干燥后第15天全死亡；PVC片上付著MRSA在干燥后第15天后有25% MRSA存活，而干燥后第30天全死亡；不銹鋼片上付著MRSA在干燥后第15天有25% MRSA存活，而干燥后第30天全死亡。銀片上付著MRSA在干燥后第30天全死亡。棉布片上付著MRSA在35 ℃與20 ℃培養(yǎng)箱的結(jié)果相同。

表1 在20 ℃ 7種材質(zhì)物品表面上付著MRSA的生存狀況(生存標(biāo)本數(shù)∕試驗(yàn)標(biāo)本數(shù)，n)

表2 在35 ℃ 7種材質(zhì)物品物品表面上付著MRSA的生存狀況(生存標(biāo)本數(shù)∕試驗(yàn)標(biāo)本數(shù)，n)

3 討 論

MRSA主要通過接觸進(jìn)行播散，即易感人群從攜帶者或感染者處獲得MRSA。醫(yī)院感染MRSA多由醫(yī)護(hù)人員手?jǐn)y帶導(dǎo)致其在患者→醫(yī)護(hù)人員→患者之間傳播，引起暴發(fā)流行[2]，因此醫(yī)患之間的傳播必須從頻繁接觸的環(huán)境及物品表面上的材質(zhì)上進(jìn)行效果監(jiān)測，為臨床提供科學(xué)依據(jù)。

目前國內(nèi)外研究者報(bào)告細(xì)菌在金屬類與非金屬類材質(zhì)表面的生存性探討較少[3]，因此筆者針對2種溫度下7種不同材質(zhì)物品表面付著MRSA生存性進(jìn)行探討。據(jù)報(bào)道MRSA在非金屬類物品表面的生存周期是3～38周[4-5]。溫度為20～25 ℃時MRSA在棉布表面的生存期是3～11周[6-7]。本次研究發(fā)現(xiàn)：棉布上付著的MRSA在20 ℃培養(yǎng)箱與35 ℃培養(yǎng)箱均可生存近15 d；銅片上付著的MRSA無論在35 ℃培養(yǎng)箱還是20 ℃培養(yǎng)箱里，均在付著后8 h內(nèi)存活，但干燥后立即滅亡；PVC、橡膠上付著的MRSA在20 ℃培養(yǎng)箱里可生存30 d以上，而在35 ℃培養(yǎng)箱可生存近15 d；鉻合金上付著的MRSA在20 ℃培養(yǎng)箱里可生存近15 d，而在35 ℃培養(yǎng)箱里可生存近7 d；不銹鋼上付著的MRSA在20 ℃培養(yǎng)箱里可生存30 d以上，而在35 ℃培養(yǎng)箱里可生存15 d以上；銀上付著的MRSA無論在20 ℃還是35 ℃培養(yǎng)箱里，均生存15 d左右。

本研究結(jié)果表明，銅具有殺死MRSA作用，銅片上付著MRSA干燥后即刻在20 ℃與35 ℃培養(yǎng)箱里均死亡。但銀片上付著MRSA無論在20 ℃還是35 ℃培養(yǎng)箱里，均生存15 d左右，因此銀材質(zhì)物品上MRSA要30 d才殺死，這與以往部分文獻(xiàn)[8-9]研究結(jié)果存在出入。有研究指出，銀系抗菌材料在較低含量下也能殺死650多種包括至少12種多重耐藥菌在內(nèi)的人體致病微生物[10-11]，這可能與本研究觀察時間及菌種濃度有關(guān)。

研究表明，銅具有殺細(xì)菌作用[12]，銅在有水的條件下生成Cu2+，Cu2+為重金屬陽離子，通過細(xì)胞膜到達(dá)細(xì)胞內(nèi)部，能使某些酶變性，從而破壞它們的新陳代謝，殺死微生物[13-15]。在7種不同材質(zhì)物品表面上2種不同溫度檢測發(fā)現(xiàn)銅對MRSA的抑菌作用最強(qiáng)。本研究根據(jù)MRSA附著在不同材質(zhì)表面存活期不同，可以考慮醫(yī)務(wù)人員頻繁接觸的物品表面選擇具有抗菌效果的材質(zhì)，更有利于切斷傳播途徑，從而更有效控制醫(yī)院內(nèi)的傳播，保護(hù)易感人群。