宮頸癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞監(jiān)測(cè)與病理改善情況相關(guān)性分析

戴武松，楊 蓉，陳煥偉，王 博，呂學(xué)文

(1.廣東省農(nóng)墾中心醫(yī)院，廣東 湛江 524000；2.湛江中醫(yī)學(xué)校)

宮頸癌(cervical cancer)是婦科最常見的惡性腫瘤之一，約占女性生殖器官腫瘤的70 %，發(fā)病年齡大約為30～55歲，近年來發(fā)病率明顯增加且有年輕化的趨勢(shì)，導(dǎo)致女性患者生活質(zhì)量及生命健康受到嚴(yán)重威脅[1]。目前，B超、CT及常規(guī)MRI等影像學(xué)檢查可以有效地輔助宮頸癌的臨床分期，但是對(duì)宮頸癌的分級(jí)診斷仍存在一定的困難。隨著醫(yī)療發(fā)展，宮頸癌在診斷治療方面取得一定的進(jìn)展，但仍有部分患者在幾年內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，其主要原因可能與外周循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cell，CTC)有關(guān)。循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)通常是指進(jìn)入人體外周血的腫瘤細(xì)胞，檢測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞是通過檢測(cè)外周血中痕量存在的CTC[2]，研究其類型和數(shù)量變化的趨勢(shì)，有利于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)腫瘤的動(dòng)態(tài)、明確原發(fā)灶的相關(guān)特性以及評(píng)估治療效果等。本研究旨在分析宮頸癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)與病理分期之間的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1對(duì)象 收集從2015年2月18日至2018年12月20日在我院手術(shù)初治的60例宮頸癌患者，年齡33～76歲，平均年齡55.1歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者均經(jīng)術(shù)前宮頸活檢病理和術(shù)后病理確診；(2)可以收集到患者完整的檢查和病史資料；(3)研究符合倫理道德，患者均知情同意；排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)腦血管意外、先天性心臟病、免疫性疾病；(2)合并其他惡性腫瘤病史等；(3)病情及分化程度診斷不明確者；(4)患有精神及意識(shí)障礙性疾病，無法配合研究者；(5)不依從、不配合及拒絕參加研究者。根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(international federation of gynecology and obstetrics，F(xiàn)IGO)分期標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ期宮頸癌20例，Ⅱ期15例，Ⅲ期13例，Ⅳ期12例。同時(shí)選取健康體檢者50例為對(duì)照組，年齡30～76歲，平均年齡52.4歲，兩組年齡等基礎(chǔ)資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2方法 檢測(cè)外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞數(shù)目采用益善公司的CanpatrolTMCTC試驗(yàn)檢測(cè)平臺(tái)。使用真空采血管采集，取病人靜脈血，棄去最開始的1 mL，采血48 h之內(nèi)去除血漿，采用裂解液去除紅細(xì)胞，使用CanpatrolTMCTC試驗(yàn)檢測(cè)平臺(tái)篩除白細(xì)胞，最后使用分離液分離富集腫瘤細(xì)胞。使用8號(hào)探針進(jìn)行熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization, FISH)、CD45抗體進(jìn)行細(xì)胞熒光檢測(cè)。在熒光顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，DAPI 陽性、CD45 陰性為異常細(xì)胞，≥2個(gè)異常細(xì)胞為循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性。

2 結(jié)果

2.1循環(huán)腫瘤細(xì)胞在宮頸癌與正常人中的表達(dá)差異 宮頸癌患者中循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率為53.3 %(32/60)，對(duì)照組中正常人中循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率為0，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=33.89，P=0.000)。見表1。

表1 CTC在宮頸癌與正常人中的表達(dá)差異

2.2循環(huán)腫瘤細(xì)胞在不同病理分期宮頸癌中的表達(dá) 根據(jù)FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)，60例宮頸癌患者病理分期分別為Ⅰ期宮頸癌20例、Ⅱ期15例、Ⅲ期13例，Ⅳ期12例。通過檢測(cè)，各期宮頸癌患者中循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率分別為20.0 %(4/20)，33.3 %(5/15)，46.2 %(6/13)，66.7 %(8/12)，陽性率與病理分期呈正相關(guān)。對(duì)照組相比(rs=0.432)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 循環(huán)腫瘤細(xì)胞在不同病理分期宮頸癌中的表達(dá)

3 討論

惡性腫瘤發(fā)展過程中浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移常見，腫瘤細(xì)胞自原發(fā)腫瘤部位脫落后進(jìn)入外周血循環(huán)，侵入血管或淋巴管隨著外周循環(huán)到達(dá)遠(yuǎn)處器官，種植形成轉(zhuǎn)移灶并繼續(xù)發(fā)展，從原發(fā)灶脫落進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞即循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)[2]。循環(huán)腫瘤細(xì)胞惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中扮演了重要的角色，通過對(duì)原發(fā)腫瘤循環(huán)腫瘤細(xì)胞的研究可以進(jìn)一步明確原發(fā)病灶的相關(guān)特性。循環(huán)腫瘤細(xì)胞是指惡性腫瘤在發(fā)展過程中播散并存活于外周血中的腫瘤細(xì)胞，與腫瘤的轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)是指對(duì)腫瘤患者外周血中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行分析的方法，有助于腫瘤轉(zhuǎn)移患者的診斷、監(jiān)測(cè)術(shù)后患者腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移、評(píng)估抗腫瘤藥物的敏感性與患者預(yù)后以及選擇個(gè)體化治療的策略[3]。目前，對(duì)宮頸癌的診斷技術(shù)仍停留在傳統(tǒng)的病理組織水平，而外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的存在，作為無創(chuàng)性的指標(biāo)檢測(cè)，將為宮頸癌患者制定個(gè)體化輔助治療方案，提高腫瘤患者的生存率和生活質(zhì)量。研究顯示，監(jiān)測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞的數(shù)值越高，提示疾病更加的預(yù)后不良[4]。CTC可以更早地反映疾病狀態(tài)、判斷疾病預(yù)后，對(duì)于宮頸癌的早期診斷、病理分期、治療等有重要意義。因此，宮頸癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞腫瘤標(biāo)志物的確定非常重要。

本研究收集了我院手術(shù)治療的60例宮頸癌患者，所有患者均經(jīng)術(shù)前宮頸活檢病理和術(shù)后病理確診，其中Ⅰ期宮頸癌20例，Ⅱ期15例，Ⅲ期13例，Ⅳ期12例，并選取50例健康體檢者作為對(duì)照組，使用FISH技術(shù)檢測(cè)所有人外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率。結(jié)果顯示，宮頸癌患者和對(duì)照組正常人中循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率分別為53.3 %和0，說明循環(huán)腫瘤細(xì)胞的表達(dá)有助于宮頸癌的診斷，并且循環(huán)腫瘤細(xì)胞的陽性率與宮頸癌病理分期之間存在相關(guān)性，且病理分期越高，循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率越高，對(duì)于鑒別腫瘤病理分期的級(jí)別具有臨床參考價(jià)值。循環(huán)腫瘤細(xì)胞在腫瘤患者外周血中數(shù)量稀少，一般在106～107個(gè)白細(xì)胞中僅含有1個(gè)。循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)在乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌及前列腺癌等轉(zhuǎn)移性實(shí)體瘤的微轉(zhuǎn)移、監(jiān)測(cè)術(shù)后復(fù)發(fā)、療效評(píng)估與預(yù)后及個(gè)體化靶向治療等方面有重要作用，目前，對(duì)于循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)和分析比較困難[5]，研究主要集中在尋找循環(huán)腫瘤細(xì)胞的特異性標(biāo)志物并提高檢測(cè)手段的敏感性和特異性，本文研究結(jié)果顯示通過循環(huán)細(xì)胞檢測(cè)可以有效的預(yù)測(cè)宮頸癌的病情以及提早診斷，對(duì)于早期治療具有重要意義，但是對(duì)于其在宮頸癌診斷中特異性或靈敏度還不是很清楚，需要更加長(zhǎng)時(shí)間前瞻、多中心、多疾病類型對(duì)照研究證實(shí)。

綜上所述，循環(huán)腫瘤細(xì)胞與宮頸癌病理分期具有相關(guān)性，檢測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞的表達(dá)水平，有助于宮頸癌的早期診斷，對(duì)于評(píng)估病情、指導(dǎo)臨床治療提供依據(jù)。