老年高血壓病人外周血TLR4表達(dá)與血壓晝夜節(jié)律的關(guān)系探討

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高血壓作為全球常見的慢性病一直被認(rèn)為是導(dǎo)致心腦血管事件甚至死亡的最主要危險(xiǎn)因素之一[1]。近年來隨著對(duì)高血壓發(fā)病機(jī)制研究的深入，認(rèn)為慢性炎癥和機(jī)體免疫功能的異?？赡軈⑴c了高血壓及其靶器官損害過程[2]。Toll樣受體4(TLR4)是人類發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)TOLL樣受體(toll like receptors，TLRs)家族成員，目前研究表明TLR4可在血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)和內(nèi)皮細(xì)胞等心血管相關(guān)細(xì)胞中表達(dá)，在心血管炎癥病理發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用[3]。本研究旨在觀察老年高血壓病人外周血TLR4表達(dá)與血壓晝夜節(jié)律的關(guān)系，從而探討老年高血壓靶器官損傷的機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 納入2018年1月—2018年10月在我院門診和老年病科住院的未經(jīng)正規(guī)治療的老年高血壓病人80例， 年齡≥60歲。所有入選病例均采用 1999 年世界衛(wèi)生組織(WHO)/國(guó)際高血壓學(xué)會(huì)(ISH )高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)選取血壓正常、年齡≥60歲的老年人30名作為對(duì)照組。所有入選者均排除繼發(fā)性高血壓、血液病、糖尿病、惡性腫瘤， 嚴(yán)重心、腦、肺、肝、腎疾患和近期感染者。

1.2 研究方法

1.2.1 生化檢測(cè) 所有病人于06：00～08：00采集空腹靜脈血檢測(cè)總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)等指標(biāo)。所有化驗(yàn)均在山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院檢驗(yàn)中心完成。

1.2.2 動(dòng)態(tài)血壓監(jiān)測(cè) 血壓曲線分為杓形和非杓形， 夜間收縮壓(SBP)和/或舒張壓(DBP)下降10%～20%為正常杓型動(dòng)態(tài)血壓節(jié)律，否則為非杓型動(dòng)態(tài)血壓節(jié)律[4]。

1.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TLR4 抽取新鮮的外周血100μL，加入紅細(xì)胞裂解液1mL室溫下孵育10min，1 500 r/min離心10～15 min后棄上清，用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)懸浮細(xì)胞調(diào)節(jié)濃度至1×106細(xì)胞/mL， 取100 μL 細(xì)胞懸液加入流式細(xì)胞管中，加入5 μL TLR4-FITC熒光抗體，同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照管(加入等量PBS)。充分混勻，室溫避光孵育30～40 min，每管分別加1 mL PBS重懸，1 500 r /min離心 10 min，棄上清。 再次加入1 mL PBS重懸細(xì)胞重復(fù)離心后棄上清，加入 200 μL PBS 重懸細(xì)胞用流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1 老年高血壓組與對(duì)照組基礎(chǔ)資料比較 兩組在性別、體質(zhì)指數(shù)、TC、TG、LDL-C、HDL-C方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；老年高血壓組24 h、白晝、夜間收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、脈壓(PP)均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。詳見表1、表2。

注：兩組各項(xiàng)比較P>0.05

表2 老年高血壓組和對(duì)照組血壓指標(biāo)和TLR4表達(dá)比較(±s)

注：dSBP為白晝收縮壓；dDBP為白晝舒張壓；nSBP為夜間收縮壓；nDBP為夜間舒張壓；dPP為白晝脈壓；nPP為夜間脈壓；與對(duì)照組比較，1)P<0.05

2.2 老年高血壓組與對(duì)照組TLR4表達(dá)比較 老年高血壓組TLR4表達(dá)陽(yáng)性率為(7.86±1.87)%，明顯高于對(duì)照組的(5.16±1.48)%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表2。

2.3 非杓型高血壓組與杓型高血壓組一般資料和TLR4表達(dá)的比較 老年高血壓組根據(jù)血壓晝夜節(jié)律分為杓型高血壓組和非杓型高血壓組，兩組在性別、體質(zhì)指數(shù)、TC、TG、LDL-C、HDL-C方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)； 非杓型高血壓組TLR4表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于杓型高血壓組，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表3。

表3 非杓型高血壓組、杓型高血壓組及對(duì)照組一般資料和TLR4表達(dá)的比較

與杓型高血壓組比較，1)P<0.05

3 討 論

全球疾病負(fù)擔(dān)研究(GBD2015)數(shù)據(jù)顯示，在全球死亡率下降速度快于預(yù)期的基礎(chǔ)上，心血管疾病所導(dǎo)致的死亡率卻是增加的[1]，其中高血壓是心血管疾病最主要的危險(xiǎn)因素[2]，易導(dǎo)致心、腦、腎等靶器官損害，甚至誘發(fā)心腦血管事件的發(fā)生[5]，嚴(yán)重威脅著人類健康。原發(fā)性高血壓(EH)的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，遺傳、體液、環(huán)境及神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制等均參與了高血壓的發(fā)生發(fā)展。新近研究認(rèn)為，高血壓病是一種慢性炎癥性疾病，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)均證實(shí)高血壓的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸與炎癥密切相關(guān)，而高血壓的血流動(dòng)力學(xué)異常又加重其炎癥反應(yīng)[6]。血管內(nèi)存在多個(gè)炎癥因子和炎癥通路，而TLRs尤其是 TLR4 介導(dǎo)的炎癥通路參與了高血壓的病理過程[7]，Marketou等[8]研究表明TLR4的激活與原發(fā)性高血壓密切相關(guān)。本研究顯示老年高血壓組TLR4表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，說明TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及炎癥機(jī)制可能參與了老年高血壓的發(fā)生發(fā)展。

有研究證實(shí)，TLRs信號(hào)通路的激活可誘發(fā)高血壓心肌重構(gòu)和纖維化，導(dǎo)致心肌結(jié)構(gòu)和功能的改變[9]。譚麗華等[10]發(fā)現(xiàn)高血壓大鼠出現(xiàn)明顯的左室肥厚時(shí)，伴有心肌TLR4、NF-κB、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)等免疫炎癥因子表達(dá)的增多，證實(shí)了免疫-炎癥反應(yīng)參與了高血壓大鼠左室肥厚的發(fā)展。Bomfim等[11]通過對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的研究發(fā)現(xiàn)，抑制TLR4可以直接降低血壓，緩解血管異常收縮，認(rèn)為抗TLR4藥物對(duì)于直接控制血壓有重要作用。張世魁等[12]研究表明高血壓腎損害病人外周血單核細(xì)胞TLR4表達(dá)及血清TNF-α水平均明顯升高，證實(shí)了TLR4信號(hào)通路天然免疫和炎癥反應(yīng)在高血壓腎損害中的重要作用?？傊琓LR4與高血壓的靶器官損害密切相關(guān)，可能是高血壓的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。而老年高血壓病人常伴有血壓晝夜節(jié)律的異常，血壓變異與靶器官損害、心腦血管事件及死亡率的相關(guān)性尤為密切。本研究結(jié)果顯示非杓型老年高血壓病人TLR4表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于杓型老年高血壓病人，說明TLR4信號(hào)通路的過度激活和TLR4表達(dá)的增多可能是老年高血壓病人血壓節(jié)律異常導(dǎo)致靶器官損害明顯的機(jī)制之一。

總之，TLR4 及其介導(dǎo)的炎癥免疫反應(yīng)與老年高血壓病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[13]。TLR4可以通過炎癥機(jī)制引起內(nèi)皮功能紊亂及組織損傷，造成血管重構(gòu)、心肌纖維化等，最終導(dǎo)致靶器官損害[14]。而干預(yù)TLR4的表達(dá)對(duì)于改善血壓及相應(yīng)的并發(fā)癥可能有一定的療效[15]。因此，研究TLR4在高血壓發(fā)生發(fā)展及靶器官損害中的作用，可為高血壓的治療提供思路，以減少和預(yù)防心腦血管并發(fā)癥的發(fā)生，從而達(dá)到長(zhǎng)期改善高血壓病人生活質(zhì)量的最終目的。