結(jié)核感染T細(xì)胞檢測對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核患者診斷效能的影響

羅春卉

(鄭州市第六人民醫(yī)院（河南省傳染病醫(yī)院）檢驗(yàn)科，河南 鄭州 450000)

活動(dòng)性肺結(jié)核具有較高發(fā)病率，且危害較高，而及早確診疾病對(duì)臨床早期制定有針對(duì)性干預(yù)方案、改善患者臨床療效及預(yù)后具有重要意義[1，2]。目前，臨床雖可綜合患者臨床表現(xiàn)、微生物學(xué)、病理學(xué)及影像學(xué)檢查等方式診斷結(jié)核病，但難以準(zhǔn)確評(píng)估其是否為活動(dòng)性肺結(jié)核，而抗酸菌涂片及微生物培養(yǎng)等診斷方式陽性率較低。同時(shí)，肺外結(jié)核患者臨床表現(xiàn)較復(fù)雜，自身細(xì)菌數(shù)目相對(duì)較少，因此采取上述常規(guī)措施診斷活動(dòng)性肺外結(jié)核難度更大[3，4]。近些年，檢測宿主對(duì)結(jié)核桿菌特異性免疫反應(yīng)在肺結(jié)核診斷中得到應(yīng)用，包括γ干擾素釋放試驗(yàn)及結(jié)核菌素試驗(yàn)，但接種結(jié)核桿菌疫苗對(duì)其診斷結(jié)果產(chǎn)生了一定影響。而結(jié)核感染T細(xì)胞檢測（T-SPOT.TB）屬γ干擾素釋放試驗(yàn)重要類型，其采取兩個(gè)抗原肽作特異性結(jié)核分枝桿菌抗原，逐漸得到推廣應(yīng)用[5，6]。本研究選取我院活動(dòng)性肺結(jié)核患者93例及肺部其他病變患者93例進(jìn)行對(duì)比研究，探討T-SPOT.TB試驗(yàn)應(yīng)用價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2015年11月-2017年6月活動(dòng)性肺結(jié)核患者93例設(shè)為研究組、肺部其他病變患者93例設(shè)為對(duì)照組。研究組男61例，女32例；年齡 53～76 歲，平均（64.30±10.11）歲；痰涂片培養(yǎng)結(jié)果呈陽性者37例，呈陰性者56例。對(duì)照組男 59 例，女 34 例；年齡 51～79 歲，平均（64.86±10.56）歲；疾病類型：肺炎53例，肺癌25例，其他15例。兩組年齡、性別等臨床資料比較無明顯差異（P＞0.05），且本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)審批通過。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn) ⑴知曉本研究，簽署同意書；⑵研究組均為首次發(fā)?。虎茄芯拷M均經(jīng)臨床證實(shí)為活動(dòng)性肺結(jié)核；⑷排除納入研究前采取相關(guān)藥物治療者；⑸排除并發(fā)全身性重度感染性疾病、自身免疫系統(tǒng)重度病變者。

1.3 方法 所有患者均接受T-SPOT.TB試驗(yàn)，各步驟嚴(yán)格遵循T-SPOT.TB試劑盒（Oxford Immunotec公司）說明書執(zhí)行，試驗(yàn)前抽取抗凝血標(biāo)本，經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液提取外周血單個(gè)核細(xì)胞，經(jīng)分離處理單個(gè)核細(xì)胞依據(jù)指定密度鋪于96孔板 （包被γ干擾素），分別加入含ESAT-6（A抗原）培養(yǎng)液、含CFP-10（B抗原）培養(yǎng)液、不含抗原培養(yǎng)液（作為陰性對(duì)照）、含植物血凝素培養(yǎng)液（作為陽性對(duì)照），再于37℃的二氧化碳培養(yǎng)箱 （濃度：5%）內(nèi)進(jìn)行20h培養(yǎng)，完成培養(yǎng)后對(duì)各孔實(shí)施斑點(diǎn)計(jì)數(shù)，若A抗原與 （或）B抗原孔斑點(diǎn)細(xì)胞數(shù)目超出陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)至少6個(gè)則評(píng)定為陽性；所有受檢者均接受TB-DNA-PCR：采集患者痰液10ml，以NaOH溶液稀釋痰液，取2ml置入離心管內(nèi)，離心（12000r/min，5min）處理，棄上清液，沉淀加入 DNA提取液50ul，混合均勻，于100℃恒溫水浴鍋內(nèi)放置約 10min，冷卻至室溫，離心（12000r/min，5min）處理，取上清液置于PCR管內(nèi)，8000r/min離心數(shù)秒后置于PCR儀器內(nèi)，加熱裂解提取DNA，采取實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)測定標(biāo)本中TB-DNA含量，試劑盒購于深圳市康百得生物科技有限公司。

1.4 觀察指標(biāo) ⑴統(tǒng)計(jì)兩組T-SPOT.TB及TBDNA-PCR試驗(yàn)結(jié)果。⑵統(tǒng)計(jì)對(duì)比研究組菌陽性及菌陰性患者T-SPOT.TB及TB-DNA-PCR試驗(yàn)陽性率。⑶統(tǒng)計(jì)對(duì)比T-SPOT.TB與TB-DNA-PCR對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核診斷效能。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 通過SPSS 18.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料 n（%）表示，χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組T-SPOT.TB及TB-DNA-PCR試驗(yàn)結(jié)果分析 研究組T-SPOT.TB及TB-DNA-PCR試驗(yàn)陽性率 （87.10%、37.63%）高于對(duì)照組 （36.56%、0.00%）（P＜0.05）。 見表 1。

表1 兩組T-SPOT.TB及TB-DNA-PCR試驗(yàn)結(jié)果分析[n（%）]

2.2 研究組菌陽性及菌陰性患者T-SPOT.TB及TB-DNA-PCR試驗(yàn)結(jié)果分析 研究組菌陽性患者T-SPOT.TB及TB-DNA-PCR試驗(yàn)陽性率（97.30%、51.35%）高于菌陰性患者 （80.36%、28.57%）（P＜0.05）。 見表 2。

2.3 T-SPOT.TB與TB-DNA-PCR診斷效能分析T-SPOT.TB診斷敏感度（87.10%）高于TB-DNAPCR（37.63%），特異度（63.44%）低于 TB-DNAPCR（100.00%）（P＜0.05），兩種診斷方式準(zhǔn)確度間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表2 研究組菌陽性及菌陰性患者T-SPOT.TB及TB-DNA-PCR試驗(yàn)結(jié)果分析[n（%）]

表3 T-SPOT.TB與TB-DNA-PCR診斷效能分析[n（%），n=186]

3 討論

活動(dòng)性肺結(jié)核為結(jié)核分枝桿菌感染所致慢性傳染病類型，在世界范圍內(nèi)均具有較高發(fā)病率及病死率，對(duì)人口生命健康及生活質(zhì)量危害極大[7]。因此，如何對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核予以快速、準(zhǔn)確診斷成為研究熱點(diǎn)。

抗酸染色法為臨床診斷活動(dòng)性肺結(jié)核的重要措施，以價(jià)格低廉、操作快捷簡單等優(yōu)勢在臨床得到普遍應(yīng)用，Lee YM等[8]研究結(jié)果顯示，抗酸染色法在活動(dòng)性肺結(jié)核診斷中特異度高達(dá)100.0%，但其敏感度較低，僅為22.25%；而免疫膠體金結(jié)核抗體檢查可快速提供診斷結(jié)果，在活動(dòng)性肺結(jié)核診斷中也較常用，其敏感度39.39%較抗酸染色法略高，但特異度僅為78.90%，低于抗酸染色法，導(dǎo)致兩種診斷方式易增加漏診及誤診風(fēng)險(xiǎn)，致使患者錯(cuò)失最佳治療時(shí)機(jī)，對(duì)疾病良好轉(zhuǎn)歸產(chǎn)生了不利影響。

γ干擾素釋放試驗(yàn)為結(jié)核分枝桿菌潛伏感染的重要診斷措施，相較于傳統(tǒng)TST診斷，其所用抗原為來自于結(jié)核分枝桿菌RDI處的特異抗原CFP-10及ESAT-6，故可區(qū)別所有卡介苗所接種的回憶反應(yīng)及大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌感染[9，10]。γ干擾素釋放試驗(yàn)當(dāng)前常用商品化試劑盒主要為Quanti FERONTB Gold in-tube assay及T-SPOT.TB，其中T-SPOT.TB試驗(yàn)由Lalvani等學(xué)者于2001年初次用于診斷結(jié)核疾病，其是采取酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法測定結(jié)核桿菌感染者特異性細(xì)胞進(jìn)行疾病診斷的新型措施[11，12]。程利[13]研究結(jié)果顯示，T-SPOT.TB試驗(yàn)在活動(dòng)性肺結(jié)核中診斷敏感度可達(dá)94.4%，而本研究結(jié)果顯示，研究組T-SPOT.TB試驗(yàn)陽性高于對(duì)照組，其診斷敏感度為87.10%，高于TB-DNA-PCR，表明T-SPOT.TB試驗(yàn)在活動(dòng)性肺結(jié)核中具有較高診斷價(jià)值，可降低疾病誤診風(fēng)險(xiǎn)，避免延誤患者最佳治療時(shí)機(jī)，分析其原因主要在于：多個(gè)光譜光學(xué)檢測可提供精準(zhǔn)實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果，并且其具備極速制冷與加熱能力，可于2h內(nèi)提供穩(wěn)定、準(zhǔn)確試驗(yàn)結(jié)果，而TBDNA-PCR結(jié)果易受痰標(biāo)本量及患者感染均屬類型等諸多因素影響，故可影響其檢測陽性率。另有研究指出，針對(duì)陳舊性結(jié)核病患者，其病程可對(duì)TSPOT.TB試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響，故既往存在陳舊性肺結(jié)核和結(jié)核分枝桿菌潛伏感染者T-SPOT.TB試驗(yàn)檢測更加復(fù)雜[14，15]。同時(shí)，由本研究結(jié)果還可得知，T-SPOT.TB試驗(yàn)特異度較低（63.44%），而任甜甜等[16]結(jié)果也表明該診斷方式特異度較低，僅為62.96%，分析其原因可能是：⑴TB-DNA-PCR痰標(biāo)本量不足或標(biāo)本不合格；⑵患者所感染分枝桿菌非結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群，因此TB-DNA-PCR無法檢出。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，T-SPOT.TB試驗(yàn)陽性率在菌陽性患者中更高，因此表明臨床實(shí)際可將TSPOT.TB試驗(yàn)用于活動(dòng)性肺結(jié)核輔助診斷，但為提高診斷特異度，應(yīng)聯(lián)合其他措施進(jìn)行綜合診斷，以此準(zhǔn)確診斷活動(dòng)性肺結(jié)核，最大程度避免漏診及誤診發(fā)生。

綜上所述，采取結(jié)核感染T細(xì)胞檢測對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核予以診斷，可有效提高診斷敏感度，為臨床及早制定活動(dòng)性肺結(jié)核對(duì)應(yīng)治療方案提供一定參考依據(jù)，但其特異度較低，臨床實(shí)際可聯(lián)合痰培養(yǎng)及痰多聚酶鏈反應(yīng)結(jié)核分枝桿菌核酸檢測等方式對(duì)患者進(jìn)行綜合診斷，以此最大程度降低疾病漏診及誤診風(fēng)險(xiǎn)。