Cripto-1、mTOR在宮頸癌組織中的表達(dá)與病理學(xué)特征的關(guān)系

朱軍義，郭哲，王雙雙

(南陽(yáng)市中心醫(yī)院婦科，河南 南陽(yáng)473000)

近年來(lái)宮頸癌的發(fā)病率顯著的增高，流行病學(xué)研究認(rèn)為，在年齡大于45歲的人群中，宮頸癌的發(fā)病率可達(dá)262～383/10萬(wàn)人左右[1]。臨床上宮頸癌特別是中晚期宮頸癌的發(fā)生，能夠增加女性臨床預(yù)后惡化的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致患者病死率的增高[2]。對(duì)于宮頸癌發(fā)病過(guò)程中分子機(jī)制的研究，能夠?yàn)榕R床上宮頸癌患者的臨床診療或者早期篩查提供理論基礎(chǔ)。Cripto－1蛋白最早發(fā)現(xiàn)存在于畸胎瘤上皮細(xì)胞中，Cripto－1蛋白能夠提高癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)宮頸上皮細(xì)胞的增殖速度的增加[3]；哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）是PI3K/AKT信號(hào)通路上的重要效應(yīng)因子，其表達(dá)濃度的改變能夠促進(jìn)腫瘤相關(guān)信號(hào)通路的激活，增加癌細(xì)胞的持續(xù)性增殖的風(fēng)險(xiǎn)[4]。部分研究揭示了Cripto－1蛋白或者mTOR蛋白與甲狀腺或者乳腺癌患者臨床預(yù)后的關(guān)系，認(rèn)為Cripto－1蛋白、mTOR蛋白的高表達(dá)與患者的臨床分期的進(jìn)展等密切相關(guān)[5，6]，但對(duì)于二者與宮頸癌的關(guān)系研究不足。為了揭示Cripto－1、mTOR與宮頸癌的相關(guān)性，從而為臨床上宮頸癌患者的診療提供理論，本次研究收集了相關(guān)指標(biāo)，揭示了Cripto－1、mTOR的表達(dá)與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2015年11月至2017年1月收集的手術(shù)后宮頸癌組織標(biāo)本80例（宮頸癌組）、宮頸上皮瘤變組織80例（CIN組）。宮頸癌組，年齡43～67 歲，平均 58.3±8.2 歲，依據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)聯(lián)盟分期標(biāo)準(zhǔn)（FIGO）：Ⅰ期腫瘤患者19例、Ⅱ期腫瘤患者28例、Ⅲ期腫瘤患者23例、Ⅳ期腫瘤患者10例；組織學(xué)分化程度：高分化患者30例、中分化患者21例、低分化患者29例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例。CIN組，年齡 41～65 歲，平均 56.4±9.0 歲，其中 CINⅠ級(jí) 26例、CINⅡ級(jí)38例、CINⅢ級(jí)16例。宮頸癌組和CIN組的年齡比較，差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴宮頸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)樂(lè)杰主編《婦產(chǎn)科學(xué)》第八版中的標(biāo)準(zhǔn)；⑵依據(jù)病理學(xué)結(jié)果作為診斷金標(biāo)準(zhǔn)；⑶患者既往無(wú)放化療、免疫治療史；⑷研究對(duì)象的基線資料收集完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴未經(jīng)病理學(xué)檢查確診；⑵伴有其他部位的惡性腫瘤疾?。虎羌韧哂袑m頸手術(shù)病史。

1.2 免疫組化染色方法 所有組織標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋后作連續(xù)切片，厚度約為4mm，采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復(fù)合體法 (strep avidin－biotin complex，SABC法)染色，二氨基聯(lián)苯胺(diamionben zidene，DAB)顯色。 Cripto－1 蛋白、mTOR 蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。以陽(yáng)性片及PBS代替一抗分別作為陽(yáng)性及陰性對(duì)照，高倍顯微鏡下觀察Cripto－1蛋白、mTOR蛋白的表達(dá)情況，具體染色步驟嚴(yán)格按照SP試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.3 免疫組化結(jié)果判定 染色結(jié)果判定：在400倍顯微鏡下進(jìn)行觀察，Cripto－1蛋白、mTOR蛋白的定位于細(xì)胞質(zhì)，陽(yáng)性表達(dá)為黃色、棕黃色、褐色著色，（1）染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)色（0 分）、淡黃色（1 分）、棕黃色染色（2 分）、染色為深棕色（3 分）；（2）依據(jù)染色細(xì)胞比例：占比≤10%（1分）、占比11%～50%（2 分）、占比 51%～75%（3 分）、占比＞75%（4 分），染色強(qiáng)度與染色細(xì)胞占比之分相乘所得總分＜3分為陰性、≥3分為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)表述采用（x±s）表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；P值＜0.05說(shuō)明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS 16.0 版本。

2 結(jié)果

2.1 兩組標(biāo)本中Cripto－1蛋白、mTOR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較 宮頸癌組的Cripto－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率66.25%、mTOR 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率 62.50%，CIN 組的Cripto－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率 27.50%、mTOR 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率25.00%；兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；見(jiàn)表 1。

表1 兩組標(biāo)本中Cripto-1蛋白、mTOR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較[n（%）]

2.2 宮頸癌組織中Cripto－1蛋白、mTOR蛋白表達(dá)的相關(guān)性 宮頸癌組的Cripto－1蛋白與mTOR蛋白表達(dá)呈顯著的正相關(guān)關(guān)系（r=0.594，P＜0.05）；見(jiàn)表2。

表2 宮頸癌組織中Cripto-1蛋白、mTOR蛋白表達(dá)的相關(guān)性

2.3 宮頸癌組織中Cripto－1蛋白表達(dá)與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系 FIGO分期（Ⅲ期+Ⅳ期）、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組的Cripto－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著的高于 FIGO分期（Ⅰ期+Ⅱ期）、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織（P＜0.05）；見(jiàn)表 3。

2.4 宮頸癌組織中mTOR蛋白表達(dá)與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系 發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組的mTOR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著的高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織（P<0.05）；見(jiàn)表 4。

表3 宮頸癌組織中Cripto-1蛋白表達(dá)與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系

表4 宮頸癌組織中mTOR蛋白表達(dá)與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系

3 討論

宮頸癌的發(fā)生主要考慮與宮頸上皮的損傷及繼發(fā)性的基因調(diào)控異常有關(guān)，特別是在HPV病毒感染的患者中，癌相關(guān)基因或者蛋白的突變風(fēng)險(xiǎn)更高。不同的生物學(xué)因素的改變，不僅能夠影響宮頸癌腫瘤相關(guān)信號(hào)通路的激活，同時(shí)還能夠改變宮頸柱狀上皮轉(zhuǎn)化區(qū)細(xì)胞的生物學(xué)特性，導(dǎo)致早期細(xì)胞異型性的發(fā)生[7]?，F(xiàn)階段臨床上宮頸癌患者的早期診斷的水平仍然較為局限，宮頸細(xì)胞學(xué)或者病毒學(xué)的篩查雖然能夠提高宮頸癌的篩查水平，但仍然存在假陰性的病例；現(xiàn)階段臨床上通過(guò)手術(shù)及綜合性的放療方式輔助治療宮頸癌，但其治療后的宮頸癌患者的生存時(shí)間的改善并不理想，治療后的3年生存率并無(wú)明顯的提高[8，9]。本次研究對(duì)于宮頸癌患者病灶組織中的Cripto-1、mTOR蛋白水平的相關(guān)研究，具有下列兩個(gè)方面的價(jià)值：⑴能夠?yàn)榕R床上宮頸癌患者的早期篩查提供理論基礎(chǔ)，并提供可靠的參考指標(biāo)；⑵可能為臨床上宮頸癌患者的免疫靶向治療提供作用靶點(diǎn)，從而改善宮頸癌患者的生存預(yù)后。

Cripto-1的表達(dá)能夠影響宮頸柱狀上皮細(xì)胞的增殖活性，提高上皮細(xì)胞核DNA的異常增殖的風(fēng)險(xiǎn)，Cripto-1還能夠影響到上皮細(xì)胞突破基底膜的風(fēng)險(xiǎn)[10]；mTOR作用PI3K/AKT信號(hào)通路的下游因子，其表達(dá)濃度的上調(diào)能夠提高宮頸柱狀上皮細(xì)胞的核轉(zhuǎn)錄水平，抑制柱狀上皮細(xì)胞的凋亡?；A(chǔ)領(lǐng)域的研究還認(rèn)為，mTOR的表達(dá)能夠提高宮頸癌細(xì)胞的侵襲能力，提高癌細(xì)胞對(duì)于宮旁組織的浸潤(rùn)風(fēng)險(xiǎn)[11，12]。

免疫組化水平的分析研究發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌病灶組織中可以發(fā)現(xiàn)Cripto-1、mTOR蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯的上升，高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組，差異較為明顯，提示了Cripto-1、mTOR蛋白的高表達(dá)均能夠影響宮頸癌的發(fā)生過(guò)程，通過(guò)薈萃國(guó)內(nèi)外的相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為Cripto-1、mTOR的表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程的關(guān)系可能與下列幾個(gè)方面的因素有關(guān)[13，14]：⑴Cripto-1蛋白的高表達(dá)能夠提高柱狀上皮細(xì)胞的持續(xù)性增殖的風(fēng)險(xiǎn)，提高癌細(xì)胞DNA的擴(kuò)增速度；⑵mTOR蛋白的高表達(dá)能夠激活PI3K下游信號(hào)通路因子，提高宮頸癌細(xì)胞對(duì)于宮頸基底膜組織的浸潤(rùn)程度，促進(jìn)癌細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移過(guò)程。李慧等[15]研究者也分析了免疫組化相關(guān)數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)宮頸癌患者的癌旁組織的浸潤(rùn)風(fēng)險(xiǎn)越高，mTOR蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率越高。對(duì)于Cripto-1、mTOR的相關(guān)關(guān)系的分析可見(jiàn)，二者的表達(dá)具有顯著的相關(guān)性，提示了Cripto-1、mTOR可能在促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮了一定的協(xié)同刺激作用，但具體的內(nèi)在作用途徑仍然需要后續(xù)的研究。在探討Cripto-1等與宮頸癌患者病情進(jìn)展關(guān)系的過(guò)程中，在臨床分期較晚或者發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的人群中，Cripto-1蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率可顯著的上升，高于臨床分期較早或者未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，這主要由于Cripto-1的表達(dá)能夠提高上皮細(xì)胞浸潤(rùn)淋巴結(jié)或者臨近正常組織的能力[15]。而發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組的mTOR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著的高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織，表明淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生與mTOR蛋白的表達(dá)密切相關(guān)。

本次研究的創(chuàng)新性在于探討了Cripto-1、mTOR蛋白與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。綜上所述，Cripto-1、mTOR在宮頸癌組織中高表達(dá)，二者的表達(dá)與宮頸癌患者的臨床病理特征有一定相關(guān)性。