核桃中乙烯利農(nóng)藥殘留分析方法

李 煜，王晨晨

（1.安徽賽如分析檢測科技有限公司，安徽 合肥 238080；2.安徽省農(nóng)產(chǎn)品安全重點實驗室，安徽 合肥 238000）

乙烯利純品為晶狀固體，學(xué)名為2-氯乙基膦，分子式 C2H6ClO3P，分子量 144.5，CAS 號為16672-87-0。熔點 74 ～75℃，沸點約265℃ （分解），蒸氣壓 ＜0.01mPa（20℃），密度 1.409 ±0.02 （20℃，原藥），溶解度水約1kg/L（23℃），溶于乙醇，甲醇，異丙醇，丙酮，乙酸乙酯和其它極性有機溶劑，微溶于非極性有機溶劑如苯，甲苯，不溶于煤油，柴油，pH＜3.5 時水溶液中穩(wěn)定，隨pH值升高。水解釋放出乙烯，對紫外光敏感，75℃以下穩(wěn)定。乙烯利是促進成熟的植物生長調(diào)節(jié)劑。是促進成熟的植物生長調(diào)節(jié)劑。在酸介質(zhì)中十分穩(wěn)定，而在pH4 以上，則分解釋放出乙稀。一般植物細胞液的pH皆在4 以上，乙稀利經(jīng)由植物的葉片、樹皮、果實或種子進入植物體內(nèi)，然后傳導(dǎo)到起作用的部位，便釋放出乙稀 ，能起內(nèi)源激素乙稀所起的生理功能，如促進果實成熟及葉片、果實的脫落 ，矮化植株，改變雌雄花的比率，誘導(dǎo)某些作物雄性不育等。乙烯利廣泛應(yīng)用于番茄、蘑菇、蘋果、桃等水果和蔬菜的催熟，也逐漸應(yīng)用于大米等谷物以及核桃等堅果類。

近年來，乙烯利在果蔬、谷物中的殘留分析方法已有大量文獻介紹，但在核桃等堅果中的殘留分析方法還未見報道，因此制定一種堅果中殘留量的測定方法十分必要。為此，研究建立了一種LC-MS/MS 方法測定核桃中乙烯利殘留量的方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 色譜乙腈、色譜甲醇、甲酸（色譜純）、PSA（粒徑 40 ～63μm 60A）、C18-SPE小柱 （500mg/3mL）。

1.2 標準品 乙烯利標準品：純度96.0%。

1.3 儀器設(shè)備 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀、十萬分之一電子天平 （sartorius BT25S 型）、電子天平 （B5002）、水浴恒溫振蕩器 （WHY-2）、超聲波清洗器 （KQ-600B型）、低速離心機 （SC-3610）、玻璃儀器氣流烘干器 （KQC）、容量瓶和玻璃移液管等。

1.4 試驗方法

1.4.1 標準溶液配制 準確稱取一定量的乙烯利標準品，用色譜乙腈溶解定容至10mL，轉(zhuǎn)移到棕色標準品儲備瓶中保存，然后再稀釋至100mg/L備用。將100mg/L的乙烯利標準溶液用其核桃空白基質(zhì)稀釋至2 000、1 000、500、200、100、50、20μg/L的標準溶液。在質(zhì)譜條件下進行測定，以乙烯利標準工作溶液進樣濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。

1.4.2 添加回收試驗 準確稱取處理好的核桃空白樣品5.00g，分別添加乙烯利標準工作液濃度，添加濃度為 0.1、0.5、5mg/kg，共計 3 個添加水平，每個添加水平5 個平行，同時測定空白樣品濃度。

1.4.3 樣品提取進化方法 準確稱取處理好的核桃樣品 5.00g于 50mL 離心管中，加入20mL0.1%甲酸溶液，超聲波提取20min，機械振蕩提取 30min，然后以 4 000 r/min 離心 5 min，取5mL上清液轉(zhuǎn)移至10mL離心管中，12 000 r/min 離心 10 min，待凈化。

依次用3mL甲醇、3mL純水活化C18-SPE小柱，待柱子流盡干，移取4mL上述提取液于C18-SPE小柱，棄去前面1mL淋洗液，然后收集于15mL離心管中，混勻，過0.22μm親水濾膜，供 LC-MS/MS 測定。

1.4.4 儀器測定條件 色譜柱：Waters ACQUITY UPLC R BEH C18，100mm ×2.1mm ×1.7μm；柱溫：40℃；流動相：水/甲醇 （V/V=98/2） +0.1%甲酸：0.1%甲酸甲醇=95：5；流速：0.3mL/min；進樣量：10μL。

電離方式：ESI-；細管電壓：2.5kv；離子源溫度：150℃；錐孔反吹氣流量：50L/Hr；脫溶劑氣溫度：350℃；脫溶劑氣流量：700L/Hr；監(jiān)測模式：MRM模式

其他質(zhì)譜條件如下：

*定量離子

2 結(jié)果

2.1 殘留量及回收率計算 采用外標法定量。待測樣液中乙烯利的響應(yīng)值應(yīng)在標準曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)稀釋后再進樣分析。計算公式如下：

測定結(jié)果保留兩位有效數(shù)字，其中空白樣本未檢出。

式中：

X——樣本中乙烯利殘留量，mg/kg；

c——由校準曲線得出的測定液中乙烯利的濃度，μg/mL；

V——測定液定容體積，mL；

f——稀釋倍數(shù)；

m——樣本質(zhì)量，g。

式中：

y——回收率，%；

X——空白樣本加標后的實際測定值，mg/kg；

X0——空白樣本加標后的理論測定值，mg/kg。

2.2 添加回收試驗結(jié)果

2.2.1 標準溶液測定結(jié)果 在超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀上檢測標準工作溶液2 000、1 000、500、200、100、50、20μg/L。結(jié)果表明，此濃度范圍內(nèi)質(zhì)譜峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，乙烯利的準曲線方程為：y=9.464 5x-133.24，R2=0.999 9，結(jié)果 （表 1）。

表1 標準溶液測定結(jié)果

2.2.2 添加回收試驗結(jié)果 稱取處理好的核桃空白樣品5.0g，分別添加乙烯利標準工作液濃度至0.1、0.5、5.0mg/kg，按以上方法提取凈化檢測，每個添加濃度5 次重復(fù)，回收率結(jié)果（表2）。

表2 乙烯利在核桃上的添加回收試驗結(jié)果

乙烯利在0.1 ～5.0mg/kg添加水平，平均回收率為 94% ～105%，相對標準偏差為0.82%～2.64%。以添加回收試驗中最小添加濃度為定量限，乙烯利的定量限為0.1mg/kg。

3 討論與分析

對不同濃度的乙烯利的標準曲線進行重復(fù)檢測，其重現(xiàn)性很好，線性關(guān)系符合農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留準則要求。核桃按 0.1、0.5、5.0mg/kg進行方法的添加回收試驗，結(jié)果表明，乙烯利在核桃中的平均回收率為94% ～105%，相對標準偏差為0.82% ～2.64%。以添加回收試驗中最小添加濃度為定量限，乙烯利的定量限為0.1mg/kg。該方法線性良好、靈敏度高、正確度和精密度好，滿足農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗準則的要求。均符合農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留準則要求。