2015-2016年北京市順義區(qū)人源性副溶血性弧菌耐藥性分析

李湛 李穎 荊紅波 王彥波 朱美娟 張赫

副溶血性弧菌(vibrioparahaemolyticus，簡稱VP)主要來自魚蝦蟹等海產(chǎn)品及鹽腌制品中，進(jìn)食含該菌食物后可引起食物中毒[1]。由于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)及臨床上抗生素的不規(guī)范使用導(dǎo)致副溶血性弧菌耐藥性日益嚴(yán)重[2]，給臨床治療帶來很大難度，嚴(yán)重威脅著人類健康。為了更好地了解感染性副溶血弧菌的耐藥情況，現(xiàn)采用肉湯稀釋定量的藥敏檢測方法，旨在對北京市順義區(qū)人源性副溶血性弧菌的耐藥狀況及敏感抗生素是否存在,以及耐藥風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行分析。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源 標(biāo)本分別來自2015年1月-2016年12月順義區(qū)醫(yī)院和順義區(qū)空港醫(yī)院腸道門診腹瀉病人糞便，兩年間共采集糞便標(biāo)本768份，標(biāo)本采集均由臨床醫(yī)護(hù)人員按照規(guī)范操作方法，由腹瀉病人留取糞便，采用無菌有蓋容器，取有膿血、黏液部分的糞便3 g以上，液體糞便取3 mL以上置于無菌瓶中，立即送檢，送檢時(shí)間不超過1 h。

1.2試劑及實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1試劑： 增菌使用3%NaCl堿性蛋白胨水，分離使用TCBS(硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖瓊脂培養(yǎng)基)和科馬嘉弧菌顯色培養(yǎng)基分別購自北京陸橋(生產(chǎn)批號：1604127)、法國科馬嘉公司(生產(chǎn)批號：P000410)。

1.2.2標(biāo)準(zhǔn)菌株： 大腸埃希菌ATCC 25922。

1.2.3實(shí)驗(yàn)方法： 菌株分離按照感染性腹瀉診斷標(biāo)準(zhǔn)(WS/T 271-2007)進(jìn)行。

1.2.4藥敏試驗(yàn)： 采用上海興佰生物技術(shù)公司生產(chǎn)的革蘭陰性需氧菌藥敏檢測板檢測(貨號：D-016XS)，依據(jù)其說明書的檢測原理及操作步驟完成：即每種抗生素都設(shè)有一系列倍比稀釋濃度的抗生素試劑，通過加入待檢細(xì)菌肉湯培養(yǎng)液稀釋的菌懸液，經(jīng)18～20 h 孵育后，用肉眼判讀的方法對藥敏板條進(jìn)行讀數(shù)，經(jīng)數(shù)據(jù)分析得到最低抑菌濃度(MIC)值，并根據(jù)2015年美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)獲得相應(yīng)敏感(S)、中度敏感(I)和耐藥(R)的結(jié)果(表1)。

表1 46株副溶血弧菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

注：復(fù)方磺胺全稱為復(fù)方磺胺甲惡唑，為復(fù)方制劑，含活性成分磺胺甲惡唑和甲氧芐啶。

2 結(jié)果

2.12015-2016年標(biāo)本檢出情況 2015年和2016年分別采集383份和385份，共計(jì)768份糞便標(biāo)本。2015年和2016年致病菌陽性標(biāo)本分別為59份和109份，共計(jì)168株致病菌，包括致瀉大腸埃細(xì)菌，志賀菌，沙門菌，空腸彎曲菌，副溶血性弧菌，腹瀉病人感染致病菌的總陽性率為21.88%。2015年有11份為副溶血弧菌感染的腹瀉病人標(biāo)本，副溶血弧菌陽性率為2.87%；2016年副溶血弧菌陽性標(biāo)本為35份，陽性率為9.91%。兩年間共計(jì)有46株是副溶血弧菌陽性標(biāo)本，感染副溶血弧菌的腹瀉病人占總陽性率的27.38%。

2.2性別及不同年齡組副溶血弧菌檢出情況 根據(jù)分析發(fā)現(xiàn)男性腹瀉病人感染副溶血弧菌的陽性率為6.99%(33/472)，女性陽性率為4.39%(13/296)，感染副溶血弧菌的腹瀉病人的年齡在22歲～74歲之間，青年組(18～30歲)、中年組(31～59歲)和老年組(≥60歲)分別占感染副溶血弧菌腹瀉病人的52%、46%和2%。

2.3藥敏結(jié)果分析 通過藥敏實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)這46株副溶血性弧菌中有四株耐藥株，主要耐藥的抗生素是氨芐西林，耐藥率為6.52%，共3株，且有41株副溶血弧菌對氨芐西林藥敏結(jié)果是中度敏感，2株敏感。其次頭孢西丁的耐藥率是2.17%，共1株，其余45株均敏感。有1株對氨芐西林和舒巴坦聯(lián)合抗菌藥是中度敏感，其他45株為敏感。46株副溶血弧菌對其他八種抗生素中敏率和耐藥率均為0(表1)。比較兩年間的副溶血弧菌耐藥情況發(fā)現(xiàn)，對氨芐西林耐藥的三株菌都在2015年，而2016年幾乎都對氨芐西林中度敏感。在2015年副溶血弧菌都對氨芐西林和舒巴坦敏感，但在2016年出現(xiàn)一株菌對兩種抗生素中度敏感。在2015年出現(xiàn)一株對頭孢西丁耐藥，但其余都對其敏感，而在2016年有兩株菌對頭孢西丁中度敏感，無耐藥株產(chǎn)生(表2)。根據(jù)不同類別的抗生素，對這十一種抗生素進(jìn)行分類比較發(fā)現(xiàn)，副溶血弧菌對氨基糖胺類的慶大霉素，四環(huán)素類，氯霉素類，喹諾酮類的環(huán)丙沙星以及磺胺類的復(fù)方磺胺都很敏感，沒有耐藥株。而對β-內(nèi)酰胺酶類的抗生素出現(xiàn)耐藥菌株(表3)。

表2 2015-2016年副溶血弧菌耐藥株情況比較(株)

表3 副溶血弧菌對β-內(nèi)酰胺酶類抗生素的耐藥情況比較(株)

3 討論

3.1副溶血弧菌是我國沿海地區(qū)食物中毒和夏季腹瀉的重要病原，我國由副溶血性弧菌引起的食物中毒在微生物性食物中毒中位居第三，沿海地區(qū)的城市更是位居細(xì)菌性食物中毒的首位[1-4]。北京市順義區(qū)這次的調(diào)查結(jié)果，與三亞市、杭州市以及廣東省等沿海地區(qū)食物中毒病人副溶血型弧菌耐藥性研究相符，即都對青霉素類和頭孢菌素具有很高的耐藥率[5-7]。部分地區(qū)副溶血弧菌對氨基糖苷類的鏈霉素和慶大霉素有一定的耐藥率，其中杭州市一些食物中毒的病人對環(huán)丙沙星有較低耐藥率[6]。而順義區(qū)這次調(diào)查的菌株對上述抗生素幾乎都敏感，說明副溶血弧菌的耐藥性差異可能與地區(qū)、醫(yī)院和養(yǎng)殖業(yè)使用抗菌素的習(xí)慣及經(jīng)驗(yàn)用藥有關(guān)，以及菌株來源不同等因素綜合所致。

3.2研究發(fā)現(xiàn)，男性腹瀉病人要略多于女性，感染副溶血弧菌的腹瀉病人多集中在青年和中年，兩者總和高達(dá)98%，這與同期順義區(qū)相關(guān)文獻(xiàn)結(jié)果差異不大[8]。從耐藥情況來看，46株感染性副溶血弧菌僅對氨芐西林和頭孢西丁耐藥，耐藥率都低于10%，對其他抗生素都是敏感的，這與近年來通州區(qū)情況大致相同[9]，耐藥情況與同期北京市調(diào)查結(jié)果相比較輕[10]，2016年調(diào)查順義區(qū)副溶血弧菌耐藥情況[11]，發(fā)現(xiàn)只對頭孢類完全耐藥，可以看出順義區(qū)人源性副溶血性弧菌的耐藥程度大致不變且并不是很嚴(yán)重。

3.3調(diào)查結(jié)果顯示，氨芐西林的中敏率為89.13%，而敏感率僅為4.35%，菌株中敏率較高的情況需要重視。頭孢西丁的中敏率為0，敏感率為97.83%，說明菌株對頭孢西丁的耐藥情況遠(yuǎn)沒有氨芐西林嚴(yán)重。調(diào)查中還發(fā)現(xiàn)氨芐西林在2015年出現(xiàn)三株耐藥，而2016年未產(chǎn)生耐藥株。2015年存在一株頭孢西丁耐藥株，但在2016年也沒有耐藥株，需要加強(qiáng)監(jiān)測副溶血弧菌對頭孢西丁的耐藥情況，查閱近幾年文獻(xiàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)副溶血性弧菌對氨芐西林都有耐藥[12-13]；文獻(xiàn)中大多對頭孢唑林、頭孢噻吩等第一代頭孢菌類抗生素也具有較高耐藥率。頭孢西丁是一種半合成制得的抗生素，歸類于第二代頭孢菌素，文獻(xiàn)報(bào)道耐藥程度低于第一代頭孢菌素和氨芐西林類，耐藥株很少[14-15]。通過查閱北京地區(qū)相關(guān)文獻(xiàn)，在調(diào)查北京市副溶血弧菌耐藥情況，發(fā)現(xiàn)一代頭孢已達(dá)到耐藥，二代頭孢達(dá)到中度敏感，建議臨床使用三代頭孢[16]。而此次出現(xiàn)1株，由于耐藥譜很窄，尚不能說明副溶血弧菌也對其產(chǎn)生耐藥。臨床上經(jīng)常使用舒巴坦氨芐西林聯(lián)合抗菌，此次調(diào)查出現(xiàn)對這兩種抗生素中度敏感的菌株，這在2016年房山區(qū)對副溶血弧菌的調(diào)查中也有顯示[17]，菌株出現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象，但順義區(qū)還未出現(xiàn)多重耐藥菌株的情況，但也需要提示臨床上治療由感染性副溶血性弧菌引起的腹瀉應(yīng)注意此類抗生素的使用。

3.4此次使用的肉湯稀釋定量測定方法，使菌株可以對每種抗生素的敏感耐藥情況進(jìn)行定量，比紙片定性法更加準(zhǔn)確，精確到菌株對某種抗生素的每一個(gè)稀釋度的情況。建議臨床應(yīng)以肉湯稀釋的藥敏試驗(yàn)結(jié)果來選擇最佳治療方案，既合理使用抗生素，又可以監(jiān)測地區(qū)副溶血弧菌的耐藥情況，以此來減少副溶血性弧菌產(chǎn)生耐藥菌株的風(fēng)險(xiǎn)。