兩株羊肚菌的人工栽培技術(shù)研究

張 勇 曹晉良 李弘文 南曉潔 楊 麗

（1山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，山西太原030031；2太原芳草地食用菌科技有限公司，山西太原030032；3山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，山西太原030031）

羊肚菌（Morchella）別稱陽雀菌、蜂窩蘑，隸屬于子囊菌門、盤菌綱、盤菌目、羊肚菌科[1]，是一種名貴的食藥兼用真菌。羊肚菌肉質(zhì)脆嫩可口，味道鮮美，含有豐富的酶、多糖、氨基酸、甾醇、有機(jī)酸和微量元素等營養(yǎng)成分，在降血脂、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗疲勞、抗衰老、保護(hù)心血管系統(tǒng)、胃黏膜、腎臟和肝臟等方面具有顯著作用[2-6]。羊肚菌既可以鮮品直接進(jìn)入市場，又可制成干貨，便于儲(chǔ)藏和遠(yuǎn)距離流通，還可應(yīng)用于化妝品和醫(yī)療行業(yè)，具有良好的發(fā)展前景[7]。因此，羊肚菌的栽培一直為全球食用菌愛好者所重視。羊肚菌的人工栽培研究已有一百多年的歷史，20世紀(jì)80年代美國首次報(bào)道了室內(nèi)羊肚菌子實(shí)體栽培成功[8]，我國于20世紀(jì)70年代初開始探討羊肚菌的人工栽培技術(shù)，1992年四川綿陽食用菌研究所朱斗錫[9]教授帶領(lǐng)的團(tuán)隊(duì)取得羊肚菌室外人工栽培技術(shù)的成功并推廣應(yīng)用。時(shí)至今日，羊肚菌的人工栽培技術(shù)和栽培規(guī)模都取得了較大發(fā)展，但栽培技術(shù)尚不成熟，出菇不穩(wěn)定，減產(chǎn)和絕收時(shí)有發(fā)生。目前，我國栽培的羊肚菌以黑色品系為主，梯棱羊肚菌（Morchella importuna）產(chǎn)量高及穩(wěn)定性好，占栽培總面積的95%以上，六妹羊肚菌（Morchella sextelata）次之，開發(fā)潛力較大[10]。試驗(yàn)對(duì)梯棱羊肚菌和六妹羊肚菌進(jìn)行了母種培養(yǎng)基和原種培養(yǎng)基的篩選，并比較了溝播、壟播、覆膜和不覆膜栽培2株羊肚菌的生長情況，以期為羊肚菌的栽培提供理論指導(dǎo)，實(shí)現(xiàn)產(chǎn)量和效益最大化。

1 材料與方法

1.1 菌（株）種

梯棱羊肚菌（M.importuna）菌株T-1、六妹羊肚菌（M.sextelata）菌株L-1均由山西省農(nóng)科院食用菌研究所提供。

1.2 母種培養(yǎng)基的篩選

1.2.1 母種培養(yǎng)基

選用6種母種培養(yǎng)基（表1）。

1.2.2 培養(yǎng)及考察方法

分別將T-1菌株和L-1菌株接種于PDA平板上，置于恒溫培養(yǎng)箱中20℃暗培養(yǎng)15 d，待菌絲長滿平板后，用直徑8 mm的打孔器在菌落邊緣打孔，獲得大小相同長有菌絲的菌餅，然后取1塊同步菌餅接入供試的母種培養(yǎng)基中央，置于恒溫培養(yǎng)箱中20℃暗培養(yǎng)15 d。觀察菌落形態(tài)，記錄菌絲體生長情況，并計(jì)算菌絲體生長速度[11]。每一處理5次重復(fù)，

1.3 原種培養(yǎng)基的篩選

1.3.1 供試原種培養(yǎng)基

選用6種原種培養(yǎng)基（表2）。6種培養(yǎng)基按配方拌勻后，加水，使料含水量達(dá)65%，料裝入16 cm×33 cm（折幅×長度）的聚丙烯袋，滅菌。

1.3.2 原種培養(yǎng)及考察方法

將母種接入供試原種培養(yǎng)基上，20℃暗培養(yǎng)，觀察菌絲體生長情況，記錄菌絲長滿培養(yǎng)基的時(shí)間，并利用以下公式計(jì)算菌絲體平均生長速度。每一處理3次重復(fù)。

表1 母種培養(yǎng)基配方

表2 原種培養(yǎng)基配方

菌絲生長速度（mm/d）=[（菌落直徑-7 mm）÷2]÷培養(yǎng)天數(shù)

1.4 栽培試驗(yàn)

以表2中的6種原種培養(yǎng)基配方料制作T-1菌株和L-1菌株栽培種。采用16 cm×33 cm（折幅×長度）的聚丙烯袋裝料，裝袋后料柱高20 cm，每袋裝濕料600 g。121℃下滅菌1.5 h，冷卻后在接種箱內(nèi)接種。在20℃的培養(yǎng)室內(nèi)發(fā)菌，菌絲滿袋后，用于播種[12]。

栽培試驗(yàn)分別設(shè)置溝播（將菌種撒在壟與壟之間的溝內(nèi)）不覆膜、溝播覆膜、壟播不覆膜和壟播覆膜四個(gè)處理。

播種前搭建鋼架結(jié)構(gòu)的拱棚作為遮陽棚，然后整地，先將土地澆濕，耕翻一遍，然后分壟挖溝，整理成高畦狀，壟寬60 cm，溝寬60 cm，深10～15 cm，每667 m2地撒100～150 kg石灰。在土壤含水量為20%～28%，即手放在土壤上有涼爽感，用力捏可成團(tuán)無水滲出，松手后手上有輕微水印時(shí)，將羊肚菌菌種揉碎，按每667 m2300袋菌種撒在溝面和壟面。用釘耙翻耕平整菌種和土層，確保有70%以上的菌種被翻入土，覆土厚度為3～5 cm[13]。待地面返白后每20～40 cm放置一個(gè)扎孔營養(yǎng)包[營養(yǎng)包配方為：小麥85%，稻殼15%，石膏1%，石灰1%。按配方拌勻后，加水使含水量達(dá)65%，然后裝入16 cm×33 cm（折幅×長度）的聚丙烯袋滅菌]，呈品字形擺放。待菌絲長滿營養(yǎng)包后，再撤去。在出菇期間，采用微噴管澆水，時(shí)間控制在每天0.5～1 h，保持土壤水分在28%～35%，保持空間相對(duì)濕度85%～95%，控制地溫和棚溫不高于20℃，適度通風(fēng)。觀察并記錄原基、子實(shí)體發(fā)生時(shí)間。待羊肚菌子實(shí)體成熟后采收，并記錄產(chǎn)量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Microsoft Excel處理并作圖，經(jīng)Photoshop處理，試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)（P＜ 0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 母種培養(yǎng)基篩選結(jié)果

L-1菌株在供試母種培養(yǎng)基上的生長情況見圖1和表3。由圖1和表3可知，L-1菌株在加土PDA上生長速度最快，為（2.51±0.08）cm/d，與PDA和加富加土PDA上的生長速度差異不顯著（P＜0.05）；菌絲濃密，呈黃褐色，培養(yǎng)第10天產(chǎn)生少量菌核。但L-1菌株在PDA和加富加土PDA上菌絲較稀疏，均于培養(yǎng)第10天產(chǎn)生菌核，且后者的菌核數(shù)是6種培養(yǎng)基中最多的。在碳氮基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，L-1菌株菌絲體雖然致密，但生長速度非常緩慢，為（0.87±0.09）cm/d，15 d內(nèi)未產(chǎn)生菌核。同樣，在加富PDA上，菌絲雖濃密但生長緩慢，15 d內(nèi)未產(chǎn)菌核。而在麥粒煮汁培養(yǎng)基上，菌絲稀疏，呈淡白色，生長速度也較緩慢，為（1.79±0.11）cm/d，15 d內(nèi)未產(chǎn)生菌核。綜合考慮，L-1菌株的最適母種培養(yǎng)基為加土PDA。

圖1 供試母種培養(yǎng)基上L-1菌株的菌落形態(tài)（培養(yǎng)10 d）

圖2 供試母種培養(yǎng)基上T-1菌株的菌落形態(tài)（培養(yǎng)10 d）

表3 供試6種母種培養(yǎng)基中L-1菌株菌絲生長情況

T-1菌株在供試母種培養(yǎng)基上的生長情況見圖2和表4。由圖2和表4可知，T-1菌株在加富PDA上生長速度最快，為（2.39±0.12）cm/d，與其加富加土PDA上的生長速度差異不顯著（P＜0.05）；菌絲較濃密，呈黃白色，于培養(yǎng)第10天產(chǎn)生少量菌核。在加土PDA上，雖然菌絲的生長速度略低于加富PDA和加富加土PDA，但菌絲濃密，呈樹枝狀，黃褐色，同樣于培養(yǎng)第10天產(chǎn)生少量菌核。T-1菌株在PDA和麥粒煮汁培養(yǎng)基上的生長緩慢，菌絲稀疏，呈白色，均于培養(yǎng)第10天產(chǎn)生少量菌核。在碳氮基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，L-1菌株菌絲體雖然潔白濃密，但生長速度非常緩慢，為0.21±0.05 cm/d，另外，菌落呈絨毛狀，15 d內(nèi)未產(chǎn)生菌核。綜合考慮，T-1菌株的最適母種培養(yǎng)基為加土PDA，其次為加富PDA和加富加土PDA。

表4 6種不同母種培養(yǎng)基中T-1菌株生長的情況

圖3 L-1菌株出菇情況

圖4 羊肚菌T-1菌株栽培結(jié)果

2.2 原種培養(yǎng)基篩選結(jié)果

L-1菌株在供試原種培養(yǎng)基上的生長情況詳見表5。L-1菌株在培養(yǎng)基①上的生長速度最快，為（2.52±0.15）cm/d，且菌絲體濃密，顯著高于在其他培養(yǎng)基上的生長速度（P＜0.05）；在培養(yǎng)基⑥上的長勢最差，菌絲稀疏呈黃白色絨毛狀。故培養(yǎng)基①為L-1菌株的最適原種培養(yǎng)基。

表5 L-1菌株在不同原種培養(yǎng)基上的生長情況

T-1菌株在不同原種培養(yǎng)基上的生長情況見表6。由表6可以看出，T-1菌株在培養(yǎng)基③上長勢最好，菌絲濃密呈白色細(xì)絨狀，生長速度達(dá)（2.47±0.24）cm/d，長勢最好，菌絲濃；在培養(yǎng)基⑥上長勢最差，生長速度只有0.18 cm/d；培養(yǎng)基④上的菌絲體生長速度與培養(yǎng)基③相比無顯著性差異（P＜0.05），菌絲較密呈黃白色。故T-1菌株的最適原種培養(yǎng)基為培養(yǎng)基③，其次為培養(yǎng)基④。

表6 不同原種培養(yǎng)基上T-1菌株的生長情況

2.3 栽培試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)原種培養(yǎng)基的配方，配制栽培料栽培T-1菌株和L-1菌株。結(jié)果L-1菌株只在溝播覆膜栽培料上長出子實(shí)體，T-1菌株只在壟播不覆膜栽培料上長出子實(shí)體，在其他栽培料上均未形成子實(shí)體。具體的栽培試驗(yàn)結(jié)果見表7、表8和圖3、圖4。

可以看出，溝播覆膜時(shí)，L-1菌株的原基產(chǎn)生時(shí)間為128 d，產(chǎn)量為0.54 kg/m2，顯著高于其他栽培方式（P＜0.05）。除此之外，溝播的產(chǎn)量都顯著高于壟播，溝播不覆膜的產(chǎn)量是壟播不覆膜的2.6倍；覆膜之后的產(chǎn)量都顯著高于不覆膜產(chǎn)量，溝播覆膜的產(chǎn)量是溝播不覆膜的1.38倍。

溝播覆膜時(shí)，T-1菌株的原基產(chǎn)生時(shí)間為138 d，產(chǎn)量為0.43 kg/m2，顯著高于其他栽培方式（P＜0.05）。同L-1菌株一樣，T-1菌株溝播的產(chǎn)量要優(yōu)于壟播，覆膜后的產(chǎn)量要優(yōu)于不覆膜。

比較2個(gè)羊肚菌菌株在同種栽培方式的原基產(chǎn)生時(shí)間、產(chǎn)量，發(fā)現(xiàn)L-1菌株的原基產(chǎn)生時(shí)間要早于T-1菌株，產(chǎn)量也顯著高于T-1菌株。溝播覆膜栽培，L-1菌株的產(chǎn)量是T-1菌株的1.25倍。

表7 羊肚菌L-1菌株栽培試驗(yàn)結(jié)果

表8 T-1菌株栽培試驗(yàn)結(jié)果

3 小結(jié)與討論

當(dāng)前我國羊肚菌大田栽培主要包括以下6個(gè)環(huán)節(jié)：菌種制備、整地播種、外源營養(yǎng)袋處理（補(bǔ)料技術(shù)）、保育催菇、出菇管理和采收干制[14]。張亞等[13]基于多年的栽培實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，在現(xiàn)有的大田栽培技術(shù)體系下，開發(fā)出一種新的羊肚菌覆膜栽培技術(shù)，具有保濕、防澇、避光、抑制雜草、加快積溫、促進(jìn)出菇、控制“菌霜”（無性孢子）的過度生長、定向出菇、節(jié)約成本、增強(qiáng)栽培的靈活性等優(yōu)點(diǎn)。試驗(yàn)結(jié)果表明覆膜栽培可以有效提高L-1菌株和T-1菌株的產(chǎn)量，大大縮短了生產(chǎn)周期。黑色羊肚菌具有低溫耐受性、喜陰、喜濕、抗逆性差[15]特點(diǎn)，因而溝播相比壟播更有利于羊肚菌的出菇和生長，究其原因?yàn)閴艤舷啾扔趬疟乘指渥恪Ｍ鮽16]對(duì)粗腿羊肚菌、羊肚菌和尖頂羊肚菌的菌絲體和菌核的研究發(fā)現(xiàn)在加土的培養(yǎng)基中才能在土層的瓶壁上產(chǎn)生較大的菌核，說明土壤的團(tuán)粒結(jié)構(gòu)及貧瘠條件對(duì)產(chǎn)生大量菌核有重要影響。在進(jìn)行母種培養(yǎng)基的篩選試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)加土培養(yǎng)基和加富加土培養(yǎng)基同樣有大量菌核產(chǎn)生。菌核是羊肚菌子實(shí)體產(chǎn)生的重要階段，因此，有必要對(duì)菌核的形成與發(fā)育進(jìn)行進(jìn)一步的研究。此外在碳氮基礎(chǔ)培養(yǎng)基上供試兩個(gè)羊肚菌菌株始終未現(xiàn)菌核，但菌絲始終潔白健壯，是否所用氮源（尿素）對(duì)延緩其菌絲衰老有影響，仍需進(jìn)一步研究。