國(guó)產(chǎn)四環(huán)素片質(zhì)量分析

張瓊 張肖寧 肖宇 姜晶 婁志紅

(黑龍江省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)所，哈爾濱 150080)

四環(huán)素是從放線菌金色鏈霉菌的培養(yǎng)液中分離出來(lái)的抗菌物質(zhì)，屬?gòu)V譜抗生素，于1953年輝瑞公司開(kāi)發(fā)，我國(guó)于60年代初試制成功并投產(chǎn)。因其高效、廣譜、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)被廣泛用于革蘭陽(yáng)性菌、革蘭陰性菌、細(xì)胞內(nèi)支原體、衣原體和立克次體引起的感染性疾病治療。主要不良反應(yīng)為胃腸道反應(yīng)、肝臟毒性和對(duì)骨骼、牙組織損傷。

四環(huán)素和四環(huán)素的鹽酸鹽(即鹽酸四環(huán)素)均在市場(chǎng)廣泛應(yīng)用，四環(huán)素和四環(huán)素片現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)均收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)＜抗生素藥品第一分冊(cè)＞》，美國(guó)藥典(USP)40、英國(guó)藥典(BP)2017及歐洲藥典(EP)9.0僅收載四環(huán)素原料，制劑均未收載。鹽酸四環(huán)素及鹽酸四環(huán)素片在中國(guó)藥典(ChP)、USP40、BP2017均有收載。

四環(huán)素片為2017年國(guó)家藥品抽檢品種，共收集24個(gè)廠家、25個(gè)批準(zhǔn)文號(hào)、3種規(guī)格(0.05、0.125及0.25g)的200批樣品，其中生產(chǎn)企業(yè)抽取17批，經(jīng)營(yíng)單位181批，使用單位2批。

圍繞產(chǎn)品的安全性、有效性和可控性展開(kāi)探索性研究，并提出合理化建議。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(賽默飛U3000、Aglient1290及沃特世e2695)；電子天平(賽多利斯BP211D)；酸度計(jì)(瑞士Mettler Seven Multi S40K)；多功能微生物自動(dòng)測(cè)量分析儀(北京先驅(qū)威鋒技術(shù)開(kāi)發(fā)公司ZY-300IV)；鋼管自動(dòng)放置器(北京先驅(qū)威鋒技術(shù)開(kāi)發(fā)公司ZY-300G)；隔水式恒溫培養(yǎng)箱(上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司GRP-9270型)；脈動(dòng)真空滅菌器(山東新華醫(yī)療器械股份有限公司XG1-BMSD-0.36)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科技有限公司DHG-9245A)；真空干燥箱(上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司DZG-6020型)；生物安全柜(北京東聯(lián)哈爾濱儀器制造有限公司BSC-1360ⅡA2)。

4-差向四環(huán)素對(duì)照品(批號(hào)：130401-200209)、土霉素對(duì)照品(批號(hào)：130487-200703)、差向脫水四環(huán)素對(duì)照品(批號(hào)：130403-201205)、四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)：130306-201419)、鹽酸四環(huán)素對(duì)照品(批號(hào)：130488-201604)、鹽酸金霉素對(duì)照品(批號(hào)：130489-201403)和脫水四環(huán)素對(duì)照品(批號(hào)：130402-200203)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

四環(huán)素原輔料均為企業(yè)提供。甲醇、乙腈均為色譜級(jí)，硅藻土G、鹽酸、硫酸、三氯化鐵、乙二胺四醋酸二鈉、剛果紅、乙醇、氫氧化鈉、冰醋酸、硫酸、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉等試劑均為分析純；抗生素檢定用Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基(pH6.5～6.6)購(gòu)自北京陸橋生物有限公司。

效價(jià)用菌種：藤黃微球菌[CMCC(B)28001]由CMCC提供。

2 試驗(yàn)方法

2.1 法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)

按《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)＜抗生素藥品第一分冊(cè)＞》進(jìn)行法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)。

2.2 探索性研究

2.2.1 含量測(cè)定探索性研究

參考ChP2015中鹽酸四環(huán)素含量測(cè)定的液相方法，建立本品含量測(cè)定的方法，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，專屬性、回收率、重復(fù)性等各項(xiàng)指標(biāo)良好。

(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

流動(dòng)相的配制：乙酸銨溶液-乙腈(83:17，V/V)，乙酸銨溶液的配制：以0.15mol/L乙酸銨溶液-三乙胺-0.01mol/L乙二胺四醋酸二鈉溶液(100:1:10，V/V/V)，并用乙酸調(diào)節(jié)上述溶液pH值至8.5。采用280mn作為檢測(cè)波長(zhǎng)，并以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱。系統(tǒng)適用性溶液的配制：精密稱取鹽酸四環(huán)素對(duì)照品、土霉素對(duì)照品、鹽酸金霉素對(duì)照品、4-差向四環(huán)素對(duì)照品、脫水四環(huán)素對(duì)照品及差向脫水四環(huán)素對(duì)照品各適量，置量瓶中，加入適量0.01mol/L鹽酸溶解后，并使用上述鹽酸溶液稀釋至刻度，制成含約0.5mg/mL四環(huán)素溶液以及約含0.03mg/mL其他各雜質(zhì)對(duì)照品的混合溶液，搖勻，即得。精密量取該混合溶液10μL注入液相色譜儀，記錄的系統(tǒng)適用性色譜圖中四環(huán)素峰約在14分鐘出峰，其他雜質(zhì)對(duì)照品：4-差向四環(huán)素、土霉素、差向脫水四環(huán)素按序在四環(huán)素前出峰，金霉素對(duì)、脫水四環(huán)素在四環(huán)素后按序出峰。除金霉素峰與脫水四環(huán)素峰間的分離度應(yīng)大于1.0外，4-差向四環(huán)素峰、土霉素峰、差向脫水四環(huán)素峰、四環(huán)素峰、金霉素峰間的分離度均應(yīng)大于1.5。

(2)測(cè)定法

供試品溶液的制備：精密稱定本品10片，研細(xì)，混合均勻，精密稱取適量(約相當(dāng)于四環(huán)素0.25g)，置250mL量瓶中，加入適量0.01mol/L鹽酸溶解后，并使用上述鹽酸溶液稀釋至刻度，精密量取續(xù)濾液5mL，置50mL量瓶中，用上述鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得；對(duì)照品溶液的制備：精密稱取鹽酸四環(huán)素對(duì)照品適量，加上述鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成0.1mg/mL的四環(huán)素溶液，搖勻，即得。分別精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液10μL注人液相色譜儀，記錄色譜圖。

2.2.2 有關(guān)物質(zhì)探索性研究

供試品溶液制備(臨用新制或采用低溫進(jìn)樣器10℃進(jìn)樣)：取本品10片，研細(xì)，混合均勻，精密量取細(xì)粉適量(相當(dāng)于平均片重)，置適宜容量瓶?jī)?nèi)，加入適量0.01mol/L鹽酸溶解后，并使用上述鹽酸溶液稀釋至刻度，得1.0mg/mL的四環(huán)素溶液，取續(xù)濾液，搖勻，即得。對(duì)照溶液的制備：精密量取供試品溶液1mL，置100mL量瓶中，用上述鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。靈敏度溶液制備：精密量取對(duì)照溶液2mL，置50mL量瓶中，用上述鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件，精密量取靈敏度溶液10μL注入液相色譜儀，記錄的色譜圖中其主成分色譜峰(四環(huán)素)峰高的信噪比應(yīng)大于10。分別精密量取10μL的供試品溶液與對(duì)照溶液，注入液相色譜儀，并記錄2.5倍主成分峰保留時(shí)間的色譜圖。

2.2.3 水分測(cè)定探索性研究

參考USP40、BP2017中(鹽酸)四環(huán)素片干燥失重的測(cè)定方法，60℃減壓干燥3h，測(cè)定200批次樣品的減失重量。

2.2.4 藥物穩(wěn)定性探索性研究

參照中國(guó)藥典2015年版四部指導(dǎo)原則9001“原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則”，除去內(nèi)包裝，分別于高溫(60℃)、高濕(85%)條件下放置10d，于0、5和10d取樣，按照有關(guān)物質(zhì)探索性研究項(xiàng)下的色譜條件，考察溫度和濕度對(duì)藥物穩(wěn)定性的影響。

3 結(jié)果

3.1 法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)結(jié)果及發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題

24家生產(chǎn)企業(yè)抽取樣品的分布情況(表1)，法定檢驗(yàn)結(jié)果顯示合格率為100%，提示產(chǎn)品質(zhì)量總體尚可。其中部分企業(yè)崩解時(shí)限項(xiàng)和重量差異項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果存在顯著差異。

3.1.1 企業(yè)內(nèi)崩解時(shí)間(非包衣片)對(duì)比分析

200批樣品中共95批次為非包衣片，其中A企業(yè)抽取30批次，有26批次可在3min內(nèi)崩解，2批次崩解時(shí)間超過(guò)5min，2批次崩解時(shí)間超過(guò)10min，對(duì)其進(jìn)行方差分析，結(jié)果表明企業(yè)間崩解時(shí)限存在顯著差異(P=0.376)，提示該生產(chǎn)企業(yè)關(guān)注產(chǎn)品批間穩(wěn)定性。

3.1.2 企業(yè)內(nèi)崩解時(shí)間(糖衣片)對(duì)比分析

表1 樣品分布情況表Tab.1 Sample distribution table

105批糖衣片中，I企業(yè)樣品平均崩解時(shí)間為16min，SD最大為9.1，同一批號(hào)(161202)不同抽樣地點(diǎn)的崩解時(shí)間均值分別為40和15min，分析原因?yàn)槌闃拥攸c(diǎn)濕度(相對(duì)濕度分別為69%和53%)影響崩解時(shí)間，提示企業(yè)關(guān)注包裝材料的密封性或在包裝內(nèi)部適當(dāng)添加干燥劑。由于四環(huán)素片貯存條件為干燥，提示經(jīng)營(yíng)單位應(yīng)嚴(yán)格控制貯存條件，避免因貯存不當(dāng)引起藥品安全性和有效性風(fēng)險(xiǎn)。

3.1.3 重量差異企業(yè)內(nèi)對(duì)比分析

對(duì)抽樣量超過(guò)20批次的A企業(yè)進(jìn)行企業(yè)內(nèi)重量差異方差分析，結(jié)果表明其重量存在顯著性差異(P=0.016)，平均片重最大為0.3799g，最小為0.3221g，相對(duì)平均偏差為8.2%，表明該企業(yè)批間生產(chǎn)工藝不穩(wěn)定。

3.1.4 法定檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題

(1)薄層鑒別顯示200批樣品中均有相關(guān)雜質(zhì)斑點(diǎn)檢出?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中僅原料藥采用薄層色譜法控制了4-差向四環(huán)素一個(gè)特定雜質(zhì)，缺少其他特定雜質(zhì)的限度要求，而四環(huán)素片標(biāo)準(zhǔn)未設(shè)置有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)，不能有效控制產(chǎn)品在生產(chǎn)、貯存和運(yùn)輸過(guò)程產(chǎn)生的雜質(zhì)。項(xiàng)目設(shè)置存在缺陷。

(2)采用微生物檢定法進(jìn)行四環(huán)素片含量測(cè)定，可直觀反映全部生物活性物質(zhì)的整體抑菌活性，但不能有效區(qū)別產(chǎn)品中其他相關(guān)雜質(zhì)對(duì)含量測(cè)定的影響，檢驗(yàn)方法有一定局限性，可考慮采用HPLC法對(duì)含量測(cè)定進(jìn)行有效控制。

(3)15%的樣品包裝規(guī)格為1000片/瓶，對(duì)于人用藥物來(lái)說(shuō)，存在包裝合理性問(wèn)題。

(4)崩解時(shí)限和重量差異檢驗(yàn)結(jié)果顯示個(gè)別廠家批間生產(chǎn)工藝穩(wěn)定性較差，有待進(jìn)一步提高。

3.2 探索性研究結(jié)果

針對(duì)法定檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題，圍繞影響產(chǎn)品的安全性、有效性及可控性3方面展開(kāi)探索性研究。

3.2.1 含量測(cè)定

HPLC含量測(cè)定限度未做修訂，含鹽酸四環(huán)素(C22H24N2O8·HCl)應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%～110.0%。按擬定限度判斷，本次抽取的200批樣品中有1批次含量為87.1%，不符合規(guī)定。不合格率為0.5%，合格率99.5%。

24家企業(yè)HPLC含量測(cè)定95%置信區(qū)間圖(圖1)顯示，在90.0%～105.0%范圍內(nèi)，主要集中在95.0%～102.0%區(qū)間內(nèi)，不同廠家間樣品含量測(cè)定結(jié)果差異較大，200批含量測(cè)定結(jié)果有1批低于擬定限度90.0%。從HPLC含量與微生物效價(jià)法含量均值對(duì)比圖(圖2)可知，微生物效價(jià)法測(cè)定結(jié)果絕大部分較HPLC法測(cè)定結(jié)果偏高，差值最大可達(dá)12.9%。說(shuō)明藥品中除四環(huán)素主成分有生物活性外，其他相關(guān)雜質(zhì)也具有一定生物活性，以生物活性的加和反映在效價(jià)測(cè)定，則其結(jié)果較以測(cè)定四環(huán)素主成分含量的HPLC法結(jié)果偏高。

圖1 HPLC含量測(cè)定95%置信區(qū)間圖Fig.1 The determination 95% con fi dence interval chart of the content of tetracycline tables (HPLC)

圖2 HPLC含量與微生物效價(jià)法含量均值對(duì)比圖Fig.2 The measurement results comparison of the average content of tetracycline tables between HPLC method and determination method

雖然四環(huán)素是單一組分物質(zhì)，但是在其發(fā)酵過(guò)程中同時(shí)含有土霉素、金霉素、4-差向四環(huán)素、脫水四環(huán)素、差向脫水四環(huán)素等多種活性成分，而且在四環(huán)素片生產(chǎn)、貯存及運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)，進(jìn)一步產(chǎn)生相關(guān)雜質(zhì)，這些物質(zhì)之間存在拮抗、協(xié)同等多種機(jī)制的相互作用，影響藥品的穩(wěn)定性，所以采用HPLC法，將上述物質(zhì)進(jìn)行分離，從而提供專屬性更強(qiáng)的檢驗(yàn)方法，在四環(huán)素質(zhì)控中用于定量分析同時(shí)，也可用HPLC法替代原標(biāo)準(zhǔn)中專屬性差的TLC法鑒別。

因此采用HPLC法替代微生物效價(jià)法可以更好控制藥物質(zhì)量，保障產(chǎn)品安全、有效。

3.2.2 有關(guān)物質(zhì)

參照鹽酸四環(huán)素及其片劑標(biāo)準(zhǔn)擬定限度為供試品溶液。色譜圖中如有雜質(zhì)峰，如：土霉素、4-差向四環(huán)素、鹽酸金霉素、脫水四環(huán)素、差向脫水四環(huán)素按校正后的峰面積(分別乘以校正因子1.0、1.42、1.39、0.48和0.62)，其結(jié)果分別不得大于對(duì)照溶液主峰面積的0.5倍、8.0倍、0.5倍、1.0倍、1.0倍，其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積，其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積的3.0倍，供試品色譜圖見(jiàn)圖3。

3.2.3 有關(guān)物質(zhì)結(jié)果

200批樣品有關(guān)物質(zhì)結(jié)果表明：4-差向四環(huán)素含量在3.02%～18.23%，不合格率為43.0%；土霉素含量在0.16%～1.11%范圍內(nèi)，不合格率為18.0%；脫水四環(huán)素含量為0.08%～3.92%，不合格率為10.0%；其他單個(gè)最大雜質(zhì)含量在0.07%～1.85%，不合格率為5.5%；其他雜質(zhì)總和含量在0.13%～4.52%，不合格率為3.0%；差向脫水四環(huán)素和金霉素分別為0.02%～0.47%和0.03%～0.17%，不合格率為0，總體不合格批次為98批，總不合格率為49%。

HPLC法測(cè)定四環(huán)素含量不合格批次有關(guān)物質(zhì)結(jié)果顯示，其特定雜質(zhì)中4-差向四環(huán)素、差向脫水四環(huán)素、土霉素分別為10.77%、0.70%、0.26%，其他單個(gè)最大雜質(zhì)含量為1.85%，其他雜質(zhì)總和含量為4.00%。雜質(zhì)含量偏高是影響其含量測(cè)定結(jié)果偏低的主要因素。

(1)企業(yè)間4-差向四環(huán)素雜質(zhì)分析：該項(xiàng)不合格樣品86批次，涉及22家生產(chǎn)企業(yè)(其中18家原料來(lái)源為N企業(yè))，Q和C企業(yè)不合格率較高，分別為75.0%和63.6%，含量分別在8.22%～12.93%和8.23%～10.16%范圍內(nèi)，提示企業(yè)應(yīng)嚴(yán)格控制原料質(zhì)量，關(guān)注生產(chǎn)工藝、運(yùn)輸及貯存中影響產(chǎn)品穩(wěn)定性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)；A企業(yè)有3批樣品(批號(hào)：160607、160511和170207)超出擬定限度2倍，分別為16.44%、17.06%和18.23%，提示該企業(yè)生產(chǎn)工藝不穩(wěn)定。

圖3 有關(guān)物質(zhì)供試品溶液(A企業(yè)，批號(hào)：161206)色譜圖Fig.3 The chromatogram of related substances of the sample solution (A company，batch number: 161206)

(2)企業(yè)間脫水四環(huán)素雜質(zhì)分析：該項(xiàng)不合格樣品共20批次，來(lái)自6家企業(yè)，其中A企業(yè)的15批次樣品超過(guò)擬定限度2倍。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，pH＜2和高溫條件下，四環(huán)素均易發(fā)生脫水反應(yīng)，產(chǎn)生脫水四環(huán)素，提示該企業(yè)應(yīng)關(guān)注生產(chǎn)工藝、運(yùn)輸及貯存中溫度和pH值等關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

(3)企業(yè)間土霉素、金霉素、差向脫水四環(huán)素等雜質(zhì)分析：土霉素不合格樣品共36批次，涉及9家企業(yè)，其中A企業(yè)的17批次樣品超過(guò)擬定限度，且1批超出限度2倍。因土霉素來(lái)源于原料藥發(fā)酵環(huán)節(jié)，提示上述企業(yè)從嚴(yán)制定原料藥的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)，提高產(chǎn)品質(zhì)量。

金霉素不合格率為0，差向脫水四環(huán)素不合格率為0，但發(fā)現(xiàn)J企業(yè)不同抽樣地點(diǎn)的同一批號(hào)(161202)樣品差向脫水四環(huán)素含量分別為0.41%和0.03%，從抽樣信息分析，前者抽樣地點(diǎn)濕度較大(相對(duì)濕度69%)，后者抽樣地點(diǎn)濕度較低(相對(duì)濕度53%)，結(jié)合法定檢驗(yàn)中二者崩解時(shí)間差異較大，再次提示生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)關(guān)注包裝材料的密封性或在包裝內(nèi)部適當(dāng)添加干燥劑，經(jīng)營(yíng)單位和使用機(jī)構(gòu)應(yīng)嚴(yán)格控制運(yùn)輸與貯存的濕度，避免產(chǎn)品安全性和有效性風(fēng)險(xiǎn)。

(4)其他單個(gè)雜質(zhì)分析：其他最大單個(gè)雜質(zhì)不合格樣品主要來(lái)源于A企業(yè)，含量在1.07%～1.17%；其他雜質(zhì)總和不合格樣品1批次，為I企業(yè)生產(chǎn)。提示上述企業(yè)關(guān)注原料質(zhì)量和提高生產(chǎn)工藝穩(wěn)定性。

總體來(lái)看，影響產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)不合格的主要因素依次為4-差向四環(huán)素、土霉素、脫水四環(huán)素、其他單個(gè)最大雜質(zhì)，雜質(zhì)主要來(lái)源為四環(huán)素原料，但在制劑的生產(chǎn)、運(yùn)輸及貯存過(guò)程中，水分關(guān)鍵因素對(duì)產(chǎn)品穩(wěn)定性產(chǎn)生重要影響，建議企業(yè)選擇優(yōu)質(zhì)原料藥，密切關(guān)注各環(huán)節(jié)的水分/濕度參數(shù)，確保產(chǎn)品質(zhì)量安全、有效。

3.2.4 水分相關(guān)性探索性研究

結(jié)果顯示大部分企業(yè)干燥失重均值在10.23%～13.69%之間，企業(yè)內(nèi)部差異較?。坏珎€(gè)別企業(yè)差異較大：(1)A和F兩個(gè)廠家企業(yè)內(nèi)部差異顯著，尤其是A企業(yè)干燥失重范圍在2.62%～17.09%，5批樣品超出+SD(標(biāo)準(zhǔn)差)，6批樣品超出-SD，其中2批樣品超出-2SD，提示企業(yè)應(yīng)嚴(yán)格控制生產(chǎn)工藝中與水分相關(guān)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。(2)F企業(yè)的8批樣品干燥失重結(jié)果差異顯著，3批非包衣片均值為16.20%，5批糖衣均值為8.75%。從生產(chǎn)批號(hào)來(lái)看，糖衣片均為2016年5—10月生產(chǎn)，非包衣片為2017年5月生產(chǎn)，提示廠家密切關(guān)注生產(chǎn)工藝穩(wěn)定性，嚴(yán)格控制非包衣片水分含量。

3.2.5 相關(guān)性結(jié)果與分析

將差異顯著的A企業(yè)和B企業(yè)的干燥失重結(jié)果與有關(guān)物質(zhì)、HPLC含量測(cè)定結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析(圖5～6)，結(jié)果顯示水分與4-差向四環(huán)素、其他單個(gè)最大雜質(zhì)及其他雜質(zhì)總和呈正相關(guān)；脫水四環(huán)素、差向脫水四環(huán)素及HPLC含量測(cè)定與水分呈顯著負(fù)相關(guān)。

圖5 A企業(yè)相關(guān)性分析Fig.5 The correlation analysis of A company

圖6 B企業(yè)相關(guān)性分析Fig.6 The correlation analysis of B company

3.2.6 藥物穩(wěn)定性研究結(jié)果

試驗(yàn)表明，高溫、高濕條件下，均可促進(jìn)四環(huán)素產(chǎn)生4-差向四環(huán)素；同時(shí)高溫促進(jìn)四環(huán)素生成脫水四環(huán)素，4-差向四環(huán)素形成差向脫水四環(huán)素。然而，在高溫或高濕的穩(wěn)定性試驗(yàn)中，部分企業(yè)出現(xiàn)了4-差向四環(huán)素、差向脫水四環(huán)素和脫水四環(huán)素先增加而后減少的現(xiàn)象，推測(cè)為四環(huán)素及其特定雜質(zhì)在一定條件下發(fā)生了相互轉(zhuǎn)化。

差向脫水四環(huán)素和脫水四環(huán)素是引起范康尼(fanconi)綜合征(患者出現(xiàn)嚴(yán)重惡心、嘔吐、糖尿、蛋白尿及由酸中毒引起的腎水腫等)的主要因素。因此，四環(huán)素及其雜質(zhì)的轉(zhuǎn)化相互轉(zhuǎn)化關(guān)系和影響因素對(duì)產(chǎn)品安全性和有效性至關(guān)重要。

4 討論

影響四環(huán)素質(zhì)量的主要因素：(1)現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不完善：與現(xiàn)行鹽酸四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)比較，缺少有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)，含量測(cè)定和薄層鑒別方法專屬性差，無(wú)法滿足目前對(duì)藥品質(zhì)量控制要求，存在“老品種”標(biāo)準(zhǔn)滯后問(wèn)題，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)亟待提高。(2)處方工藝：個(gè)別廠家崩解時(shí)間、重量差異、有關(guān)物質(zhì)及水分結(jié)果存在顯著性差異，表明批間生產(chǎn)工藝穩(wěn)定性較差；部分企業(yè)同一批號(hào)不同抽樣地點(diǎn)的樣品，崩解時(shí)間、有關(guān)物質(zhì)及水分含量差異較大，分析生產(chǎn)企業(yè)內(nèi)包裝密封性不好及經(jīng)營(yíng)、使用單位存儲(chǔ)不當(dāng)。(3)原料：四環(huán)素原料的含量和有關(guān)物質(zhì)直接影響其制劑的質(zhì)量。制劑企業(yè)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)原料質(zhì)量的控制，按鹽酸四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)從嚴(yán)制定原料內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)控產(chǎn)品質(zhì)量，從安全、有效及可控性方面提高產(chǎn)品質(zhì)量。

影響本品質(zhì)量的次要因素：(1)部分企業(yè)生產(chǎn)質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理意識(shí)不足，過(guò)分依賴法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，對(duì)“質(zhì)量源于生產(chǎn)，更源于設(shè)計(jì)”的理念意識(shí)薄弱，建議自主開(kāi)展針對(duì)四環(huán)素片的研究，加強(qiáng)生產(chǎn)工藝中各個(gè)環(huán)節(jié)質(zhì)控要求，促進(jìn)生產(chǎn)工藝日趨成熟、穩(wěn)定，減少因崩解時(shí)限、重量差異不均一穩(wěn)定帶來(lái)的臨床使用風(fēng)險(xiǎn)。(2)包裝規(guī)格合理性：1000片/瓶的包裝規(guī)格對(duì)于人用藥物來(lái)說(shuō)，存在包裝合理性問(wèn)題。

根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果并結(jié)《中國(guó)藥典2015年版二部中鹽酸四環(huán)素原料和制劑標(biāo)準(zhǔn)，從嚴(yán)控制產(chǎn)品質(zhì)量，參照USP40、BP2017、中國(guó)藥典鹽酸四環(huán)素片及中國(guó)藥典2015年版二部鹽酸四環(huán)素原料有關(guān)物質(zhì)限度(表2)，結(jié)合探索性研究檢驗(yàn)結(jié)果，擬定有關(guān)物質(zhì)限度見(jiàn)本文3.2.2項(xiàng)。

表2 有關(guān)物質(zhì)限度比較Tab.2 The measurement results comparision of the limit of related substances

4-差向四環(huán)素、脫水四環(huán)素及差向脫水四環(huán)素與中國(guó)藥典鹽酸四環(huán)素片一致；由于土霉素與金霉素來(lái)源于原料發(fā)酵環(huán)節(jié)，因此限度與鹽酸四環(huán)素保持一致；據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，四環(huán)素堿較鹽酸四環(huán)素穩(wěn)定性差，因此結(jié)合檢驗(yàn)結(jié)果，適當(dāng)放寬其他單個(gè)最大雜質(zhì)和其他雜質(zhì)總和限度。