40% 喹草酮·異丙甲草胺懸浮乳劑的反相高效液相色譜測定

王二瓊，陳 飛，張維博

（安徽省化工研究院，安徽合肥230041）

喹草酮是由我國率先創(chuàng)制研發(fā)的HPPD 類除草劑，其作用機理是通過抑制植物HPPD 的活性，影響植物體內(nèi)對羥基苯基丙酮酸轉化為尿黑酸的過程，進而抑制雜草體內(nèi)的光合作用，導致雜草出現(xiàn)白化癥狀而死亡。喹草酮在高粱上的除草效果比較顯著[1]。異丙甲草胺屬于氯乙酰胺類芽前除草劑，作用機制主要是通過幼芽吸收藥物，抑制發(fā)芽種子的蛋白質(zhì)合成，然后影響膽堿滲入磷脂，干擾卵磷脂形成，最終破壞幼芽與根的生長。異丙甲草胺對大豆、花生、玉米、馬鈴薯等闊葉作物有選擇性，是防除禾本科雜草的有效藥劑[2-3]。40% 喹草酮·異丙甲草胺懸浮乳劑是一種同時兼顧了喹草酮和異丙甲草胺兩種有效成分的理化特性，兼具懸浮劑和水乳劑兩種劑型特征的優(yōu)良制劑，能同時防除闊葉雜草和禾本科雜草。

本文采用反相高效液相色譜法對喹草酮和異丙甲草胺懸浮乳劑中有效成分同時進行分析，優(yōu)化設計操作條件，進行準確度、精密度測試，以期達到操作簡便、快速、準確的目的，為今后的產(chǎn)品質(zhì)量控制提供保障。

1 實驗部分

試樣用甲醇溶解，以甲醇-水為流動相，用Agilent TC-C18（2）分析柱，在237 nm 檢測波長下，對試樣中的喹草酮和異丙甲草胺同時進行反相高效液相色譜分離和測定，最后外標法定量。

1.1 試劑與儀器

甲醇，色譜純；蒸餾水，新蒸三次；磷酸，分析純；喹草酮≥98% ；異丙甲草胺≥98% 。

高效液相色譜儀，Agilent 1220；微量進樣針，50 μL；抽濾器，濾膜孔徑0.45 μm；超聲波清洗儀；高速離心機。

1.2 操作條件

色譜柱：Agilent TC-C18（2），250 mm×4.6 mm 不銹鋼柱，粒徑：5 μm；柱溫：室溫（溫差上下變化幅度不超過2℃）；流動相：甲醇+水+磷酸=88+12+0.1（V/V），經(jīng)0.45 μm 孔徑的濾膜過濾，并在超聲波浴槽中超聲脫氣15 min；檢測波長：237 nm，進樣體積：20μL，流速：1 mL/min；保留時間：喹草酮約3.69 min；異丙甲草胺約4.88 min。

喹草酮和異丙甲草胺典型的色譜圖見圖1。上述液相色譜條件系典型操作參數(shù)，不同儀器可根據(jù)實際情況作適當調(diào)整，以獲得最佳效果。

圖1 40% 喹草酮·異丙甲草胺懸浮乳劑的HPLC 譜圖

1.3 測定步驟

1.3.1 標準溶液的配制

分別稱取喹草酮標樣0.01 g（準確至0.000 2 g）、異丙甲草胺標樣0.07 g（準確至0.000 2 g）于50 mL 容量瓶中，加入適量甲醇溶解，超聲10 min 后甲醇定容，該溶液為標準溶液。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取適量（準確至0.000 2 g）的樣品置于50 mL 容量瓶中，加入適量甲醇溶解，超聲10 min 后甲醇定容，該溶液為試樣溶液，高速離心后待檢測。

1.3.3 測定

在上述條件下，待色譜儀器基線穩(wěn)定后連續(xù)注入數(shù)針標準溶液，直至相鄰兩針的峰面積相對變化小于1.5% 時，按照標準溶液、試樣溶液、試樣溶液、標準溶液的順序進行分析測定。

1.3.4 計算

將測得的兩針試樣溶液和試樣溶液前后兩針標準溶液中的喹草酮和異丙甲草胺的峰面積進行平均。試樣中喹草酮和異丙甲草胺的質(zhì)量分數(shù)X（% ）按下式計算：X= (A2×m1×P) / (A1×m2)

式中：A1—標準溶液中喹草酮和異丙甲草胺的峰面積平均值；A2—試樣溶液中喹草酮和異丙甲草胺的峰面積平均值；m1—喹草酮和異丙甲草胺標樣的質(zhì)量，g；m2—試樣的質(zhì)量，g；P—標樣中喹草酮和異丙甲草胺的質(zhì)量百分數(shù)，% 。

2 結果與討論

2.1 流動相的選擇

在分析過程中，為了使喹草酮、異丙甲草胺和雜質(zhì)得到較好的分離，經(jīng)多次不同的流動相配比實驗，最終確定了以甲醇+ 水+ 磷酸=88+12+0.1（V/V）的混合液為流動相。選擇該流動相檢測時，樣品中有效成分出峰時間較為適中，峰形理想,且有效峰與雜質(zhì)峰能夠得到較好的分離。

2.2 檢測波長的選擇

通過紫外分光光度計全波長掃描，一定濃度的喹草酮和異丙甲草胺標準溶液在237 nm 處有較大吸收。因此我們選擇237 nm 作為本方法的檢測波長，既可以同時檢測出喹草酮和異丙甲草胺吸收峰，又能避免樣品中雜質(zhì)峰的干擾。

2.3 線性關系的測定

稱取適量喹草酮和異丙甲草胺標準品（準確至0.000 2 g）于50 mL 容量瓶中，甲醇溶解，超聲定容，作為喹草酮和異丙甲草胺母液。然后用移液管分別移取該母液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、8 mL 于7 個10 mL 容量瓶中，加入適量甲醇，超聲定容。按上述的色譜操作條件進行分析測定，以喹草酮和異丙甲草胺溶液的濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標作圖，得到相應的線性關系曲線，其線性方程分別為Y=6.743 03E8X-6.443 27E5，Y=7.025 91E8X-1.968 35E6，相關系數(shù)分別為0.999 8、0.999 7（表1、圖2 和圖3）。

圖2 喹草酮線性關系曲線

圖3 異丙甲草胺線性關系曲線

表1 喹草酮和異丙甲草胺線性關系數(shù)據(jù)表

表2 喹草酮和異丙甲草胺精密度試驗測定結果

表3 喹草酮和異丙甲草胺準確度試驗測定結果

2.4 精密度的測定

取上述2.3.2 配制好的試樣溶液，在上述色譜操作條件下進行5 次重復測定，計算求得喹草酮和異丙甲草胺的標準偏差分別為0.017、0.051；變異系數(shù)分別為0.34% 、0.14% ；樣品中有效成分的平均含量分別為5.03% 、35.36% （表2）。

2.5 準確度（回收率）的測定

已知準確含量的試樣中加入一定量的喹草酮和異丙甲草胺標準品，平行配制5 份試樣，然后在上述色譜操作條件下進行檢測，測得喹草酮和異丙甲草胺平均回收率分別為99.40% 、99.33% （表3）。

3 結論

本試驗首次建立了一種能夠同時檢測喹草酮和異丙甲草胺有效成分的分析方法。試驗結果表明，該分析方法準確度、精密度高，線性關系好，操作簡單快捷，為40% 喹草酮·異丙甲草胺懸浮乳劑的產(chǎn)品質(zhì)量提供了可靠保障。