雙甲脒和溴氰蟲酰胺防治柑橘木虱不同配方的篩選和田間藥效試驗

孫 楊，謝秀挺，秦文婧，黃水金*

(1.江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，江西南昌 330200；2.贛州市柑桔科學(xué)研究所，江西贛州 341000)

柑橘黃龍病(CitrusHuanglongbing，HLB)是最具毀滅性的一種柑橘病害，嚴(yán)重威脅柑橘產(chǎn)業(yè)的生存和發(fā)展。柑橘木虱(DiaphorinacitriKuwayama) 屬半翅目木虱科，為柑橘黃龍病(HLB)唯一的自然蟲媒，是柑橘生產(chǎn)中最重要的害蟲[1-3]。柑橘木虱成蟲具翅能飛行，雌成蟲繁殖能力強(qiáng)，一般平均產(chǎn)卵量為170～200粒，最多260粒，卵孵化率在85.7%～95.8%[4]。因此，對柑橘木虱成蟲的防治尤為重要。

目前，控制柑橘黃龍病發(fā)生和傳播的最重要方法是化學(xué)防治，即利用殺蟲劑控制木虱的種群數(shù)量[5-6]。然而，殺蟲劑的不合理應(yīng)用，如單一品種或相同類型的殺蟲劑連續(xù)、大量使用，導(dǎo)致柑橘木虱抗藥性的產(chǎn)生和發(fā)展。鄧明學(xué)等[7]研究發(fā)現(xiàn)柑橘木虱對毒死蜱產(chǎn)生了8.8 倍的抗藥性，Naeem 等[8]研究發(fā)現(xiàn)印度和巴基斯坦地區(qū)柑橘木虱對吡蟲啉的抗藥性高達(dá)200倍以上。柑橘木虱對常規(guī)藥劑的抗藥性日趨嚴(yán)重[9]。

在尚無可替代高效藥劑的現(xiàn)狀下，為了充分發(fā)揮現(xiàn)有藥劑的作用，提高殺蟲效果，對其進(jìn)行復(fù)配，尋找最優(yōu)配方是可行性較高的選擇，探索成本低，可操作性強(qiáng)。筆者以雙甲脒和溴氰蟲酰胺為對象，通過盆栽試驗、田間試驗，篩選出對柑橘木虱防治效果較好的配比，以期為柑橘木虱的化學(xué)防治提供新策略。

1 材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試藥劑。20%雙甲脒 EC由濰坊市凱邦農(nóng)業(yè)科技有限公司提供(原產(chǎn)自愛利思達(dá)生命科學(xué)株式會社)，10%溴氰蟲酰胺 SC由上海綠澤生物科技有限公司提供(原產(chǎn)自杜邦公司)。

1.1.2供試蟲源與植株。藥劑配方篩選試驗于2016年7月26日至9月22日在贛州市柑橘科學(xué)研究所網(wǎng)室內(nèi)進(jìn)行。供試柑橘木虱成蟲、若蟲、卵等全部來源于網(wǎng)室內(nèi)常年飼養(yǎng)的未經(jīng)藥劑處理的敏感品系。供試植株為新發(fā)嫩梢的九里香或柑橘幼苗。田間藥效試驗于2017年在柑橘研究所附近農(nóng)戶家柑橘園中進(jìn)行。供試植株為4年生柑橘，蟲源為自然發(fā)生。

1.2試驗方法

1.2.1配方篩選試驗 。

(1)速效性。20%雙甲脒 EC和 10%溴氰蟲酰胺 SC的不同配比設(shè)計見表1。將單株帶有新發(fā)嫩梢的九里香或柑橘幼苗倒置、浸入藥液中5～10 s后取出，自然晾干后移入紗網(wǎng)籠中。隨后，將蟲齡4～8日齡的木虱成蟲接入紗網(wǎng)籠。每個藥劑配方處理設(shè)置3次重復(fù)，每個重復(fù)40～50頭；同時設(shè)置空白對照。紗網(wǎng)籠置于室外，使試蟲與植株均處于自然狀態(tài)，并在接蟲后第1、3和7天統(tǒng)計死亡率。

(2)持效性。在速效性試驗中，選擇接蟲后第3天木虱成蟲校正死亡率在95%以上的配方作為進(jìn)一步研究對象。根據(jù)選出的配方，使用相同的方法處理幼苗，在藥劑處理后第8天接入木虱成蟲(數(shù)量、蟲齡與速效性試驗相同)，每個藥劑配方處理設(shè)置3次重復(fù)。接蟲后第1、3、7和15天統(tǒng)計死亡率。

1.2.2配方對若蟲的防治。選擇“1.2.1”中均表現(xiàn)優(yōu)良速效性(藥后3 d矯正死亡率≥95%)和持效性(藥后15 d矯正死亡率≥90%)的配方組合作為進(jìn)一步研究對象。將無藥物污染帶嫩梢的植株幼苗移入紗網(wǎng)籠，同時接入大量木虱成蟲待其產(chǎn)卵，當(dāng)成蟲產(chǎn)卵2 d后清除籠中所有成蟲。若蟲生長至3齡以上時可進(jìn)行藥效試驗。采用電動噴霧器(衛(wèi)士牌WS-16型背負(fù)式手動噴霧器，單個空芯圓錐霧噴頭，壓力為0.2～0.4 MPa，流量0.65 ～ 0.88 L/min)對帶蟲幼苗充分噴霧至葉片滴水為止。每個藥劑配方處理設(shè)置3次重復(fù)，每個重復(fù)高齡若蟲數(shù)在50頭以上。室外觀察，并于藥后1、3和7 d統(tǒng)計死亡率。

1.2.3配方對卵的防治。選擇“1.2.1”中均表現(xiàn)優(yōu)良速效性和持效性的配方組合作為進(jìn)一步研究對象。將無藥物污染帶嫩梢的植株幼苗移入紗網(wǎng)籠，同時接入大量木虱成蟲待其產(chǎn)卵。當(dāng)成蟲產(chǎn)卵2 d后清除籠中所有成蟲，然后鏡檢統(tǒng)計葉片上的卵粒數(shù)量。每個藥劑配方處理設(shè)置3次重復(fù)，每個重復(fù)卵粒數(shù)在100粒以上。將帶卵幼苗倒置浸入藥液中5～10 s后取出，自然晾干后放入紗網(wǎng)籠中。室外觀察，藥后第2、3、5天統(tǒng)計卵粒的死亡率或孵化率。

1.2.4配方的田間防效。選擇“1.2.1”中均表現(xiàn)優(yōu)良速效性和持效性的配方組合進(jìn)行田間防效試驗。2017年8月17日至9月7日在柑橘研究所附近農(nóng)戶家柑橘園中選擇4年生柑橘樹進(jìn)行試驗。每個藥劑處理3次重復(fù)，每個重復(fù)至少2棵柑橘樹以上，柑橘木虱成蟲數(shù)在50頭以上；均勻噴霧，直至藥液少量下滴。8月17日調(diào)查基數(shù)，8月18日進(jìn)行噴霧，此后分別于第1、3、10、15和20天進(jìn)行調(diào)查，統(tǒng)計死亡率，并換算防效。

矯正死亡率= (處理死亡率-對照死亡率)/(100-對照死亡率)×100%

防效=[1-(處理區(qū)藥后活蟲數(shù)×對照區(qū)藥前活蟲數(shù))/(處理區(qū)藥前活蟲數(shù)×對照區(qū)藥后活蟲數(shù))]×100%

1.3數(shù)據(jù)處理試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，樣本間采用單因素方差分析中的Duncan`s新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1速效性配方的篩選連同單劑在內(nèi)，對8個不同比例的配方進(jìn)行試驗。由表1可知，使用單劑的情況下，無論使用20%雙甲脒 EC還是10%溴氰蟲酰胺 SC，藥后第1、3和7天的矯正死亡率均未達(dá)到95%以上。使用有效濃度134.00 mg/kg的雙甲脒進(jìn)行復(fù)配時，溴氰蟲酰胺在高(0.71)、中(0.48)、低(0.35)3種配比下，藥后3 d的死亡率均在99%以上；經(jīng)計算，矯正死亡率分別為100.00%、99.30%和99.22%，藥后7 d矯正死亡率均為100.00%。

當(dāng)雙甲脒的有效濃度降為100.00 mg/kg時，溴氰蟲酰胺的實際濃度梯度仍為高(95.00 mg/kg)、中(63.65 mg/kg)、低(47.50 mg/kg)的情況下，1∶0.95和1∶0.64這2個配比的3 d矯正死亡率在95%以上，分別為96.34%和96.31。根據(jù)速效性原則，1∶0.71、1∶0.48、1∶0.35、1∶0.95和1∶0.64這5個配比為進(jìn)一步研究持效性的對象。

表1 2種藥劑不同配比下柑橘木虱成蟲的速效性

2.2持效性配方的篩選植株經(jīng)藥劑處理后8 d再接蟲進(jìn)行試驗。由表2可知，篩選出的5個配方中，1∶0.71和1∶0.48這2個處理的15 d矯死亡率均大于90%，分別為94.92%和91.48%。在低濃度的雙甲脒處理中，配比為1∶0.95的試驗組15 d矯正死亡率已下降為88.55%，1∶0.64試驗組甚至下降至72.30%。由此可知，在20%雙甲脒 EC 有效濃度為134.00 mg/kg的情況下，1∶0.71和1∶0.48這2個處理兼具速效性和持效性。

2.3配方對柑橘木虱若蟲的防治效果將篩選出兼具速效性和持續(xù)性的配方做進(jìn)一步研究，檢測其對若蟲的防治效果。由表3可知，1∶0.71的處理藥后第1天的矯正死亡率達(dá)96.02%，隨后逐漸上升，第7天為100.00%。在1∶0.48配比處理中，藥后1、3和7 d的矯正死亡率分別為87.42%、89.21和95.31%。雖然該試驗的統(tǒng)計時間僅為藥后7 d，但從數(shù)據(jù)的增長趨勢看，這2個配比組合均能在若蟲期達(dá)到有效控制的目的。

表2 2種藥劑不同配比下柑橘木虱成蟲的持效性

表3 2種藥劑不同配比對柑橘木虱若蟲的防治效果

2.4配方對柑橘木虱卵的防治效果由表4可知，藥后5 d 2種配方處理卵粒的孵化率達(dá)90%以上。因此，無論與對照在統(tǒng)計上是否有差異，在生產(chǎn)實踐中該2種配方均無有效滅卵的效果。

2.5田間防效為進(jìn)一步檢驗2種配方的應(yīng)用效果，在田間進(jìn)行了藥效試驗。從表5可以看出，2種配方在藥后第3天均表現(xiàn)出100%的滅殺效果；表現(xiàn)出極高的速效性，這與篩選試驗結(jié)果一致。藥后10 d仍保持高水平防效，分別為97.45%和98.51%。但15 d防效均下降至90%以下，分別為86.68%和85.03%，與篩選試驗結(jié)果相比，持效性略下降。第20天，2種配方的防效相近，且與15 d持平，并未表現(xiàn)出下降趨勢。統(tǒng)計分析顯示，這2種配方在藥后不同時間的防效無顯著差異。

表42種藥劑不同配比對柑橘木虱卵的防治效果

Table4Controleffectofdifferentcomplexformulationsofamitrazandcyantraniliproleagainsteggs

序號No.濃度Concentration∥mg/kg20%雙甲脒 EC 20% Amitraz 10%溴氰蟲酰胺 SC 10% Cyantra-niliprole20%雙甲脒EC∶10%溴氰蟲酰胺 SC 20% Amitraz∶10% Cyantr-aniliprole藥后5 d孵化率Hatchability of 5th day after treated∥%1134.0095.001:0.7190.052134.0063.651:0.4891.983(CK)———98.13

3 結(jié)論與討論

近年來，用于防治柑橘木虱的殺蟲劑使用量不斷增加。然而，由于忽視科學(xué)合理用藥，抗藥性問題也逐年增加，嚴(yán)重威脅柑橘木虱的防治效果[9-10]。對現(xiàn)有殺蟲劑進(jìn)行復(fù)配，尋找高效配方是可持續(xù)利用殺蟲劑資源的重要策略。雙甲脒屬于有機(jī)氮類殺蟲殺螨劑，可用于防治同翅目梨黃木虱、桔黃粉虱等，但較少用于對柑橘木虱的防治[11-12]。溴氰蟲酰胺屬于鄰甲酰氨基苯甲酰胺類殺蟲劑，作用靶標(biāo)為魚尼丁受體，主要用于鱗翅目和鞘翅目害蟲的防治。田間葉面噴霧和土壤淋施試驗表明，溴氰蟲酰胺對柑橘木虱成蟲具有一定的防治效果[13]。研究表明，雙甲脒與其他種類農(nóng)藥混用有一定的增效作用[14]。該研究對不同配比的20%雙甲脒EC和10%溴氰蟲酰胺SC配方進(jìn)行盆栽試驗和田間試驗，篩選合適配方以服務(wù)于生產(chǎn)實踐。

仇貴生等[12]研究發(fā)現(xiàn)，使用20%雙甲脒EC(1 500倍稀釋液或134 mg/kg)對梨木虱的5 d田間防效為91.83%～97.28%。該研究中，相同濃度雙甲脒單劑盆栽試驗3和7 d對柑橘木虱的矯正死亡率分別為59.13%和79.09%。雖然梨木虱和柑橘木虱有所區(qū)別，但效果差異之大也顯示雙甲脒防效的不穩(wěn)定性。在柑橘木虱田間濃度梯度噴霧試驗中，100 mg/L 10%溴氰蟲酰胺的7 d防效為87.29%[13]。該研究單獨(dú)使用溴氰蟲酰胺，在95 mg/kg的試驗中7 d矯正死亡率為94.78%；考慮到濃度相近，該結(jié)果與前人研究結(jié)果相近。在篩選出的2個配方中，雙甲脒濃度均為134 mg/kg，而溴氰蟲酰胺濃度在95和63.65 mg/kg的情況下，3 d田間防效均為100.00%，10 d防效分別為97.45%和98.51%，且無顯著差異。這說明雙甲脒與溴氰蟲酰胺在有效成分為1∶0.48的情況下，不僅減少了溴氰蟲酰胺的用量，而且保證了防治的速效性。

盆栽試驗中，這2種配比的持效性表現(xiàn)為15 d矯正死亡率在90%以上；但田間試驗中，15 d防效為86.68%和85.03%。觀察發(fā)現(xiàn)，在田間試驗中，對照3個重復(fù)中的1個有些異常，即從第1天起蟲口基數(shù)明顯比其他2個重復(fù)低很多，15 d的活蟲數(shù)僅為26頭，其他2個為230、92頭。很可能是該重復(fù)的異常導(dǎo)致防效下降至90%以下?？紤]到田間試驗環(huán)境的復(fù)雜性，該試驗無法否定該2種配方的持效性。

表5 2種藥劑不同配比對田間柑橘木虱的防治效果

注 ：同列不同小寫字母表示2種配方間差異顯著(P<0.05)

Note：Different lowercases in the same column stand for significant differences between two formulations (P<0.05)

同樣是在盆栽試驗中，上述2種配方對卵無明顯的殺滅作用，藥后5 d孵化率高達(dá)90%以上。宋曉兵等[15]研究表明，用捕食螨攜帶白僵菌孢子粉處理卵，3 d后的致死率為98.4%；此外，其他關(guān)于殺蟲劑對柑橘木虱卵活性的研究鮮見報道。

該研究以20%雙甲脒EC和10%溴氰蟲酰胺SC為研究對象，進(jìn)行不同配比下的盆栽試驗，篩選出兼具速效性和持效性的配方，進(jìn)一步進(jìn)行田間藥效試驗。結(jié)果表明，篩選出的1∶0.71和1∶0.48(以有效含量計)可用于田間木虱若蟲、成蟲的防治。