3種全自動血型分析系統(tǒng)在血型鑒定及不規(guī)則抗體篩查試驗(yàn)中的應(yīng)用比較

陳 偉,李 菲,邱 進(jìn),文 軍△,黃 睿,王昌敏

(新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院：1.輸血科；2.臨床檢驗(yàn)中心,新疆烏魯木齊 830001)

準(zhǔn)確的血型鑒定和不規(guī)則抗體篩查是保障臨床用血安全的前提[1-2]。傳統(tǒng)的血型鑒定多為手工操作如玻片法、紙板法、試管法等，不規(guī)則抗體篩查也多采用試管法，在工作量較少的情況下，基本可以滿足臨床用血工作，但由于實(shí)驗(yàn)全過程中不可避免的人為誤差，難以保證血型鑒定結(jié)果100%正確率和可靠的不規(guī)則抗體篩查結(jié)果[3]。如果血型鑒定錯(cuò)誤和不規(guī)則抗體漏檢，可能會導(dǎo)致患者在輸注血液制品過程中產(chǎn)生嚴(yán)重的輸血不良反應(yīng)或溶血現(xiàn)象危及患者生命[4]。2015年新疆地區(qū)為了更好的發(fā)展輸血醫(yī)學(xué)和規(guī)范輸血科基本建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)，重新修訂了《新疆維吾爾自治區(qū)醫(yī)療機(jī)構(gòu)輸血科(血庫)建設(shè)基本標(biāo)準(zhǔn)(2015版)》，內(nèi)容對包括設(shè)置原則、人員配備、儀器設(shè)備、開展業(yè)務(wù)項(xiàng)目等做了諸多規(guī)定，其中要求輸血科必須配置全自動血型儀器，保障血型鑒定準(zhǔn)確性和不規(guī)則抗體篩查結(jié)果可靠性，保證用血安全。

隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展和輸血醫(yī)學(xué)專業(yè)需求提高，全自動血型分析儀器應(yīng)運(yùn)而生，檢測方法主要包括卡式法和微孔板法，卡式法主要包括:強(qiáng)生(ORTHO AUTOVUE Innova)微柱玻璃珠卡、達(dá)亞美(Techno TwinStation)微柱凝膠卡、戴安娜(WADianaGrifols)微柱凝膠卡等；微板法包括:伽利略(Galileo NEO)微孔板法與捕獲技術(shù)、柯利斯(DIAGAST)微孔板法與紅細(xì)胞磁化技術(shù)等，其過程是從標(biāo)本識別、試劑的加樣、樣本的孵育、離心、結(jié)果讀取、保存和傳輸全過程自動化和標(biāo)準(zhǔn)化分析，減少人為操作帶來的差錯(cuò)及判斷標(biāo)準(zhǔn)不同導(dǎo)致的結(jié)果迥異，提高了工作質(zhì)量和工作效率[5-6]。本院2012-2014年分別引進(jìn)強(qiáng)生(ORTHO AUTOVUE Innova)全自動血型分析儀器、達(dá)亞美(Techno TwinStation)全自動血型分析儀器、伽利略(Galileo NEO)全自動血型分析儀器，本文通過對這3種全自動血型分析系統(tǒng)各自特點(diǎn)的研究，總結(jié)其臨床應(yīng)用的經(jīng)驗(yàn)體會。

1 材料與方法

1.1樣本來源 樣本采自2012-2017年本院就診患者328例，男141例，女187例，年齡3 d至89歲，使用3種全自動血型分析系統(tǒng)，檢測血型并篩查不規(guī)則抗體。

1.2樣本采集 應(yīng)用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝劑，采集就診患者靜脈血3 mL，盡快檢測，如樣本不能及時(shí)檢測可置2～8 ℃冰箱保存7 d。

1.3設(shè)備與試劑 強(qiáng)生全自動血型分析儀器(ORTHO AUTOVUE Innova)簡稱強(qiáng)生、達(dá)亞美(Techno TwinStation)全自動血型分析儀器簡稱達(dá)亞美、伽利略(Galileo NEO)全自動血型分析儀器簡稱伽利略。強(qiáng)生ABO/Rh正反定型血型定型試劑卡(強(qiáng)生微柱玻璃珠)、抗人球蛋白(IgG,C3b/C3d)檢測卡(強(qiáng)生微柱玻璃珠)、人ABO血型反定型用3%紅細(xì)胞試劑盒(強(qiáng)生)、強(qiáng)生人不規(guī)則抗體檢測用3%紅細(xì)胞試劑盒(強(qiáng)生)、低離子強(qiáng)度鹽溶液(強(qiáng)生)；達(dá)亞美ABO血型正/反定型和RhD血型檢測卡(達(dá)亞美微柱凝膠)、低離子抗人球蛋白卡(達(dá)亞美微柱凝膠)、達(dá)亞美2號稀釋液、清洗液A(10倍濃縮液；達(dá)亞美)、清洗液B(10倍濃縮液；達(dá)亞美)；伽利略微孔板、抗A抗B血型定型試劑(伽利略)、抗D(IgM+IgG)血型定型試劑(伽利略)、人ABO血型反定型用紅細(xì)胞試劑盒包括A1、A2、B、O紅細(xì)胞(伽利略)、質(zhì)控對照試劑(伽利略)、紅細(xì)胞抗體篩選試劑盒(微孔板捕獲法；伽利略)、低離子強(qiáng)度溶液(伽利略)、指示紅細(xì)胞、捕獲法-R 質(zhì)控血清(陽性和陰性；伽利略)；人ABO血型反定型用紅細(xì)胞試劑(A1、B、O紅細(xì)胞；上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司)、抗體篩選紅細(xì)胞試劑(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號O型紅細(xì)胞；上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司)。血型鑒定和不規(guī)則抗體篩查質(zhì)控品(北京金豪制藥股份有限公司)。

1.4方法 強(qiáng)生全自動血型分析儀器，其采用微柱玻璃珠抗原抗體凝集法；達(dá)亞美全自動血型分析儀器，其采用微柱凝膠抗原抗體凝集法；伽利略全自動血型分析儀器，其采用微板抗原抗體凝集法。首先使用一種全自動血型分析儀器進(jìn)行檢測，如果鑒定血型不符合正常格局，篩查不規(guī)則抗體呈現(xiàn)非陰性結(jié)果，然后應(yīng)用其他2種全自動血型分析儀器進(jìn)行檢測，對比其結(jié)果，最后確認(rèn)試驗(yàn)通過試管抗原抗體凝集法結(jié)合顯微鏡觀察和分子生物學(xué)方法。通過3種全自動血型分析儀器專業(yè)工程師培訓(xùn)，科室人員熟練掌握操作技能和注意事項(xiàng)，嚴(yán)格執(zhí)行強(qiáng)生全自動血型儀器操作手冊、達(dá)亞美全自動血型儀器操作手冊、伽利略(NEO)全自動血型儀器操作手冊。由于每種全自動血型儀器都有配套試劑并以每人份計(jì)算成本，所以使用不同試劑。放置伽利略原裝配套抗A抗B血型定型試劑(伽利略)、抗D(IgM+IgG)血型定型試劑(伽利略)、人ABO血型反定型用紅細(xì)胞試劑、NOVACLONE 質(zhì)控對照試劑、微孔板到儀器內(nèi)；放置強(qiáng)生抗人球蛋白卡、ABO/Rh正反定型血型定型試劑卡、低離子強(qiáng)度鹽溶液、人ABO血型反定型用3%紅細(xì)胞試劑盒、人不規(guī)則抗體檢測用3%紅細(xì)胞試劑盒到儀器內(nèi)；放置達(dá)亞美ABO血型正/反定型和RhD血型檢測卡、低離子抗人球蛋白卡、2號稀釋液、A清洗液、B清洗液、人ABO血型反定型用紅細(xì)胞試劑(上海)、抗體篩選紅細(xì)胞試劑(上海)到儀器內(nèi)。取EDTA-K2抗凝劑全血，經(jīng)過離心后，放置血標(biāo)本置儀器試管架中，啟動檢測血型及不規(guī)則抗體篩查試驗(yàn)任務(wù)，等待結(jié)果并審核上傳。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，計(jì)算比較3種全自動血型儀器試驗(yàn)差異，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.13種全自動血型分析系統(tǒng)性能參數(shù)比較 3種全自動血型分析系統(tǒng)性能參數(shù)具體差異見表1。

2.23種全自動血型分析系統(tǒng)鑒定血型試劑比較 強(qiáng)生、達(dá)亞美、伽利略3種全自動血型分析系統(tǒng)鑒定血型所使用的試劑卡分別為微柱玻璃珠卡(預(yù)置抗A抗B血清)、微柱凝膠卡(預(yù)置抗A抗B血清)、微孔板(配套抗A、抗B、抗D血清)；質(zhì)控過程為血型卡Ctrl柱(強(qiáng)生和達(dá)亞美)和質(zhì)控血清(陽性和陰性對照，伽利略)及血型鑒定和不規(guī)則抗體篩查質(zhì)控品(北京金豪)，反定紅細(xì)胞依次為RhD陰性A1C、BC、OC(強(qiáng)生)、RhD陽性A1C、BC、OC(上海)、RhD陰性A1C、A2C、BC、OC(伽利略)。

2.33種全自動血型分析系統(tǒng)篩查不規(guī)則抗體試劑比較 強(qiáng)生、達(dá)亞美、伽利略3種全自動血型分析系統(tǒng)所使用不規(guī)則抗體篩查試劑卡分別為微柱玻璃珠卡(預(yù)置抗人球蛋白試劑)，微柱凝膠卡(預(yù)置低離子抗人球蛋白試劑)，包被紅細(xì)胞抗原的微孔板(捕獲法)；質(zhì)控過程：強(qiáng)生及達(dá)亞美全自動血型分析系統(tǒng)使用血型鑒定和不規(guī)則抗體篩查質(zhì)控品(北京金豪)，伽利略全自動血型分析系統(tǒng)則使用捕獲法-R質(zhì)控血清(陽性和陰性；伽利略)；3種分析系統(tǒng)所使用不規(guī)則抗體篩查細(xì)胞表面所包被抗原具有較大差異，強(qiáng)生使用原廠配備細(xì)胞，所包被抗原為：D、C、c、E、e、Jka、Jkb、M、N、S、s、Fya、Lea、Leb、P1、f、K、k、Kpb、Jsb、Fyb、Xga、Lub、Dia、HLAⅠ；達(dá)亞美使用由上海血液生物醫(yī)藥公司提供的不規(guī)則抗體篩查細(xì)胞，所包被抗原為：D、C、c、E、e、Jka、Jkb、M、N、S、s、Fya、Lea、Leb、P1；伽利略使用原廠配備細(xì)胞，所包被抗原為：D、C、c、E、e、Jka、Jkb、M、N、S、s、Fya、Lea、Leb、P1、K、k、Kpb、Jsb、Fyb、Xga、Lub、Dia、Dib。

表1 3種全自動血型分析系統(tǒng)性能參數(shù)比較

2.43種全自動血型分析系統(tǒng)在鑒定血型和篩查不規(guī)則抗體中的應(yīng)用比較 鑒定A2血型、A3血型、骨髓移植血型不相合轉(zhuǎn)變期血型中比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.230、0388、0.248，P>0.05)；篩查抗-M、抗-K、抗-P1、抗-Dia、抗-D抗體中比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.225、0.00、0.280、0.00、0.001，P>0.05)；3種全自動血型分析系統(tǒng)檢測直接抗人球蛋白試驗(yàn)中比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.463,P>0.05)。見表2。

表2 3種全自動血型分析系統(tǒng)在鑒定血型和篩查不規(guī)則抗體中的應(yīng)用比較(n)

3 討 論

全自動血型分析儀器的引進(jìn)，使輸血科工作人員從繁雜的常規(guī)手工操作中脫離，可將大量時(shí)間和精力放在疑難病例分析和輸血醫(yī)學(xué)相關(guān)知識學(xué)習(xí)中。手工操作易于出錯(cuò)的方面主要有:患者信息核對、患者檢測項(xiàng)目、樣本處理、試管標(biāo)注、試劑加樣、樣本加樣、結(jié)果判讀、結(jié)果記錄、結(jié)果錄入信息系統(tǒng)等環(huán)節(jié)[7]。如將全自動血型分析儀器與臨床用血閉環(huán)信息管理系統(tǒng)有機(jī)結(jié)合[8]，可實(shí)現(xiàn)血型鑒定和不規(guī)則抗體篩查試驗(yàn)的自動化、標(biāo)準(zhǔn)化、信息化及數(shù)據(jù)溯源，可用于大批量標(biāo)本的常規(guī)檢測，節(jié)省了大量的人力，消除了人為因素對檢測結(jié)果的影響[9-10]，可有效解決手工操作帶來的不利因素，但是在疑難標(biāo)本處理和分析時(shí)還必須使用手工血清學(xué)方法進(jìn)一步解決。

3種全自動血型分析系統(tǒng)性能參數(shù)比較中發(fā)現(xiàn)，在操作界面適用性和實(shí)用性方面強(qiáng)生更加易于操作，達(dá)亞美操作界面略微遜色，伽利略英文操作界面對初次接觸的操作者(英語語言障礙者)而言比較復(fù)雜；檢測速度(血型+不規(guī)則抗體篩查)由快到慢排序依次是伽利略、強(qiáng)生、達(dá)亞美，其檢測速度的快慢決定因素有加樣臂、離心機(jī)、孵育室、標(biāo)本裝載量、配套試劑和卡(微板)量、操作系統(tǒng)等，初始檢測第一個(gè)樣本(血型+不規(guī)則抗體篩查)時(shí)所需時(shí)間大約20 min，但大批量檢測由于可連續(xù)加載標(biāo)本和操作系統(tǒng)優(yōu)化，所以速度會大大增加；3種全自動血型儀器對操作環(huán)境溫度濕度要求比較嚴(yán)格，室溫高于30 ℃ 3種儀器均報(bào)警停止運(yùn)轉(zhuǎn)，必須給予高度重視，控制溫度；在濕度方面，北方的冬天室內(nèi)比較干燥，濕度在20%～40%，由于濕度比較低極易造成鹽水的結(jié)晶，可能堵塞管路。

3種全自動血型分析系統(tǒng)鑒定血型試劑比較中可見，每種儀器使用的載體不同，強(qiáng)生應(yīng)用微柱玻璃珠卡(預(yù)置抗A抗B血清)，儲存和運(yùn)輸溫度2～25 ℃，溫度范圍比較寬泛易于執(zhí)行。微柱玻璃珠卡為六孔，其中一孔是空白柱(Ctrl)，可初步判斷紅細(xì)胞是否被致敏，但試驗(yàn)過程中需并行做血型質(zhì)控品(北京)。配套反定紅細(xì)胞為RhD陰性的試劑，其優(yōu)勢在于血清或血漿中存在抗-D抗體時(shí)，不影響正反定格局，最為明顯是在做血型鑒定和不規(guī)則抗體篩查質(zhì)控品時(shí)，符合標(biāo)準(zhǔn)正反定格局。達(dá)亞美應(yīng)用微柱凝膠卡(預(yù)置抗A抗B血清)，儲存和運(yùn)輸溫度18～25 ℃，溫度范圍比較窄需嚴(yán)格控制溫度保證試劑卡質(zhì)量。微柱凝膠卡和質(zhì)控品做法均與強(qiáng)生一致，但不同的是達(dá)亞美使用的反定紅細(xì)胞(上海)是RhD陽性的紅細(xì)胞試劑，在血清或血漿中存在抗-D抗體時(shí)，鑒定血型可能存在正反定型不符的現(xiàn)象。伽利略(NEO)應(yīng)用微孔板(配套抗A、抗B、抗D血清)，微孔板儲存和運(yùn)輸溫度沒有限制，其具有配套質(zhì)控品(陽性和陰性；伽利略)和反定紅細(xì)胞(RhD陰性)。

3種全自動血型分析系統(tǒng)不規(guī)則抗體篩查試劑比較中呈現(xiàn)，每種儀器使用的載體不同，強(qiáng)生應(yīng)用微柱玻璃珠卡(預(yù)置抗人球蛋白試劑)和達(dá)亞美應(yīng)用微柱凝膠卡(預(yù)置低離子抗人球蛋白試劑)，儲存和運(yùn)輸溫度與血型卡一致，不規(guī)則抗體篩查試驗(yàn)過程需并行加做質(zhì)控品(北京金豪)；強(qiáng)生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號紅細(xì)胞試劑，存在獨(dú)有紅細(xì)胞抗原包括f、K、k、Kpb、Jsb、Fyb、 Xga、Lub、Dia、HLAⅠ(強(qiáng)生)等，達(dá)亞美Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號紅細(xì)胞(上海)具有共同抗原。伽利略應(yīng)用包被紅細(xì)胞抗原的微孔板(捕獲法)，其儲存和運(yùn)輸溫度1～30 ℃，具有配套質(zhì)控品(陽性和陰性；伽利略)；微孔板包被紅細(xì)胞抗原試劑，其獨(dú)有的抗原包括K、k、Kpb、Jsb、Fyb、 Xga、Lub、Dia、Dib(伽利略)等。3種全自動血型分析系統(tǒng)不規(guī)則抗體篩查試劑紅細(xì)胞除具有共同抗原外，其強(qiáng)生和伽利略具有的抗原如K+抗原在新疆維吾爾族頻率是1.80%～3.16%[11-12]，Dia抗原幾乎是蒙古人種獨(dú)有的，而那些罕見的例子中，往往難以排除蒙古血統(tǒng)祖先的存在[13]。Fyb抗原在強(qiáng)生不規(guī)則抗體篩查紅細(xì)胞抗原格局譜中具有陰性和陽性特異性，在伽利略不規(guī)則抗體篩查紅細(xì)胞抗原格局譜中全部是陽性，在上海不規(guī)則抗體篩查紅細(xì)胞抗原格局譜是全陰性，這種Fyb抗原全陰和全陽不易與其他抗原區(qū)別。在檢測抗-K(2例)和抗-Dia(3例)時(shí)使用強(qiáng)生(進(jìn)口抗篩試劑)和伽利略(進(jìn)口抗篩試劑)儀器可檢出不規(guī)則抗體，而達(dá)亞美(國產(chǎn)抗篩試劑)未檢出不規(guī)則抗體(0例)，所以國產(chǎn)試劑和進(jìn)口試劑聯(lián)合應(yīng)用，檢測不規(guī)則抗體篩查試驗(yàn)可提高抗體檢出率。

3種全自動血型分析系統(tǒng)在各試驗(yàn)中的應(yīng)用比較結(jié)果表明，強(qiáng)生、達(dá)亞美和伽利略的性能在案例中比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，3種全自動血型分析儀是經(jīng)長期臨床試驗(yàn)驗(yàn)證非常成熟的儀器，具有穩(wěn)定的性能和可靠的試驗(yàn)結(jié)果，但是具有各自特點(diǎn)。強(qiáng)生和達(dá)亞美采用微柱玻璃珠卡和微柱凝膠卡的模式，具有細(xì)胞篩的功能，對于混合凝集的樣本和弱凝集標(biāo)本具有一定優(yōu)勢，但微柱細(xì)胞篩對于異常蛋白造成凝集會給試驗(yàn)造成一定困擾。伽利略采用微孔板(捕獲法)，檢測速度較快，檢測不規(guī)則抗體凝集強(qiáng)度較強(qiáng)，但對于IgM型抗體檢出率不高，可能與國外儀器設(shè)計(jì)理念有關(guān)，只檢出有意義的抗體，其抗體類型多為(IgG型)；對于血型鑒定凝集強(qiáng)度較弱的樣本，相較其他兩種儀器缺少微柱細(xì)胞篩的介質(zhì)可能凝集強(qiáng)度會弱一些。3種全自動血型分析系統(tǒng)在檢測不規(guī)則抗體時(shí)，檢出率由多個(gè)因素決定，主要是抗原種類和性質(zhì)(試劑)、抗體種類和性質(zhì)及抗體含量(樣本)、儀器的特性等因素。

3種全自動血型分析系統(tǒng)給研究者的工作帶來諸多便利和高效率的同時(shí)，必須了解每種儀器的特點(diǎn)，趨利避害。更好的服務(wù)臨床、服務(wù)患者，確保臨床用血安全，保障醫(yī)療質(zhì)量和醫(yī)療安全，最終贏在患者身上[8]。