捧興通脈顆粒對(duì)高脂乳劑致高脂血癥大鼠的影響

陳昱曉， 韋立群， 張宇薇， 許立拔， 蔣偉哲， 付書(shū)婕

（廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西南寧 530021）

隨著人們生活水平的提高，肥胖已成為全球廣泛存在的健康問(wèn)題，它常伴有高脂血癥，是動(dòng)脈粥樣硬化、腦卒中、冠心病、心肌梗死、猝死等疾病的重要誘因。肝臟負(fù)責(zé)脂質(zhì)和脂蛋白代謝，是機(jī)體營(yíng)養(yǎng)代謝的重要器官，脂質(zhì)攝入過(guò)量時(shí)會(huì)導(dǎo)致肝損傷，繼而引發(fā)脂質(zhì)代謝紊亂[1］。

捧興通脈顆粒是廣西壯要方醫(yī)院的醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑，已獲醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑注冊(cè)批件 （桂藥制字M20170005），由玉郎傘、姜黃、廣山楂、決明子等廣西特色壯藥材組成，具有護(hù)肝降脂的作用，主要用于高血脂癥、脂肪肝等疾病的治療，臨床療效顯著，已列入科技部-中央引導(dǎo)地方科技發(fā)展專項(xiàng)資金項(xiàng)目、廣西創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)發(fā)展專項(xiàng)-科技重大專項(xiàng)。研究表明，玉郎傘多糖、總黃酮、皂苷等成分具有護(hù)肝降脂的作用[2-6］，而姜黃素、山楂總黃酮、決明子總蒽醌等具有治療脂肪肝的作用[7-9］。本實(shí)驗(yàn)采用高脂乳劑建立大鼠高脂血癥模型，觀察捧興通脈顆粒降血脂和改善肝功能的作用，為其臨床應(yīng)用和深入研究提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物 雄性Wistar大鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量180～200 g，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（桂）2009-0002，飼養(yǎng)于廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室，自由飲水?dāng)z食。

1.2 試藥 捧興通脈顆粒 （6 g／袋）購(gòu)自廣西壯要方醫(yī)院，批號(hào)20130301；血脂康膠囊購(gòu)自北京北大維信生物科技公司，批號(hào)2013072。膽固醇購(gòu)自廣州威佳科技有限公司，批號(hào)20130826；丙硫氧嘧啶購(gòu)自上海朝暉藥業(yè)有限公司，批號(hào)1401F11；精制豬油為自制；膽固醇 （TC）、甘油三酯 （TG）、高密度脂蛋白膽固醇 （HDLC）、低密度脂蛋白膽固醇 （LDLC）、載脂蛋白A1（ApoA1）、ApoB、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）谷草轉(zhuǎn)氨酶 （AST）試劑盒購(gòu)自上海執(zhí)誠(chéng)生物科技有限公司，批號(hào) NOVL017、NOVL011、AUGK008、NOVL009、 DECL008、 OCTL012、 NOVL002、 NOVL012。

1.3 儀器 7100型全自動(dòng)血生化分析儀 （日本日立公司）；Micro17R型高速低溫離心機(jī)、FORMA991型-80℃超低溫冰箱、Multiskan G0型全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀 （美國(guó)賽默飛世爾科技公司）；EL602型電子天平 （0.01 g，瑞士梅特勒-托利多公司）；UW620H型電子天平 （0.001 g，日本島津制作所）。

2 方法

2.1 藥液配制 取顆粒3袋 （18 g），加純凈水至60 mL，充分混勻，即得高劑量藥液 （300 mg／mL），同法倍比取顆粒，配制低、中劑量藥液 （75、150 mg／mL）。

2.2 分組及給藥 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后取80只，隨機(jī)選取其中12只作為空白組，按10 mL／kg劑量灌胃給予等體積純凈水，其余大鼠按相同劑量灌胃給予高脂乳劑 （配方參考余學(xué)釗等[10］報(bào)道，即20%豬油+6%膽固醇+0.2%丙硫氧嘧啶+10%吐溫-80+63.8%水，機(jī)械混合，冷凍保存，使用前水浴融溶），每天1次。21 d后，大鼠眼眶后靜脈叢采血，測(cè)定TC水平。

選取TC水平在2.8～6.0 mmol／L之間的模型大鼠60只，隨機(jī)分為模型組、血脂康組 （0.2 g／kg）及捧興通脈顆粒低、中、高劑量組 （0.8、1.5、3.0 g／kg），每組 12只。每天早上除空白組大鼠按10 mL／kg劑量灌胃給予純凈水外，其余大鼠按相同劑量灌胃給予高脂乳劑；每天下午除空白組、模型組大鼠按相同劑量灌胃給予純凈水外，其余大鼠按相同劑量灌胃給予相應(yīng)藥液，每天上、下午各灌胃1次，每周稱定大鼠體質(zhì)量并調(diào)整給藥量，連續(xù)6周。

2.3 血清生化指標(biāo)檢測(cè) 給藥3、6周，大鼠眼眶后靜脈叢采血，通過(guò)全自動(dòng)血生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)。

2.3.1 血脂 測(cè)定TCHO、TG、HDLC、LDLC水平。

2.3.2 血脂綜合指數(shù)和動(dòng)脈硬化指數(shù) 根據(jù)血脂水平，計(jì)算血脂綜合指數(shù) （LCI， TC×TG×LDLC／HDLC）、 動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù) [AI， （TC-HDLC） ／HDLC］[11-12］。

2.3.3 血清載脂蛋白 測(cè)定載脂蛋白A1（ApoA1）、載脂蛋白 B （ApoB） 水平，并計(jì)算兩者比值 （ApoA1／ApoB）[13］。

2.3.4 血清肝功能指標(biāo)測(cè)定ALT、AST水平。

2.4 肝臟組織病理學(xué)檢查 末次采血結(jié)束后處死大鼠，取出部分肝組織，10%中性福爾馬林固定，蘇木素-伊紅（HE）染色，光鏡下檢查肝組織病理變化。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過(guò)SPSS17.0軟件進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)用±s）表示，符合正態(tài)分布和方差齊性者，采用One-Way ANOVA分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義則組間采用LSD-t進(jìn)行兩兩比較分析；不符合正態(tài)分布或方差齊性者，采用Kruskal-Wallis H分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義則組間采用Mann-Whitney U進(jìn)行兩兩比較分析。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 體質(zhì)量 表1顯示，與空白組比較，模型組大鼠體質(zhì)量顯著降低 （P＜0.01）；與模型組比較，捧興通脈顆粒組大鼠體質(zhì)量無(wú)明顯變化 （P＞0.05）。

表1 捧興通脈顆粒對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響 （g，n＝12）

表1 捧興通脈顆粒對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響 （g，n＝12）

注：與模型組比較，▲▲P＜0.01

組別 劑量／（g·kg-1） 給藥前 給藥后3周 給藥后6周空白組 — 345.2±25.4▲▲ 381.8±26.9▲▲ 407.2±32.8▲▲模型組 — 300.4±12.7 298.2±17.9 280.0±19.6血脂康組 0.2 301.9±15.2 298.1±18.6 280.4±25.3捧興通脈顆粒組 0.8 305.5±12.3 300.6±20.6 279.6±28.8捧興通脈顆粒組 1.5 303.4±15.4 301.0±17.1 292.7±30.1捧興通脈顆粒組 3.0 295.0±8.2 286.8±12.2 272.0±23.2

3.2 血脂指標(biāo) 表2～3顯示，與空白組比較，模型組給藥后第3、6周大鼠血清TC、TG、LDLC水平顯著升高（P＜0.01）， HDLC水平顯著降低 （P＜0.01）； 與模型組比較，捧興通脈顆粒組給藥后第3周TC、TG、LDLC水平顯著降低 （除低劑量組TC水平外） （P＜0.05，P＜0.01），同時(shí)高劑量組HDLC水平顯著升高 （P＜0.05），給藥后第6周四者水平均有明顯變化 （P＜0.05，P＜0.01）。

表2 捧興通脈顆粒對(duì)大鼠血脂指標(biāo)的影響 （第3周） （mmol／L，， n＝12）

表2 捧興通脈顆粒對(duì)大鼠血脂指標(biāo)的影響 （第3周） （mmol／L，， n＝12）

注：與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

組別 劑量／（g·kg-1） TC TG HDLC LDLC空白組 — 1.63±0.28▲▲ 0.46±0.16▲▲ 2.93±0.53▲▲ 0.46±0.15▲▲模型組 — 5.66±0.85 0.76±0.24 1.96±0.66 3.97±0.93血脂康組 0.2 4.54±0.99▲ 0.63±0.19▲ 2.55±0.50▲ 2.68±0.79▲▲捧興通脈顆粒組 0.8 4.55±1.35 0.56±0.19▲ 2.19±0.38 3.28±0.56▲捧興通脈顆粒組 1.5 3.63±1.38▲▲ 0.43±0.10▲▲ 2.27±0.49 2.91±0.58▲▲捧興通脈顆粒組 3.0 4.28±1.47▲ 0.57±0.25▲ 2.45±0.54▲ 3.03±0.44▲▲

表3 捧興通脈顆粒對(duì)大鼠血脂指標(biāo)的影響 （第6周） （mmol／L，x±s， n＝12）

3.3 血脂綜合指數(shù)和動(dòng)脈硬化指數(shù) 表4～5顯示，與空

白組比較，模型組給藥后第3、6周大鼠血清LCI、AI顯著升高 （P＜0.01）；與模型組比較，捧興通脈顆粒組給藥后第3、 6周兩者顯著降低 （P＜0.05， P＜0.01）。

表4 捧興通脈顆粒對(duì)大鼠血脂綜合指數(shù)和動(dòng)脈硬化指數(shù)的影響 （第3周）s， n＝12）

表4 捧興通脈顆粒對(duì)大鼠血脂綜合指數(shù)和動(dòng)脈硬化指數(shù)的影響 （第3周）s， n＝12）

注：與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

組別 劑量／（g·kg-1） LCI AI空白組 — 0.12±0.05▲▲ -0.44±0.11▲▲模型組 — 10.12±6.35 2.18±1.11血脂康組 0.2 3.57±3.42▲▲ 0.84±0.57▲▲捧興通脈顆粒組 0.8 4.13±2.71▲▲ 1.16±0.80▲捧興通脈顆粒組 1.5 1.94±0.74▲▲ 0.64±0.66▲▲捧興通脈顆粒組 3.0 3.57±2.64▲▲ 0.83±0.69▲▲

表5 捧興通脈顆粒對(duì)大鼠血脂綜合指數(shù)和動(dòng)脈硬化指數(shù)的影響 （第6周）， n＝12）

表5 捧興通脈顆粒對(duì)大鼠血脂綜合指數(shù)和動(dòng)脈硬化指數(shù)的影響 （第6周）， n＝12）

注：與模型組比較，▲▲P＜0.01

組別 劑量／（g·kg-1） LCI AI空白組 — 0.19±0.08▲▲ -0.09±0.50▲▲模型組 — 13.82±11.22 2.05±1.01血脂康組 0.2 0.83±0.48▲▲ 0.36±0.52▲▲捧興通脈顆粒組 0.8 1.90±1.12▲▲ 0.59±0.79▲▲捧興通脈顆粒組 1.5 1.72±1.14▲▲ 0.57±0.53▲▲捧興通脈顆粒組 3.0 1.07±0.95▲▲ 0.43±0.88▲▲

3.4 血清載脂蛋白 表6～7顯示，與空白組比較，模型組給藥后第3周大鼠血清ApoA1水平無(wú)明顯變化 （P＞0.05）， ApoB 水平顯著升高 （P＜0.01）， ApoA1／ApoB 顯著降低 （P＜0.01），而給藥后第6周三者均有明顯變化 （P＜0.05，P＜0.01）；與模型組比較，捧興通脈顆粒組給藥后第3周三者無(wú)明顯變化 （P＞0.05），給藥后第6周均有明顯變化 （除中劑量組ApoA1水平外） （P＜0.05，P＜0.01）。

表6 捧興通脈顆粒對(duì)大鼠血清載脂蛋白的影響 （第3周）（mg／dL， s， n＝12）

表6 捧興通脈顆粒對(duì)大鼠血清載脂蛋白的影響 （第3周）（mg／dL， s， n＝12）

注：與模型組比較，▲▲P＜0.01

組別 劑量／ApoA1 ApoB ApoA1／（g·kg-1） ApoB空白組 — 0.07±0.04 0.04±0.03▲▲ 3.64±4.08▲▲模型組 — 0.05±0.03 0.12±0.03 0.52±0.40血脂康組 0.2 0.09±0.04 0.08±0.02▲▲ 1.38±0.97捧興通脈顆粒組 0.8 0.08±0.04 0.10±0.03 0.88±0.52捧興通脈顆粒組 1.5 0.07±0.04 0.11±0.04 0.85±0.66捧興通脈顆粒組 3.0 0.09±0.05 0.10±0.03 1.06±0.65

表7 捧興通脈顆粒對(duì)大鼠載脂蛋白指標(biāo)的影響 （第6周）（mg／dL， s， n＝12）

表7 捧興通脈顆粒對(duì)大鼠載脂蛋白指標(biāo)的影響 （第6周）（mg／dL， s， n＝12）

注：與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

組別 劑量／ApoA1 ApoB ApoA1／（g·kg-1） ApoB空白組 — 0.15±0.04▲▲ 0.04±0.02▲▲ 6.52±4.82▲▲模型組 — 0.04±0.02 0.14±0.03 0.34±0.19血脂康組 0.2 0.08±0.05▲ 0.10±0.03▲▲ 0.92±0.59▲▲捧興通脈顆粒組 0.8 0.07±0.03▲ 0.08±0.04▲▲ 0.95±0.77▲▲捧興通脈顆粒組 1.5 0.09±0.04 0.08±0.02▲▲ 1.17±0.61▲▲捧興通脈顆粒組 3.0 0.08±0.04▲ 0.09±0.03▲▲ 1.14±1.00▲▲

3.5 血清肝功能指標(biāo) 表8顯示，與空白組比較，模型組給藥后第3、6周大鼠血清ALT、AST水平顯著升高 （P＜0.01）；與模型組比較，捧興通脈顆粒組給藥后第3周兩者水平顯著降低 （除中劑量組ALT水平外） （P＜0.05，P＜0.01）， 給藥后第 6周亦然 （P＜0.05， P＜0.01）。

表8 捧興通脈顆粒對(duì)大鼠肝功能指標(biāo)的影響 （U／L， n＝12）

表8 捧興通脈顆粒對(duì)大鼠肝功能指標(biāo)的影響 （U／L， n＝12）

注：與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

組別 劑量／（g·kg-1）第6周ALT AST ALT AST第3周空白組 — 53.2±23.9▲▲ 111.9±24.0▲▲ 63.8±20.4▲▲ 114.9±13.7▲▲模型組 — 112.0±16.7 151.1±26.3 128.3±18.3 179.7±52.1血脂康組 0.2 98.7±11.5 131.2±12.6 106.9±22.6▲▲ 128.2±17.9▲捧興通脈顆粒組 0.8 95.2±18.8▲ 123.0±23.3▲ 110.8±16.8▲ 136.3±28.0▲捧興通脈顆粒組 1.5 98.8±13.7 121.4±12.6▲▲ 100.8±21.7▲ 124.9±16.2▲捧興通脈顆粒組 3.0 93.2±15.9▲ 122.8±12.3▲▲ 103.9±27.1▲▲ 121.5±12.7▲▲

3.6 肝臟結(jié)構(gòu)改變 圖1顯示，空白組大鼠肝體表面光滑，顏色暗紅，無(wú)顏色、質(zhì)地、體積異常，光鏡下細(xì)胞大而結(jié)構(gòu)完整，核圓居中，呈放射狀分布，中央靜脈區(qū)未見(jiàn)異常；模型組大鼠肝體呈粉黃色，包膜粗糙無(wú)光澤，腫脹而富有油膩感，光鏡下肝細(xì)胞大小不一，排列不規(guī)則，腫脹核不居中，空泡增多，肝細(xì)胞脂肪樣變性增多，部分細(xì)胞變性壞死；血脂康組、捧興通脈顆粒組大鼠肝體顏色明顯改善，顏色暗紅，表面光滑，腫脹、壞死明顯減輕，光鏡下肝細(xì)胞排列有序，核圓居中，細(xì)胞結(jié)構(gòu)輪廓清晰，未見(jiàn)空泡、腫脹和壞死，以血脂康組、捧興通脈顆粒高劑量組肝細(xì)胞形態(tài)改善最為明顯。

圖1 各組大鼠肝組織病理學(xué)變化 （HE，×400）

4 討論

高脂乳劑建立高脂血癥大鼠模型時(shí)，具有省時(shí)省力、模型穩(wěn)定等特點(diǎn)，可避免飼喂高脂飼料時(shí)大鼠食量不均、厭食癥等問(wèn)題[14］。另外，配方中加入丙硫氧嘧啶可增加膽固醇合成，誘發(fā)高脂血癥，同時(shí)具有一定肝細(xì)胞毒性，可導(dǎo)致肝小葉損傷壞死，影響脂質(zhì)、膽固醇、脂蛋白代謝[15］；加入豬油和膽固醇可增加脂質(zhì)、膽固醇攝入量，快速穩(wěn)定地建模。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠血清TC、TG、LDLC、ApoB水平及LCI、AI顯著升高，HDLC、ApoA1水平及ApoA1／ApoB水平顯著降低，ALT、AST水平顯著升高，肝組織細(xì)胞出現(xiàn)顯著脂肪變性，表明建模成功。

結(jié)果表明，捧興通脈顆粒治療3、6周后，大鼠血清TC、TG、LDLC水平及LCI、AI降低，HDLC水平升高，以6周效果最佳，表明它具有良好的調(diào)節(jié)血脂作用。ApoA1和HDLC是抗高脂血癥的積極因素，而ApoB是一種含糖的血漿載脂蛋白，主要負(fù)責(zé)運(yùn)輸膽固醇，使膽固醇沉積于動(dòng)脈血管壁，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的形成[15］，捧興通脈顆?？缮哐?ApoA1水平，降低 ApoB水平，提高 ApoA1／ApoB，表明它可通過(guò)激活載脂蛋白功能，加速TC、TG、LDLC排泄，降低高脂血癥對(duì)機(jī)體的損傷。同時(shí)，捧興通脈顆?？捎行Ы档痛笫笱錋ST、ALT水平，明顯改善肝組織細(xì)胞形態(tài)，減少肝細(xì)胞脂肪變性和肝小葉的結(jié)構(gòu)變異，表明它對(duì)丙硫氧嘧啶、脂質(zhì)、膽固醇造成的肝損傷具有一定的保護(hù)作用。

根據(jù) 《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》[16］結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，在血清TC、TG、HDLC 3項(xiàng)指標(biāo)中TC、TG呈陽(yáng)性即可判定樣品具有輔助降血脂功能，而捧興通脈顆粒對(duì)三者的作用均呈陽(yáng)性，可認(rèn)為它具有良好的調(diào)節(jié)血脂作用。

綜上所述，捧興通脈顆?？擅黠@降低血脂水平，改善肝功能及肝組織病理?yè)p傷，其機(jī)制可能與激活載脂蛋白功能及護(hù)肝作用有關(guān)。雖然高脂乳劑可建立高脂血癥模型，但并不能建立肥胖模型，可能與肝損傷影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收和代謝有關(guān)，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究，同時(shí)捧興通脈顆粒是否對(duì)肥胖模型有效也尚需深入探索。