Mena蛋白在大腸癌及癌旁組織、息肉、淋巴結(jié)等中的表達(dá)及意義

孫 威 裴笑月 馬 帥 賈 翼 于 劍*

（1 大連大學(xué)附屬新華醫(yī)院普外科，遼寧 大連 116021；2 大連大學(xué)附屬新華醫(yī)院病理科，遼寧 大連 116021；3 大連大學(xué)附屬新華醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，遼寧 大連 116021）

腫瘤的發(fā)生發(fā)展涉及到一系列因子的變化，Mena蛋白調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞，在腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移方面起作用，對(duì)評(píng)估預(yù)后有意義，故有望成為腫瘤診斷和指導(dǎo)治療的新的腫瘤標(biāo)志物。Mena蛋白在多種腫瘤中過(guò)表達(dá)，如乳腺癌、黑色素瘤等[1]，但與大腸癌的關(guān)系少見(jiàn)報(bào)道。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大腸癌及癌旁組織、息肉、正常淋巴結(jié)及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中Mena 蛋白的表達(dá)水平，觀察不同大腸癌組織中Mena蛋白的表達(dá)，探討其表達(dá)變化與臨床的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集大連大學(xué)附屬新華醫(yī)院病理科2014年1月至2014年12月的大腸癌標(biāo)本存檔蠟塊共20例、癌旁組織20例、正常淋巴結(jié)組織20例、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織20例、大腸息肉（腺瘤）組織20例。大腸癌組織中男性14例，女性6例，年齡34～76歲。按2010版《消化系統(tǒng)腫瘤WHO分類(lèi)》標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類(lèi)[2]。

1.2 組織芯片的制備：癌旁正常黏膜組織、癌組織、息肉（腺瘤組織）組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織及正常淋巴結(jié)組織。

1.3 免疫組織化學(xué)染色：已知陽(yáng)性對(duì)照片及PBS代替一抗陰性對(duì)照片進(jìn)行對(duì)照。Mena單克隆抗體及非生物素免疫組化ElivisionTM plus檢測(cè)試劑盒均按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)際操作。

1.4 方法：大腸癌組、癌旁組織組、息肉（腺瘤）組及淋巴結(jié)組樣本為石蠟包埋組織，照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行：4 μm切片、二甲苯脫蠟、梯度酒精水化后高壓鍋熱處理5～8 min，過(guò)氧化物酶阻斷血清封閉，加I抗60 min，磷酸鹽緩沖液洗3次，每次2 min；II抗15 min，磷酸鹽緩沖液洗3次，每次2 min；鏈霉菌抗生物素-過(guò)氧化酶10 min，DAB顯色5～10 min，蘇木素復(fù)染5～10 s，脫水、封片。

1.5 判定標(biāo)準(zhǔn)：Mena蛋白的陽(yáng)性染色主要定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒狀。在400倍鏡下根據(jù)胃黏膜上皮或腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)的染色程度進(jìn)行分析評(píng)分。染色程度分為4級(jí)：基本不著色者為0分，著色淺者為1分，著色適中者2分，著色深者為3分；著色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分率≤5%為0分、6%～25%為1分、26%～50%為2分、≥51%為3分。將著色程度與著色細(xì)胞百分率得分乘積，為其最后得分。0～1分為陰性（-），2～3分為弱陽(yáng)性（+），4～6分為陽(yáng)性（++），6分以上強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。其中Mena（-）與（+）為低表達(dá)，（++）與（+++）為高表達(dá)[3]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：SPSS 15.0軟件及SHEsis軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，檢驗(yàn)顯著水準(zhǔn)為α=0.05，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義。

2 結(jié) 果

2.1 Mena蛋白在大腸癌組織中的表達(dá)：Mena蛋白在大腸癌中與年齡、性別及部位無(wú)關(guān)。與分化程度相關(guān)：中低分化的表達(dá)高于高分化（P＜0.05）；與組織學(xué)分型有關(guān)：潰瘍型與浸潤(rùn)型大腸癌 Mena 的高表達(dá)率明顯高于腫塊型（P＜0.05）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Mena蛋白表達(dá)明顯高于正常淋巴結(jié)（P＜0.05）；腫瘤標(biāo)志物中CEA及CA199升高組Mena蛋白表達(dá)明顯高于正常腫瘤標(biāo)志物組（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 Mena蛋白在不同組織中的表達(dá)：正常的大腸黏膜上皮不表達(dá)或表達(dá)呈弱陽(yáng)性，大腸癌組織中則過(guò)表達(dá)。Mena蛋白在癌組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)、腺瘤中的表達(dá)依次降低（P＜0.05），癌旁組織中表達(dá)較弱（P=0.564），正常淋巴結(jié)中不表達(dá)。與癌旁正常大腸黏膜腺上皮相比，大腸癌組織Mena蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）。通過(guò)圖1可見(jiàn)：大腸癌組織中Mena蛋白染色較深，呈現(xiàn)黃色，在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)、腺瘤及癌旁組織中的染色依次變淺，而在正常淋巴結(jié)中不染色。見(jiàn)表2。

圖1 Mena在不同組織中的表達(dá) （IHC×400） A.癌組織，B.正常淋巴結(jié)，C.息肉（腺瘤），D.癌旁組織，E.轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)

表1 Mena蛋白在大腸癌中的表達(dá)

表2 不同組織中Mena蛋白的表達(dá)

3 討 論

隨著人民生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)的改變，大腸癌的發(fā)生率呈升高趨勢(shì)[4]；已經(jīng)成為全球第三的癌癥及癌癥相關(guān)的第四大死亡原因[5]。Mena蛋白的表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，尚鮮有文獻(xiàn)報(bào)道Mena蛋白表達(dá)與大腸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。本研究發(fā)現(xiàn)：Mena蛋白（表2）在癌組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)、腺瘤中的表達(dá)依次降低，癌旁組織中表達(dá)較弱，正常淋巴結(jié)中不表達(dá)。與癌旁正常大腸黏膜腺上皮相比，大腸癌組織Mena蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）。圖1顯示：大腸癌組織中Mena蛋白染色較深，呈現(xiàn)黃色，在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)、腺瘤及癌旁組織中的染色依次變淺，而在正常淋巴結(jié)中不染色。這樣的結(jié)果預(yù)示著Mena蛋白的表達(dá)增加可作為大腸癌的標(biāo)志物。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的原發(fā)腫瘤與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的原發(fā)腫瘤相比，染色得分明顯高于后者，預(yù)示著Mena的表達(dá)遞增與大腸癌的發(fā)展有關(guān)。

超過(guò)80%的大腸癌標(biāo)本Mena蛋白染色陽(yáng)性，25%的標(biāo)本染色強(qiáng)度是3+，60%的標(biāo)本染色強(qiáng)度是2+。說(shuō)明Mena的過(guò)度表達(dá)在大腸癌的初級(jí)步驟中可能發(fā)揮重要作用[7]。檢測(cè)大腸癌組織中Mena蛋白表達(dá)發(fā)現(xiàn)：Mena蛋白與年齡、性別及部位無(wú)關(guān)（表1）；與分化程度、組織學(xué)分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤標(biāo)志物CEA與CA199相關(guān)。Gurzu[5]等發(fā)現(xiàn)：正常大腸黏膜和無(wú)異形增生的息肉的Mena蛋白陰性表達(dá)，而異形增生的息肉Mena蛋白則過(guò)表達(dá)；正常宮頸鱗狀上皮中Mena雖然未表達(dá)，但染色強(qiáng)度隨著CIN級(jí)別的增加而增強(qiáng)[8]。這與我們研究的結(jié)果一致。進(jìn)一步對(duì)每一病例的免疫組化分析發(fā)現(xiàn)：大腸癌浸潤(rùn)的萌發(fā)位置，Mena免疫組化染色加強(qiáng)；與分化的腫瘤相比，腫瘤的萌出部位Mena蛋白的免疫組化反應(yīng)明顯增加；以上結(jié)果預(yù)示著Mena的表達(dá)增強(qiáng)可能會(huì)促進(jìn)腸癌的大浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移[9]。在符合大腸癌的病例和鄰近的非腫瘤上皮細(xì)胞中，Mena蛋白表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的上升，證明Mena蛋白的表達(dá)會(huì)因?yàn)榇竽c癌的惡性轉(zhuǎn)化而改變，并且其在大腸癌的進(jìn)展中發(fā)揮作用。腫瘤的增長(zhǎng)速度，腫瘤大小，Dukes分期，壁內(nèi)擴(kuò)散，腫瘤分化程度，淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移，血管浸潤(rùn)，轉(zhuǎn)移距離等等，都被用來(lái)預(yù)測(cè)直結(jié)腸癌患者的預(yù)后。因此可以認(rèn)為：大腸黏膜異型增生和癌癥發(fā)生的早期事件是Mena蛋白的過(guò)表達(dá)。綜上所述，Mena蛋白的過(guò)度表達(dá)可能會(huì)成為預(yù)測(cè)大腸癌患者預(yù)后的新指標(biāo)。當(dāng)然，這需要大樣本、多數(shù)據(jù)的進(jìn)一步研究。