妊娠期糖尿病孕婦血清Th1/Th2比值測定及分析

肖文霞，王會芝，周廣杰，欒艷秋

(北京市東城區(qū)第一婦幼保健院，北京 100007)

輔助T細胞(Th)根據(jù)其分泌的細胞因子和功能不同，可分為Th1和Th2細胞[1]。Th1/Th2是維持機體健康的重要免疫機制之一。在正常情況下，Th1和Th2兩種細胞互為抑制，機體處于Th1/Th2動態(tài)平衡中，但在病毒感染、藥物及各種應激等情況下，Th1/Th2平衡遭到破壞，機體會出現(xiàn)免疫反應異常，導致組織器官損傷。本研究回顧性分析我院30例妊娠期糖尿病(GDM)孕婦血清中Th1分泌的細胞因子干擾素-γ(IFN-γ)及Th2細胞分泌的細胞因子白介素-4(IL-4)的水平，用IFN-γ/IL-4比值表示Th1/Th2，以探討Th1/Th2和GDM的相關性，為臨床預防和治療GDM提供一定的理論基礎。

一、資料與方法

1.研究對象：選取2015年10月至2016年10月間在我院住院治療的GDM孕婦30例為GDM組，年齡20～44歲，孕周37～40周。同時隨機選取同一時期內(nèi)在我院住院的正常孕婦30例為對照組，年齡20～42歲，孕周37～41周。納入標準：(1)符合GDM診斷標準：妊娠24～28周孕婦口服75 g無水葡萄糖進行口服葡萄糖耐量實驗(OGTT)，空腹及服糖后1 h、2 h血糖值分別為5.1 mmol/L、10.0 mmol/L、8.5 mmol/L，任何一點血糖值達到或超過上述標準即診斷為GDM；(2)兩組孕婦均為單胎孕婦，且均無產(chǎn)兆。排除標準：(1)糖尿病合并妊娠孕婦，診斷為GDM但孕期使用過胰島素者；(2)存在其他內(nèi)外科合并癥、宮內(nèi)感染、臨床發(fā)熱征象者。

GDM組孕婦孕期通過調(diào)整飲食及運動，血糖控制基本滿意，孕期未使用胰島素。所有受試對象均知情同意并簽署知情同意書，本研究由我院倫理委員會審核批準。

2.標本制備：所有對象在早晨抽取空腹靜脈血4 ml，部分血液送我院檢驗科進行糖化血紅蛋白測定，部分血液常溫下靜置2.5～3.0 h，以3 000 r/min的速率離心10 min，取上清液置于EP管中，置于-80℃冰箱保存，待測。詳細記錄每位對象的年齡、孕周、血糖控制基本情況、糖化血紅蛋白數(shù)值等情況。

3.實驗方法：用ELISA方法測定兩組孕婦血清中的IFN-γ和IL-4，試劑盒由深圳晶美公司提供，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

二、結果

1.兩組研究對象的一般資料比較：兩組研究對象的年齡、孕周、糖化血紅蛋白水平比較，均無顯著性差異(P>0.05)(表1)。

2.兩組對象Th1/Th2細胞因子比較：兩組比較，GDM組孕婦血清中IFN-γ水平顯著低于對照組(P<0.05)；IL-4水平則顯著高于對照組(P<0.05)。GDM組孕婦血清中IFN-γ/IL-4比值顯著低于對照組(P<0.05)(表2)。

表1 兩組研究對象一般資料比較(-±s)

表2 兩組對象血清中IFN-γ和IL-4測定結果比較(-±s)

注：與對照組比較，*P<0.05

討 論

免疫系統(tǒng)是機體的第一道防線，可以抵抗病原體感染及危險信號刺激。T淋巴細胞，尤其是CD4+T淋巴細胞可以通過輔助B細胞在免疫反應中發(fā)揮重要作用。CD4+T細胞根據(jù)產(chǎn)生的細胞因子不同，可分為Th1和Th2細胞因子。Th1細胞可通過分泌IL-2和IFN-γ，從而介導細胞免疫[2]；Th2細胞則通過分泌IL-4和IL-10促進B淋巴細胞增殖以產(chǎn)生免疫球蛋白G(IgG)和IgE，從而介導體液免疫反應[3]。正常情況下，機體內(nèi)Th1和Th2相互排斥、相互調(diào)節(jié)，保持Th1/Th2比值的動態(tài)平衡，為機體提供最佳的免疫保護作用。但當機體受到外界病原體刺激時，Th1/Th2比值可能出現(xiàn)失衡并向某一方面轉化[4]。

正常妊娠是一個類似于同種異體移植的復雜過程，胎兒攜帶1/2異于母體的父源性白細胞組織相容性抗原(HLA)[5]，這對于母親來說是異物，因此胚胎植入過程某種意義上類似移植，在正常妊娠中，胚胎不會被母體免疫系統(tǒng)所排斥[6]，胎兒表面或胎盤組織表達的抗原可以誘導母體的同種免疫反應，母體能夠免疫耐受半同種胎兒來源的滋養(yǎng)細胞，這是胚胎種植和成功妊娠的關鍵[7]。有研究表明：Th1型細胞因子，如IL-2和IFN-γ，可以提高NK細胞(自然殺傷細胞)的毒性，從而抑制胚胎種植、滋養(yǎng)細胞生長及胚胎發(fā)育[8]，介導胎兒排斥；而Th2型細胞因子，如IL-4和IL-10可通過抑制Th1型免疫反應，保護胎兒免受免疫系統(tǒng)攻擊，從而有利于妊娠維持[9]。因此，妊娠是一種Th1/Th2向Th2偏移的現(xiàn)象，Th2偏移是對Th1細胞因子抑制的結果[10]。Th2偏移通常用以解釋妊娠的免疫耐受，并被認為是成功妊娠的重要標志[11-12]。另外，Th2占優(yōu)勢可刺激機體產(chǎn)生大量抗體，不僅有利于對抗細菌，還有利于提供給胎兒被動免疫[13]。相反，Th1占優(yōu)勢則可促進胎兒排斥，引起復發(fā)性流產(chǎn)、妊娠期高血壓疾病、胎兒生長受限及早產(chǎn)等[14-15]。

已有研究表明IFN-γ+T細胞分泌IFN-γ，代表Th1細胞[16]，因此可以用IFN-γ水平代表Th1細胞水平。本研究結果顯示：GDM孕婦血清中IFN-γ水平顯著低于對照組(P<0.05)，提示GDM孕婦體內(nèi)IFN-γ分泌減少，說明其體內(nèi)Th1細胞水平降低。這與Ategbo等[17]的研究結果相一致，該研究用ELISA方法測定59例GDM和60例正常孕婦血清中的細胞因子，結果顯示：GDM孕婦血清中IFN-γ水平明顯低于正常對照組，并推測Th1細胞因子下降有利于GDM孕婦維持妊娠。IL-4+T細胞分泌IL-4，代表Th2細胞[18]，IL-4的水平可以表示Th2細胞水平，本研究結果顯示：GDM孕婦血清中IL-4水平顯著高于對照組(P<0.05)，提示GDM孕婦體內(nèi)IL-4分泌增多，說明其體內(nèi)Th2細胞水平升高。

IFN-γ和IL-4之間的平衡對Th0向Th1或Th2分化起關鍵作用，可通過檢測IFN-γ/IL-4的平衡來反映機體Th1/Th2的變化[16]。本研究結果顯示：與正常孕婦相比，GDM孕婦血清中IFN-γ/IL-4比值顯著降低(P<0.05)，提示GDM孕婦體內(nèi)Th1/Th2比值失衡，更加向Th2漂移。因此本研究認為：與其他妊娠并發(fā)癥如流產(chǎn)、子癇前期等不同，GDM孕婦體內(nèi)Th1/Th2不是向Th1轉化，而是更加向Th2漂移，是一種Th2更加占主導的狀態(tài)，提示GDM孕婦體內(nèi)存在著免疫激活和功能失調(diào)。由于Th2細胞具有抗炎作用，可抑制細胞免疫反應，因此我們推測：由于GDM是一種炎癥狀態(tài)[18]，體內(nèi)各種炎癥因子明顯升高，Th2細胞優(yōu)勢表達，可能是機體的一種代償機制，通過分泌更多的Th2細胞因子，抑制體內(nèi)的炎癥進一步加重，并促進母體免疫更加耐受，有利于維持妊娠。

關于GDM孕婦體內(nèi)Th1/Th2比值更加向Th2漂移的機制目前尚不清楚。有學者認為GDM孕婦體內(nèi)存在的高胰島素血癥，可促進Th0細胞向Th2表型分化[19]，從而出現(xiàn)Th2占主導地位。Viardot等[20]通過研究發(fā)現(xiàn)：胰島素可以影響T細胞分化，促進T細胞向Th2表型轉化，不僅可增加Th2細胞數(shù)量，還可增加Th2分泌的細胞因子。胰島素促使Th1/Th2比值降低是胰島素重要的免疫調(diào)節(jié)作用，與胰島素的其他抗炎癥作用，包括抑制NF-kB，減少抗炎癥細胞因子以及促進抗炎癥細胞因子生成相一致。另有學者認為GDM孕婦體內(nèi)可產(chǎn)生過多的自由基，同時抗氧化能力下降，存在氧化應激[18]，而氧化應激可以促進CD4+T細胞向Th2表型分化[21]。但是，關于GDM患者Th1/Th2失衡的機制尚需進一步研究與探討。

綜上所述，GDM患者體內(nèi)存在著Th1/Th2失衡的現(xiàn)象，與其他妊娠并發(fā)癥不同，Th1/Th2失衡不是向Th1轉化，而是更向Th2轉化，Th2更加優(yōu)勢表達。這種失衡是否是GDM的發(fā)病機制之一尚需進一步深入研究。