印度黃檀化學(xué)成分分離及結(jié)構(gòu)鑒定

李然，徐長(zhǎng)瓊，祁龍凱，李靜，黎春輝，蔡聰，葉耀祥，林勵(lì)

(1.岳陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院，湖南 岳陽(yáng) 414000； 2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006； 3.廣東省湛江南藥試驗(yàn)場(chǎng)，廣東 遂溪 524338； 4.廣東中檀實(shí)業(yè)有限公司，廣東 臺(tái)山 529200； 5.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院，廣東 汕頭 515041)

降香來源于降香檀，具有理氣、活血化瘀、止痛止血的功效[1]。但降香檀資源因過度開采已面臨瀕危[2-3]，而人工栽培需要10年才初步結(jié)香，30年才能成材，無法滿足市場(chǎng)需求。

印度黃檀DalbergiasissooRoxb.為豆科黃檀屬(Dalbergia) 落葉半落葉大喬木，原產(chǎn)于印度、尼泊爾、巴基斯坦、孟加拉國(guó)、巴西、馬達(dá)加斯加等國(guó)[4]。印度黃檀為中藥降香原植物降香檀D.odorifera同屬植物，其心材曾進(jìn)口作為降香藥材使用，即《本草綱目》木部·降真香所載“俗呼舶上來者為番降”中的番降，具有化瘀止血、理氣止痛之功效[5]。該植物生長(zhǎng)迅速，種植5年生就能形成心材，10～15年基本成材[6]，有望緩解降香檀資源緊張的局勢(shì)。

印度黃檀心材主要含揮發(fā)油和黃酮類成分[7-8]，具有舒張血管、降血壓、降血脂、抗凝血、抗腫瘤、抗氧化、抗感染鎮(zhèn)痛及抑制破骨細(xì)胞功能下降等藥理活性[9-12]。黃酮類成分中黃檀素(黃檀內(nèi)酯)具有抗腫瘤、抗菌、抗氧化[13]等生物活性，對(duì)離體兔心有顯著增加冠脈流量、減慢心率、輕度增加心跳幅度的作用[14]，對(duì)兔血漿有微弱的抗凝作用[15]；4-甲氧基黃檀醌則表現(xiàn)出顯著的抗感染活性及抗骨肉瘤作用[16-17]。

化學(xué)成分是植物藥安全、有效、質(zhì)量評(píng)價(jià)的物質(zhì)基礎(chǔ)。迄今為止未見專門對(duì)印度黃檀心材主要化學(xué)成分研究的報(bào)道。本課題對(duì)國(guó)內(nèi)引種印度黃檀的乙醇提取液進(jìn)行萃取，得到石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇部位，對(duì)石油醚部位、三氯甲烷部位、乙酸乙酯部位運(yùn)用柱層析法、萃取法、溶劑法、結(jié)晶法等進(jìn)行分離提純，得到化合物單體。通過波譜數(shù)據(jù)分析，并參考各類文獻(xiàn)資料，對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。為印度黃檀質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立及資源開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器、材料與試藥

1.1 儀器

DRX-500型核磁共振儀(瑞士Bruker公司)；E2695型高效液相色譜儀(2998檢測(cè)器，Empower3軟件，美國(guó)Waters公司)；Waters Symmetry ODS C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；HPLC-QQQ-MS/MS高效液相串聯(lián)質(zhì)譜儀(Agilent公司，6410A)；Agilent HPLC 1290 系統(tǒng)；Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱(1.8 μm,2.1 mm× 100 mm)；BP 211D型電子分析天平(十萬(wàn)分之一，瑞士Sartorious公司)；XS 225A型電子分析天平(萬(wàn)分之一，瑞士Precisa公司)；Milli-Q Reference超純水系統(tǒng)(德國(guó)默克密理博公司)； WHF-203B 暗箱式三用紫外分析儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)；柱層析硅膠(80～100目，青島海洋化工廠分廠，批號(hào)：0100634)；反相硅膠C18(25～40 μm，Merk公司)；GF254薄層層析硅膠預(yù)制板(青島海洋化工廠)；博世GHO 10-82電刨[博世電動(dòng)工具(中國(guó))有限公司]；TC-15恒溫電熱套(1 500 W，海寧市新華醫(yī)療器械廠)；KQ500型超聲波清洗器(功率500 W，頻率40 kHz，昆山超聲儀器有限公司)；EYELA N-1000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本EYELA公司)；SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市英峪予華儀器廠)；DHG-9053A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(功率600 W，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；圓底燒瓶(10 L，廣州藍(lán)方化玻儀器有限公司)。

1.2 材料與試藥

實(shí)驗(yàn)藥材印度黃檀于2014年12月采自廣東省湛江市遂溪南藥試驗(yàn)場(chǎng)，樹齡40年，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心林勵(lì)研究員鑒定為豆科植物印度黃檀(DalbergiasissooRoxb.)的心材。標(biāo)本保存于廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心。

乙醇(EtOH)、環(huán)己烷(CYH)、乙酸乙酯(EtOAc)、乙酸(HAc)、甲醇(MeOH)、石油醚(PE)、三氯甲烷(CHCl3)、正丁醇(n-BuOH)等均為西隴化工有限公司分析純產(chǎn)品。提取用乙醇為工業(yè)級(jí)，甲醇(默克)、乙腈(默克)、H3PO4為色譜純，超純水為自制。

TLC顯色劑：10%(體積分?jǐn)?shù)，下同)H2SO4乙醇溶液、1%(質(zhì)量濃度，下同)AlCl3乙醇液、碘蒸氣等。

2 實(shí)驗(yàn)方法

取印度黃檀心材1 000 g，刨成薄片后粉碎并過2號(hào)篩，提取溶劑為85%(體積分?jǐn)?shù)，下同)乙醇，料液比為1∶4，加熱回流提取3次，每次120 min。趁熱濾過，合并濾液，放置12 h，取上清液，減壓濃縮成稀浸膏狀。依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取上述所得稀浸膏，萃取液與稀浸膏的比例為2∶1。分別減壓回收各萃取液溶劑，得各提取部位浸膏，待用。分別得到石油醚(油狀)、三氯甲烷(稠浸膏)、乙酸乙酯(稠浸膏)、正丁醇(稠浸膏)部位18.20、46.20、47.80、35.30 g，使用TLC和HPLC法分析印度黃檀醇提液及各部位化學(xué)成分，見圖1。可見正丁醇部位中各成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低，主要化學(xué)成分集中在石油醚部位、三氯甲烷部位和乙酸乙酯部位，故重點(diǎn)對(duì)石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯部位進(jìn)行成分分離。

2.1 HPLC檢測(cè)條件

色譜柱為Waters Symmetry ODS C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相為甲醇-0.2%(體積分?jǐn)?shù)，下同)H3PO4水溶液，梯度洗脫，程序見表1；流速為1 mL/min；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：0～15 min為280 nm，15～22 min為260 nm，22～27 min為350 nm，27～30 min為260 nm，30～52 min為293 nm。印度黃檀不同提取部位及醇提液的HPLC色譜圖見圖1。

表1 梯度洗脫條件Table 1 Gradient elution conditions

1.501.000.500.00AU0.500.400.300.200.100.00AU0.300.200.100.000.0150.0100.0050.0000.300.200.100.00AUAUAU10152025303540455005t/minABCDE

A.石油醚部位； B.三氯甲烷部位； C.乙酸乙酯部位； D.正丁醇部位； E.印度黃檀醇提液。

圖1印度黃檀不同提取部位及醇提液的HPLC色譜圖

Figure1HPLC chromatograms of different extraction parts and alcohol extract ofDalbergiasissooRoxb.

2.2 色譜柱填裝

2.2.1 硅膠柱 取80～100目硅膠適量，干法裝柱，用真空泵抽氣0.5 h，使裝填物致密，將拌樣后的硅膠均勻加入層析柱中備用，上端覆蓋少許石英砂，最上端加1團(tuán)脫脂棉以免加液時(shí)沖起裝填物。

2.2.2 C18反相硅膠柱 取反相硅膠適量，干法裝柱，上端塞1團(tuán)棉花，以免加液時(shí)沖起硅膠。先用甲醇沖洗2～3個(gè)柱體積，再用10%(體積分?jǐn)?shù)，下同)甲醇-水系統(tǒng)平衡反相硅膠柱，待用。

2.3 石油醚部位成分分離

2.3.1 梯度洗脫初步分離 將石油醚部位浸膏用少量乙酸乙酯溶解后加入一定量硅膠(80～100目)拌樣，揮干溶劑，充分研磨，以硅膠柱進(jìn)行柱層析，依次用環(huán)己烷-乙酸乙酯(體積比100∶0～100∶10)進(jìn)行梯度洗脫，每份收集洗脫液約100 mL，共收集48份，經(jīng)TLC 檢識(shí)，合并相同組分。

2.3.2 收集、檢識(shí)、合并及純化 分別用不同展開劑展開所收集到的流分，用1% AlCl3溶液顯色，相同組分合并，減壓濃縮。將第18～38流分合并，用少量甲醇溶解，并用環(huán)己烷萃取，取上層環(huán)己烷層，減壓回收溶劑，得黃色油狀物，為化合物Ⅰ。使用HPLC法檢測(cè)并用峰面積歸一化法計(jì)算，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于98.00%。

2.4 三氯甲烷部位成分分離

取甲醇溶解三氯甲烷部位稠浸膏(46.2 g)，加入1.5倍量硅膠(80～100目)拌樣，研磨均勻，水浴揮至無醇味，上樣。依次用環(huán)己烷-乙酸乙酯(體積比100∶0～0∶100)進(jìn)行梯度洗脫，每份收集約100 mL，共收集252份。經(jīng)TLC檢視，相同流分合并。結(jié)果：第 47～77 流分合并，減壓濃縮，析出黃色針狀晶體，用無水乙醇洗滌后重結(jié)晶，得化合物Ⅱ；第119～165 流分合并，減壓濃縮，冷藏放置濃縮液，析出無色透明晶體，經(jīng)環(huán)己烷-乙酸乙酯體系重結(jié)晶，得化合物Ⅲ；第178～212 流分合并，減壓濃縮，用少量乙酸乙酯溶解后加入環(huán)己烷至稍渾濁，放置析出米黃色粉末，得化合物Ⅳ。

2.5 乙酸乙酯部位成分分離

2.5.1 硅膠柱色譜初步分離 取甲醇溶解乙酸乙酯部位浸膏(47.8 g)，用1.5倍硅膠(80～100目)拌樣，研磨均勻，水浴鍋上揮至無醇味，上樣。用環(huán)己烷-乙酸乙酯(體積比100∶0～0∶100)進(jìn)行梯度洗脫，每份收集約100 mL，共收集145份，經(jīng)TLC檢視，相同流分合并。合并第 21～35流分，減壓回收溶劑，待用；合并第 64～144流分，減壓回收溶劑，待用。

2.5.2 C18反相硅膠柱色譜分離 用少許甲醇溶解收集到的21～35、64～144流分，加入1.5倍量C18反相硅膠拌樣，水浴揮至無醇味，上樣。依次用甲醇-水(體積比10∶90～100∶0)進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)TLC展開劑展開各流分，1%AlCl3顯色，在254、365 nm紫外光下檢視，相同組分合并，濃縮，放置析晶。結(jié)果：第21～35流分經(jīng)C18柱后的第13～23流分進(jìn)行合并，放置揮發(fā)溶劑，析出白色粉末，甲醇重結(jié)晶，得到化合物Ⅶ；第64～144 流分經(jīng)C18反相硅膠柱后的第12～22流分進(jìn)行合并，放置24 h，析出棕色沉淀，三氯甲烷-甲醇(1∶1)重結(jié)晶后得到化合物Ⅴ；第64～144流分經(jīng)C18反相硅膠柱后第26～34流分合并，放置24 h，析出淺棕色沉淀，用乙酸乙酯重結(jié)晶后得到淺棕色粉末狀化合物Ⅵ。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物Ⅰ：棕黃色油狀物，易溶于石油醚、三氯甲烷；易被氧化，被氧化后顏色加深，宜避光密封保存；最大吸收波長(zhǎng)為293.2 nm；經(jīng)HPLC檢測(cè)并用峰面積歸一化法計(jì)算得其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.00%；EI-MSm/z，分子離子峰293.3[M+Na]+；核磁數(shù)據(jù)歸屬：1H NMR(CDCl3，500 MHz)δ：6.61(1H，s，H-3)，6.95(1H，s，H-6)，5.28(1H，br.d，J=6.6 Hz，H-7)，6.43(1H，ddd，J=17.1，10.2，6.6 Hz，H-8)，5.09(1H，dt，J=17.1，1.6 Hz，H-9a)，5.34(1H，dt，J=10.2，1.6 Hz，H-9b)，7.35-7.41(4H，m，H-2′，H-3′，H-5′，H-6′)，7.29(1H，br.t，J=6.7 Hz，H-4′)，3.80(3H，s，2-OCH3)，3.87(3H，s，4-OCH3)，5.77(1H，br.s，OH)。13C NMR(CDCl3，125 MHz)δ(124.1(C-1)，150.2(C-2)，97.2(C-3)，145.0(C-4)，139.1 (C-5)，115.2(C-6)，46.7(C-7)，140.3(C-8)，115.6 (C-9)，143.0(C-1′)，127.8(C-2′，C-6′)，128.3(C-3′，C-5′)，125.7(C-4′)，55.7(2-OCH3)，56.5(4-OCH3)。經(jīng)與文獻(xiàn)[18]對(duì)照，化合物Ⅰ與dalbergiphenol的波譜數(shù)據(jù)一致，故鑒定為dalbergiphenol，化學(xué)名：2,4-二甲氧基-5-[(s)-1苯基-2-丙烯基]苯酚。

化合物Ⅱ：黃色針狀結(jié)晶，易溶于三氯甲烷、乙酸乙酯，微溶于甲醇；易被氧化，宜避光密封保存；最大吸收波長(zhǎng)為262.3 nm；經(jīng)HPLC檢測(cè)并用峰面積歸一化法計(jì)算得其質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于96.00%；mp：115～117 ℃； TLC檢測(cè)中，顯色前在254、365 nm紫外光下檢視無熒光，經(jīng)1% AlCl3溶液顯色后在365 nm紫外光下檢視顯黃色熒光，可見光下顯黃色；EI-MSm/z，分子離子峰255.1[M+H]+；核磁數(shù)據(jù)歸屬：1H NMR(CDCl3，500 MHz)δ：5.92(1H，s，H-3)，6.49(1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，4.93(1H，br.d，J=6.7 Hz，H-7)，6.10(1H，ddd，J=17.2，10.3，6.7 Hz，H-8)，5.00(1H，dt，J=17.2，1.3 Hz，H-9a)，5.28(1H，dt，J=10.3，1.3 Hz，H-9b)，7.19(2H，br.d，J=7.4 Hz，H-2′，H-6′)，7.32(2H，br.t，J=7.4 Hz，H-3′，H-5′)，7.24(1H，br.t，J=7.4Hz，H-4′)，3.81(3H，s，4-OCH3)。13C NMR(CDCl3，125 MHz)δ：151.0(C-1)，186.3(C-2)，107.9(C-3)158.4(C-4)，182.4(C-5)，131.6(C-6)，47.0(C-7)，137.2(C-8)，118.2(C-9)，139.3(C-1′)，128.5(C-2′，C-6′)，128.7(C-3′，C-5′)，127.2(C-4′)，56.3(4-OCH3)。經(jīng)對(duì)比，波譜數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[19]中化合物5的波譜數(shù)據(jù)一致，故判定化合物Ⅱ?yàn)?-甲氧基黃檀醌(4-methoxydalbergione)。

化合物Ⅲ：無色透明針狀結(jié)晶，易溶于乙酸乙酯、甲醇等有機(jī)溶劑；最大吸收波長(zhǎng)為236.3、350.5 nm； TLC檢測(cè)中，用1% AlCl3乙醇溶液顯色后在365 nm紫外光下為天藍(lán)色熒光，提示該化合物為黃酮類化合物。EI-MSm/z，分子離子峰587.1[2M+Na]+；核磁數(shù)據(jù)歸屬：1H NMR(CDCl3，500 MHz)δ：6.24 (1H，s，H-3)，6.91(1H，s，H-5)，6.86(1H，s，H-8)，7.43-7.56(5H，m，H-2′，H-3′，H-4′，H-5′，H-6′)，3.75(3H，s，6-OCH3)，3.96(3H，s，7-OCH3)。13C NMR(CDCl3，125 MHz)δ：161.4(C-2)，112.3(C-3)，155.6(C-4)，111.3(C-4a)，107.3 (C-5)，146.0(C-6)，152.8(C-7)，100.2(C-8)，150.1(C-8a)，135.7(C-1′)，128.2(C-2′，C-6′)，128.9(C-3′，C-5′)，129.6(C-4′)，56.3(6-OCH3)，56.4(7-OCH3)。化合物Ⅲ的波譜數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[20]中化合物O-methyldalbergin的數(shù)據(jù)一致，故鑒定為黃檀素甲醚(O-methyldalbergin)。

化合物Ⅳ：米黃色顆粒狀結(jié)晶，易溶于乙酸乙酯、甲醇等有機(jī)溶劑；最大吸收波長(zhǎng)為260.0、354.1 nm；mp：210～212 ℃； TLC檢測(cè)中，用1% AlCl3乙醇溶液顯色后在365 nm紫外光檢視下為藍(lán)綠色熒光，提示該化合物為黃酮類化合物。EI-MSm/z，分子離子峰559.3[2M+Na]+；核磁數(shù)據(jù)歸屬：1H NMR(CDCl3，500 MHz)δ：6.25(1H，s，H-3)，6.99(1H，s，H-5)，6.90(1H，s，H-8)，7.40-7.52(5H，m，H-2′，H-3′，H-4′，H-5′，H-6′)，3.99(3H，s，7-OCH3)，5.61(1H，s，6-OH)。13C NMR(CDCl3，125 MHz)δ：161.5(C-2)，112.5(C-3)，155.7(C-4)，112.3(C-4a)，110.5(C-5)，142.4(C-6)，150.0(C-7)，99.6(C-8)，149.3(C-8a)，135.6(C-1′)，128.3(C-2′，C-6′)，128.8(C-3′，C-5′)，129.5(C-4′)，56.4(7-OCH3)。經(jīng)與文獻(xiàn)[20]核對(duì)，鑒定化合物Ⅳ為黃檀素(dalbergin)。

化合物Ⅴ：棕色結(jié)晶，易溶于甲醇；最大吸收波長(zhǎng)為237.5、277.8、344.5 nm。EI-MSm/z，分子離子峰323.3[M+Na]+；核磁數(shù)據(jù)歸屬：1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ：5.29(1H，dd，J=13.3，2.9 Hz，H-2)，2.99(1H，dd，J= 17.0，13.3 Hz，H-3ax)，2.66 (1H，dd，J=17.0，2.9 Hz，H-3)，7.18(1H，s，H-5)，6.57(1H，s，H-8)，6.93(1H，d，J=1.8 Hz，H-2′)，6.78(1H，d，J=8.1 Hz，H-5′)，6.80(1H，dd，J=8.1，1.8 Hz，H-6′)，3.89(3H，s，7-OCH3)。13C NMR(CD3OD,125 MHz)δ：81.3(C-2)，45.0(C-3)，193.8(C-4)，111.1(C-5)，142.8(C-6)，157.2(C-7)，101.2(C-8)，159.2(C-9)，114.6(C-10)，132.2(C-1′)，114.7(C-2′)，146.7(C-3′)，146.4(C-4′)，116.2(C-5′)，119.2(C-6′)，56.7(7-OCH3)。經(jīng)與文獻(xiàn)[21-22]對(duì)照，化合物Ⅴ與3,4,6-trihydroxy-7-methoxyflavanone的波譜數(shù)據(jù)一致，故鑒定為3,4,6-三羥基-7-甲氧基環(huán)烷酮(3,4,6-trihydroxy-7-methoxyflavanone)。

化合物Ⅵ：棕黃色顆粒狀結(jié)晶；紫外最大吸收波長(zhǎng)為238.7、280.1、345.7 nm。mp 212～215 ℃，易溶于乙醇，甲醇；EI-MSm/z，分子離子峰310.3[M+Na]+；核磁數(shù)據(jù)歸屬：1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ：5.23(1H，dd，J=13.3，2.9 Hz，H-2)，2.95(1H，dd，J=17.0，13.3 Hz，H-3ax)，2.63(1H，dd，J=17.0，2.9 Hz，H-3eq)，7.17(1H，s，H-5)，6.38(1H，s，H-8)，6.91(1H，br.S，H-2′)，6.76(1H，d，J=8.1 Hz，H-5′)，6.78(1H，br.D，J= 8.1 Hz，H-6′)。13C NMR(CD3OD,125 MHz)δ：81.1(C-2)，45.0(C-3)，193.8(C-4)，111.4(C-5)，142.1(C-6)，156.0(C-7)，104.2(C-8)，159.3(C-9)，114.0(C-10)，132.2(C-1′)，114.6(C-2′)，146.7(C-3′)，146.4(C-4′)，116.2(C-5′)，119.2(C-6′)。經(jīng)與文獻(xiàn)[21]對(duì)照，化合物Ⅵ與plathymenin的波譜數(shù)據(jù)一致，故鑒定為黃蘇木素(plathymenin)。

化合物Ⅶ：黃白色粉末，易溶于三氯甲烷；經(jīng)HPLC檢測(cè)并用峰面積歸一化法計(jì)算得其質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于98.00%；mp：216～218 ℃； TLC檢測(cè)中，用1% AlCl3乙醇溶液顯色后在254、365 nm紫外光下檢視，均顯亮黃色熒光。EI-MSm/z，分子離子峰284[M+H]+；核磁數(shù)據(jù)歸屬：1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)：δ12.92(1H，s，5-OH)，10.87(1H，s，7-OH)，8.35(1H，s，2-H)；δ7.5(2H，dd，J=2.75，8.93 Hz，H-2′，6′)，7.0(2H，dd，J=2.99，8.96 Hz，H-3′，5)；δ6.39(1H，d，J=2.14 Hz，H-8)，6.23(1H，d，J=2.14 Hz，H-6)；δ3.79(3H，s，4′-OCH3)。13C NMR(400 MHz，DMSO-d6)：δ180.5(C-4)，164.28(C-7)，161.95(C-5)，159.12(C-4′)，157.55(C-9)，154.18(C-2)，130.10(C-2′)，130.10(C-6′)，122.89(C-3)，121.92(C-1′)，113.66(C-3′)，113，66(C-5′)，104.43(C-10)，98.98(C-6)，93.66(C-8)，55.12(4′-OCH3)。經(jīng)鑒定，該物質(zhì)為鷹嘴豆芽素A(biochanin A)。

以上化合物的分子結(jié)構(gòu)式見表1，混合對(duì)照品、醇提物溶液的HPLC色譜圖見圖2。

表2 印度黃檀的化學(xué)成分Table 2 Chemical constituents of Dalbergia sissoo Roxb.

表2 (續(xù))

0.800.600.400.200.000.150.100.050.00AUAU10152025303540455005t/minBA7654321123456

1. 2,4二甲氧基-5-[(s)-1苯基-2-丙烯基]苯酚； 2 .4-甲氧基黃檀醌； 3.黃檀素甲醚； 4.黃檀素； 5. 3,4,6-三羥基-7-甲氧基環(huán)烷酮； 6.黃蘇木素； 7.鷹嘴豆芽素A。

圖2印度黃檀主要化學(xué)成分混合對(duì)照品溶液(A)、印度黃檀醇提液(B)的HPLC色譜圖

Figure2HPLC chromatograms of monomers mixed solution (A) and alcohol extract ofDalbergiasissooRoxb.(B)

4 結(jié)論

通過硅膠柱、C18反相硅膠柱2種柱色譜方法，結(jié)合萃取法、溶劑法、重結(jié)晶法等對(duì)印度黃檀醇提物石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯萃取部位進(jìn)行分離提純。運(yùn)用質(zhì)譜、核磁等波譜數(shù)據(jù)，并參考文獻(xiàn)資料，對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。從石油醚部位分離得到化合物Ⅰ，鑒定為2,4-二甲氧基-5-[(s)-1-苯基-2-丙烯基]苯酚(dalbergiphenol)。三氯甲烷部位分離得到化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，分別鑒定為4-甲氧基黃檀醌(4-methoxydalbergione)、黃檀素甲醚(O-methyldalbergin)和黃檀素(dalbergin)，并使用HPLC峰面積歸一法測(cè)定質(zhì)量分?jǐn)?shù)[23]。乙酸乙酯部位分離純化得到化合物Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ，分別鑒定為3,4,6-三羥基-7-甲氧基環(huán)烷酮(3,4,6-trihydroxy-7-methoxyflavanone)、黃蘇木素(plathymenin)和鷹嘴豆芽素A (biochanin A)。通過HPLC峰面積歸一化法計(jì)算，2,4-二甲氧基-5-[(s)-1-苯基-2-丙烯基]苯酚、4-甲氧基黃檀醌、黃檀素甲醚、黃檀素、黃蘇木素等5種成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占總成分的90%以上，為印度黃檀乙醇提取物中的主要成分。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)7種化合物均為黃酮類化合物，其中有2種為新黃酮結(jié)構(gòu)，2種具有查爾酮結(jié)構(gòu)，2種有二氫黃酮類母體結(jié)構(gòu)，1種有異黃酮類結(jié)構(gòu)。黃酮類化合物具有多種生物活性，后期研究將對(duì)提取分離的單體化合物進(jìn)行生物活性研究，為印度黃檀的資源開發(fā)利用提供更充分、科學(xué)、可靠的研究基礎(chǔ)和依據(jù)。