抑郁癥大鼠海馬內(nèi)少突膠質(zhì)細(xì)胞的體視學(xué)研究

韓麗君，王志恒，尚婷惠子，陳萍，董海影*

（1．齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院病理學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006；2．齊齊哈爾五龍街道新化社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，黑龍江 齊齊哈爾 161006）

抑郁癥是嚴(yán)重危害人類健康的一種精神疾病。因此，探討抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，探索抑郁癥治療的新靶點(diǎn)，對(duì)于改善抑郁癥患者的抑郁狀態(tài)和生活質(zhì)量具有重要意義。研究表明，少突膠質(zhì)細(xì)胞功能障礙，尤其是當(dāng)少突膠質(zhì)細(xì)胞包圍軸突時(shí)形成的結(jié)節(jié)和軸突的突然剝脫，在神經(jīng)異常中起著重要作用。因此，少突膠質(zhì)細(xì)胞可能與抑郁癥的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，而海馬是與抑郁癥相關(guān)的重要腦區(qū)，海馬中各亞區(qū)的少突膠質(zhì)細(xì)胞在發(fā)生抑郁時(shí)的確切變化需要探索，本文基于體視學(xué)對(duì)此進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

選取動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的周齡在4到6周的雄性SD大鼠50只，體重均在150到200克之間，隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)組30只，對(duì)照組20只。每5只一籠（模型組和實(shí)驗(yàn)組大鼠都需要單籠飼養(yǎng)）并提供足夠的食物和水，在室溫為20℃、適宜生長(zhǎng)的環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)，飼養(yǎng)和治療遵循實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物保護(hù)和使用指導(dǎo)。1周后將實(shí)驗(yàn)組大鼠置于一系列慢性卻不可預(yù)知的應(yīng)激，其他條件與對(duì)照組一致條件下飼養(yǎng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

取材，切片，染色，體視學(xué)分析：觀察組和實(shí)驗(yàn)組每組隨機(jī)選16只大鼠，腹腔注射1%戊巴比妥鈉。將大鼠胸腔迅速打開(kāi)暴露心臟，從左心室頂端進(jìn)針，再將針頭用止血鉗固定。將右心耳切開(kāi)灌注約80 ml生理鹽水再灌注4%（多聚甲醛）聚甲醛直到頸部僵硬。打開(kāi)顱骨腔，取出顱骨，取出完整的腦組織，置于PBS制備的蔗糖溶液中3天。溶液的濃度分別為10%、20%和30%。將大腦組織植入OCT，在冷凍切片機(jī)上制作60微米的連續(xù)切片。所有切片在0.01 mol/L PBS溶液中漂浮。室溫（21～23℃），洗凈0.01 mol/L PBS，5分鐘×3次，輕輕搖勻。用0.3% Triton洗滌15分鐘，洗四次，放入封閉液中封閉，依次敷一抗、二抗、三抗，最后進(jìn)行DAB顯色，顯影時(shí)間根據(jù)每張膠片的著色程度進(jìn)行調(diào)整，約1分鐘，用蘇木素重復(fù)染色、脫水、封片、在體視學(xué)設(shè)備上，用專業(yè)體視學(xué)軟件對(duì)少突膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。大鼠海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG區(qū)在4倍物鏡下劃定。在每個(gè)切片的每個(gè)區(qū)域選擇大約12～30個(gè)視野，在每個(gè)動(dòng)物的（每張切片）海馬的每個(gè)亞區(qū)域選擇大約400個(gè)視野。在100倍油鏡下用體視學(xué)軟件自動(dòng)記錄并計(jì)數(shù)海馬各亞區(qū)少突膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理和分析，P＜0.05為差異，則代表相應(yīng)數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的意義。

2 結(jié) 果

對(duì)照組各區(qū)的細(xì)胞排列緊密，結(jié)構(gòu)清楚，細(xì)胞邊緣光滑完整，而實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞排列松散，形態(tài)各異，細(xì)胞邊緣輪廓不清，且少突膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目密度較對(duì)照組減少。經(jīng)分析兩者比較；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

實(shí)驗(yàn)組大鼠海馬CA1區(qū)少突膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組無(wú)明顯改變，而CA3區(qū)和的少突膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量則明顯低于對(duì)照組，見(jiàn)表2。

表1 兩組細(xì)胞密度比較（±s）

表1 兩組細(xì)胞密度比較（±s）

分組少突膠質(zhì)細(xì)胞密度（個(gè)/cm2）實(shí)驗(yàn)組 3101.25±170.23對(duì)照組 4251.46±200.48 t 23.4578 P 0.003

表2 兩組大鼠海馬各區(qū)少突膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目比較（±s）

表2 兩組大鼠海馬各區(qū)少突膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目比較（±s）

分組 CA1區(qū) DG CA3區(qū)實(shí)驗(yàn)組 32018.0±10332.3 30173.8±6048.2 27887.8±4483.0對(duì)照組 45637.3±8879.2 48073.7±9901.2 36542.3±5909.9 t 23.4785 36.4877 42.8937 P 0.149 0.019 0.004

3 討 論

結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組CA1區(qū)少突膠質(zhì)細(xì)胞與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化，而CA3區(qū)和DG區(qū)少突膠質(zhì)細(xì)胞與對(duì)照組相比明顯減少，這進(jìn)一步表明，誘發(fā)抑郁的刺激不能減少CA1區(qū)成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞總數(shù)，但CA3區(qū)和DG區(qū)少突膠質(zhì)細(xì)胞總數(shù)明顯降低。因此，本研究采用體視學(xué)方法研究海馬中少突膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量。此外，海馬的傳入纖維主要由內(nèi)嗅皮質(zhì)的軸突起，投射到海馬齒狀回的整個(gè)長(zhǎng)度，投射到齒狀回的分子層和CA1的腔隙分子層。這兩層纖維的數(shù)量最大，這是海馬接受外部壓力的主要信息來(lái)源。因此，推測(cè)慢性應(yīng)激可能影響CA1區(qū)的某些特定區(qū)域，如密集分布的腔隙分子層。這種推測(cè)需要在以后的實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步研究和確認(rèn)。研究發(fā)現(xiàn)，兒童期較大的外部刺激可影響海馬的發(fā)育和成熟，導(dǎo)致海馬體積減少，尤其是CA3和DG的體積較正常人明顯減少，無(wú)不顯示海馬內(nèi)少突膠質(zhì)細(xì)胞的減少與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

體視學(xué)研究結(jié)果表明，抑郁癥大鼠海馬CA3區(qū)和DG中少突膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯減少，而CA1區(qū)無(wú)明顯變化。研究結(jié)果為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)抑郁癥的病理變化，尋找抑郁癥治療的結(jié)構(gòu)靶點(diǎn)和切入點(diǎn)提供了重要的科學(xué)依據(jù)。