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    妊娠期糖尿病孕婦血清miR-126、VEGF表達(dá)及其與胰島素抵抗的關(guān)系

    2019-03-07 01:52:16鄒蘭靈
    關(guān)鍵詞:抵抗引物孕婦

    鄒蘭靈

    重慶市資陽(yáng)市第一人民醫(yī)院(641300)

    妊娠期糖尿病(GDM)是糖代謝異常導(dǎo)致的病癥[1],以胰島素抵抗(IR)與胰島β細(xì)胞功能異常為主要病理機(jī)制[2]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)可對(duì)胎盤(pán)血管構(gòu)成與功能調(diào)節(jié)發(fā)揮重要功能[3]。研究指出部分微小核糖核酸(miRNAs)與胰島素生成及分泌有關(guān)[4]。相關(guān)研究表明微小核糖核酸-126(miR-126)在糖尿病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要功能,并對(duì)其并發(fā)癥發(fā)生有影響[5]。目前GDM孕婦中miR-126、VEGF水平相關(guān)研究較少,本研究探討GDM孕婦血清miR-126、VEGF水平及與胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)關(guān)系,為提高臨床治療效果提供參考。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    納入標(biāo)準(zhǔn):①單胎;②孕前無(wú)糖尿病史;③有巨大兒、胎位異常、胎盤(pán)功能不良等指征者;④無(wú)血液系統(tǒng)性疾??;⑤所有孕婦知情且簽署同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn):①孕前患有心臟病及高血壓等疾?。虎诨加袑m內(nèi)感染或感染性疾病等;③嚴(yán)重肝腎功能損傷;④患有惡性腫瘤者;⑤臨床資料不完整者。收集2017年2月—2018年1月在本院剖宮產(chǎn)的GDM孕婦76例(GDM組),GDM符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。隨機(jī)選取同期剖宮產(chǎn)且糖耐量正常孕婦68例作為對(duì)照組,觀察對(duì)象亦簽署知情同意書(shū)。

    1.2 檢測(cè)方法

    1.2.1 樣本采集 兩組孕婦于剖宮產(chǎn)術(shù)前24 h內(nèi)抽取空腹靜脈血,離心取血清-80℃保存待測(cè)。

    1.2.2 血清miR-126表達(dá)量 qRT-PCR檢測(cè)。按照Trizol試劑盒(美國(guó)Invitrogen公司)說(shuō)明書(shū)提取總RNA,按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒(天根生化科技有限公司)說(shuō)明書(shū)將RNA反轉(zhuǎn)錄為c DNA,最后按照SYBR Gren RCR master mix試劑(天根生化科技有限公司)說(shuō)明配反應(yīng)體系并加樣,qRT-PCR反應(yīng)體系為20μl:SYBR Premix Ex TaqⅡ(2×)10μl,c DNA 4.0μl,上下游引物各1.0μl,dd H2O 4.0μl。程序設(shè)定為:92℃1 min,95℃30 s,56℃30 s,72℃30 s,共42個(gè)循環(huán)。其中miR-126以U6為內(nèi)參基因,miR-126上游引物序列為5’-GGGGTCGTACCGTGAGT-3’,下游引物序列為5’-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3’;U6上游引物序列為5’-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3’,下游引物序列為5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’,引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司設(shè)計(jì)合成。反應(yīng)結(jié)束后收集數(shù)據(jù),對(duì)所得數(shù)據(jù)循環(huán)閾值(Ct值)進(jìn)行分析,采用2-ΔΔCt相對(duì)定量法計(jì)算miR-126的相對(duì)表達(dá)量

    1.2.3 血 清VEGF水平 采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法并嚴(yán)格按照試劑盒(美國(guó)R&D公司)說(shuō)明書(shū)檢測(cè)血清VEGF水平。

    1.3 觀察指標(biāo)

    測(cè)量?jī)山M孕婦身高、體質(zhì)量并計(jì)算體質(zhì)指數(shù)(BMI),禁食10 h后分別取空腹靜脈血清,采用葡萄糖氧化酶法檢測(cè)空腹血糖(FBG)水平,放射免疫法檢測(cè)空腹胰島素(FINS)水平,穩(wěn)態(tài)模型胰島抵抗指數(shù)(HOMA-IR)評(píng)價(jià)胰島素抵抗程度,HOMA-IR=(FINS×FPG)/22.5。按照檢測(cè)試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)說(shuō)明書(shū)操作并采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)糖化血紅蛋白(Hb Alc)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)及低密度脂蛋白(LDL-C)水平。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS21.0數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)均以(±s)表示,組間用t檢驗(yàn);Pearson法對(duì)GDM孕婦血清miR-126、VEGF與HOMA-IR進(jìn)行相關(guān)性分析;采用logistic法對(duì)GDM孕婦胰島素抵抗的相關(guān)因素進(jìn)行分析,以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組孕婦一般資料比較

    兩組孕婦年齡、孕周及TC比較無(wú)差異(P>0.05);GDM組孕婦BMI、Hb Alc、FINS、FPG、TG、LDL-C水平均高于對(duì)照組,HDL-C水平低于對(duì)照組(均P<0.05)。見(jiàn)表1。

    表1 兩組一般資料比較(±s)

    表1 兩組一般資料比較(±s)

    項(xiàng) 目 對(duì)照組(n=68) GDM組(n=76) t P年 齡(歲) 27.3±1.7 27.2±1.3 0.160 0.873孕 周 38.3±1.2 38.8±2.2 1.639 0.103 BMI(kg/m2) 27.3±1.4 27.9±1.7 2.215 0.028 Hb Alc(%) 5.74±1.56 7.13±2.14 4.409 0.000 FINS(m U/L) 7.84±3.15 12.28±4.02 7.316 0.000 FPG(mmol/L) 3.74±1.05 5.54±2.31 5.902 0.000 TC(mmol/L) 4.25±2.18 4.71±1.85 1.369 0.173 TG(mmol/L) 1.03±0.41 2.12±0.68 11.480 0.000 LDL-C(mmol/L) 2.37±1.52 3.02±1.55 2.535 0.012 HDL-C(mmol/L) 1.45±0.12 1.23±0.15 9.644 0.000

    2.2 兩組孕婦血清指標(biāo)及HOMA-IR比較

    GDM組孕婦血清miR-126水平低于對(duì)照組,血清VEGF、HOMA-IR水平均高于對(duì)照組(均P<0.05),詳見(jiàn)表2。

    表2 兩組血清指標(biāo)及HOMA-IR比較(±s)

    表2 兩組血清指標(biāo)及HOMA-IR比較(±s)

    組別 例數(shù) miR-126 VEGF(ng/L) HOMA-IR對(duì) 照 組 68 1.07±0.26 12.38±6.39 1.84±0.31 GDM組 76 0.57±0.16 23.57±9.22 3.28±1.53 t 14.055 8.369 7.620 P 0.000 0.000 0.000

    2.3 GDM組孕婦血清指標(biāo)與HOMA-IR相關(guān)性

    Pearson法分析顯示,miR-126與VEGF、HOMA-IR均呈負(fù)相關(guān),而VEGF與HOMA-IR呈正相關(guān)(均P<0.05),見(jiàn)圖1、圖2、圖3。

    圖1 血清miR-126與VEGF相關(guān)性

    圖2 血清miR-126與HOMA-IR相關(guān)性

    圖3 血清VEGF與HOMA-IR相關(guān)性

    2.4 GDM組孕婦發(fā)生IR的相關(guān)因素分析

    將影響GDM孕婦發(fā)生IR的相關(guān)因素進(jìn)行l(wèi)ogistic分析,結(jié)果顯示FINS、FPG、miR-126、VEGF與HOMA-IR均為影響GDM孕婦發(fā)生IR的危險(xiǎn)因素,見(jiàn)表3。將有意義的單因素進(jìn)行多因素分析顯示,F(xiàn)INS、HOMA-IR、血清miR-126與VEGF水平均為影響GDM孕婦發(fā)生IR的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,見(jiàn)表4。

    表3 影響GDM孕婦胰島素抵抗的logistic單因素分析

    表4 影響GDM孕婦胰島素抵抗的logistic多因素分析

    3 討論

    GDM孕婦以糖代謝異常為主要特征[7],血糖含量增加可促使游離脂肪酸與三酰甘油濃度升高并抑制胰島素分泌[8]。GDM發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜,目前主要從胰島素抵抗及其分泌功能下降兩方面展開(kāi)研究,原因在于妊娠過(guò)程中性激素的分泌增加可降低胰島素敏感性進(jìn)而產(chǎn)生胰島素抵抗[9]。miRNAs是一類(lèi)具有調(diào)控功能的內(nèi)源性非編碼RNA分子,與糖尿病患者胰島素抵抗有關(guān)[10]。miR-126可通過(guò)負(fù)向調(diào)控VEGF表達(dá)參與糖尿病視網(wǎng)膜病變過(guò)程[11]。因此,本研究主要探討miR-126、VEGF與GDM孕婦胰島素抵抗的關(guān)系。

    miR-126具有較高的保守性,可特異性參與呼吸系統(tǒng)與生殖系統(tǒng)等生理病理過(guò)程[12]。研究發(fā)現(xiàn)[13],Ⅰ型糖尿病患者血漿中miR-126表達(dá)水平與LDL-C呈正相關(guān),miR-126可引發(fā)脂質(zhì)代謝異常。另有研究表明[14],miR-126可調(diào)控靶基因(胰島素受體底物)表達(dá)進(jìn)而引發(fā)胰島素抵抗,從而導(dǎo)致GDM發(fā)生。本研究顯示,GDM組孕婦血清miR-126、HDL-C表達(dá)低于對(duì)照組,血清Hb Alc、FINS、FPG、TG、LDL-C水平均高于對(duì)照組,與文獻(xiàn)報(bào)道相似[15]。上述研究推測(cè),GDM孕婦脂質(zhì)代謝異常導(dǎo)致胰島素受體降低進(jìn)而產(chǎn)生胰島素抵抗。進(jìn)一步分析,GDM孕婦血清miR-126表達(dá)水平與HOMA-IR呈負(fù)相關(guān),說(shuō)明GDM孕婦表現(xiàn)出明顯的胰島素抵抗,提示血清miR-126水平降低可影響GDM體內(nèi)脂質(zhì)代謝過(guò)程進(jìn)而促使GDM孕婦產(chǎn)生IR。

    VEGF通過(guò)特異性刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)進(jìn)而形成新生血管,同時(shí)在妊娠期間胎盤(pán)血管形成中發(fā)揮中心調(diào)控功能[16]。妊娠期孕婦胰島素受體相關(guān)信號(hào)通路與炎癥因子的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑緊密相關(guān),炎癥因子可促使胰島素受體底物磷酸化并阻止胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑最終導(dǎo)致孕婦產(chǎn)生IR[17]。有研究表明VEGF與炎癥因子密切相關(guān)并可影響患者炎癥反應(yīng)過(guò)程[18]。本研究GDM組孕婦血清VEGF水平高于對(duì)照組,且與HOMA-IR呈正相關(guān),提示GDM孕婦血清VEGF水平與炎癥因子相互作用并可影響胰島素受體相關(guān)信號(hào)通路進(jìn)而促使IR的產(chǎn)生。研究表明miR-126可通過(guò)負(fù)向調(diào)控VEGF表達(dá)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)揮調(diào)節(jié)功能[19]。與此相似,本研究結(jié)果顯示miR-126與VEGF呈負(fù)相關(guān),說(shuō)明miR-126可通過(guò)調(diào)控VEGF表達(dá)并參與GDM孕婦IR發(fā)生過(guò)程。本研究多因素分析結(jié)果顯示,F(xiàn)INS、HOMA-IR、血清miR-126與VEGF水平均為影響GDM孕婦發(fā)生IR的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,提示血清miR-126與VEGF水平均對(duì)GDM孕婦發(fā)生IR有重要預(yù)測(cè)價(jià)值,可能通過(guò)參與脂類(lèi)代謝或炎癥反應(yīng)進(jìn)而參與GDM孕婦IR生成過(guò)程。

    綜上所述,血清miR-126與VEGF水平變化與GDM發(fā)生及進(jìn)展有關(guān),且均可能為GDM孕婦發(fā)生IR的機(jī)制,臨床檢測(cè)GDM孕婦血清miR-126與VEGF水平有助于監(jiān)測(cè)病情進(jìn)展及IR的發(fā)生。本研究存在不足之處,miR-126與VEGF參與GDM孕婦IR發(fā)生的具體作用機(jī)制還有待深入研究。

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