小規(guī)格藥物粉末混合均勻性評價取樣方式研究*

鄭華樟,張均平,羅麗娟,朱文濤,歐陽婷

(江西青峰藥業(yè)有限公司藥物研究中心, 江西 贛州 341000)

小規(guī)格藥物是指每一個單劑標(biāo)示量小于25 mg或主藥含量小于每一個單劑重量25%[1]。物料充分混合均勻是保證固體制劑質(zhì)量均一性和穩(wěn)定性的關(guān)鍵，因此小規(guī)格藥物粉末混合工藝是固體制劑生產(chǎn)的關(guān)鍵工序。評價藥物粉末是否混合均勻是藥品生產(chǎn)過程中一項(xiàng)重要的中間產(chǎn)品控制策略，而評價藥物粉末混合均勻性的取樣方式是否合理，對于評價藥物粉末混合均勻性尤為重要[2-7]。

2003年11月 FDA發(fā)布了《粉末混合和單位成品制劑分層取樣和評估的工業(yè)指導(dǎo)原則》[8]，該指導(dǎo)原則描述了藥物粉末混合均勻性評價取樣方式。2010版《口服固體制劑GMP實(shí)施指南》[9]同樣對藥物粉末混合均勻性評價取樣方式進(jìn)行了闡述。參考上述指導(dǎo)原則，本文比較了不同的取樣方式對小規(guī)格藥物粉末混合均勻性評價的影響。

藥物A含有多個酰胺結(jié)構(gòu)，在酸性、堿性條件可發(fā)生降解。藥物A為結(jié)晶性粉末，存在引濕性，粒徑較小d(0.9)<50 μm，有一定粘附性。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑SYH-10三維運(yùn)動混合機(jī)(常州市震華干燥設(shè)備有限公司)，ZP14旋轉(zhuǎn)式壓片機(jī)(北京國藥龍立科技有限公司)，LE204E/02分析天平(瑞士梅特勒-托利多集團(tuán)股份有限公司)，SHZ-B水浴恒溫振蕩器(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司)，安捷倫1260高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)。

分析級磷酸二氫鉀(國藥集團(tuán)藥業(yè)股份有限公司)，分析級磷酸(西隴化工股份有限公司)，色譜級乙腈(TEDIA有限公司)。

1.2制備工藝藥物A為我公司開發(fā)的小規(guī)格品種，規(guī)格為0.5 mg，單位劑量片重為100 mg，處方中填充劑為3∶1比例的微晶纖維素和預(yù)膠化淀粉，潤滑劑為0.5 mg/片的硬脂酸鎂。原料藥在處方中占比極小，因此采取等量遞增的混合方式對原輔料進(jìn)行混合。將原料藥、輔料分次備量加入三維運(yùn)動混合機(jī)混合，設(shè)定頻率10 Hz，每次混合10 min。原輔料等量遞增混合結(jié)束后加入硬脂酸鎂進(jìn)行總混，總混結(jié)束后按照理論片重100 mg進(jìn)行壓片。

1.3取樣按照上述工藝參數(shù)混合，總混結(jié)束后用單點(diǎn)取樣器在三維運(yùn)動混合機(jī)混合筒內(nèi)多個不同部位取樣，將取出的樣品按照規(guī)定量稱量后倒入容量瓶或自封袋內(nèi)。取樣位置示意圖如圖1。

圖1 藥物混合粉末混合均勻度取樣示意圖

1.3.1取樣方式1 按照圖1取樣示意圖在三維運(yùn)動混合機(jī)6個不同部位取樣。用裝有0.5 mL取樣器頭的單點(diǎn)取樣器在每個取樣位置取樣，取出的樣品用分析天平精密稱量180 mg±30%(126～234 mg)，每份樣品稱樣量見表1，全量轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中。

1.3.2取樣方式2 按照圖1取樣示意圖在三維運(yùn)動混合機(jī)6個不同部位取樣。用裝有1.5 mL取樣器頭的單點(diǎn)取樣器在每個取樣位置取樣，取出的樣品稱量后裝入自封袋內(nèi)，取樣量見表2。

1.4藥物粉末含量均勻度測定

1.4.1色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.03 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0)-乙腈(83︰17)為流動相；柱溫30 ℃；流速每分鐘1.0 m；檢測波長為342 nm。

1.4.2供試液配制分別往每個裝有樣品的50 mL容量瓶中加水適量，置于恒溫水浴振蕩器內(nèi)運(yùn)行30 min，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過即可。兩種取樣方式的樣品配制量分別見表1、表2。

表1 取樣方式1樣品取樣量及配制量

表2 取樣方式2樣品取樣量及稱取量

1.4.3線性與范圍取藥物A對照品適量，配制成相對供試品溶液濃度50%(10.237 7 μg·mL-1)、70%(14.332 8 μg·mL-1)、80%(16.380 3 μg·mL-1)、100%(20.475 4 μg·mL-1)、120%(24.570 4 μg·mL-1)、130%(26.618 0 μg·mL-1)、150%(30.713 0 μg·mL-1)的溶液，依法檢測，以溶液組分的峰面積A對相應(yīng)的溶液濃度C進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明藥物A在供試品濃度的50%～150%的范圍內(nèi)，藥物A的濃度與峰面積的線性關(guān)系良好，結(jié)果見圖2。

圖2 含量及含量均勻度線性曲線圖

1.4.4準(zhǔn)確度和精密度取藥物A原料藥適量，加處方量空白輔料，配制成進(jìn)樣濃度50%(3份)、100%(6份)、150%(3份)的樣品，依法進(jìn)樣檢測，計(jì)算回收率，以此驗(yàn)證準(zhǔn)確度。其中100%(6份)的回收率測定結(jié)果作為重復(fù)性實(shí)驗(yàn)；同法，由不同實(shí)驗(yàn)人員，不同日期，使用不同的色譜系統(tǒng)，配制100%(6份)樣品，作為中間精密度實(shí)驗(yàn)。

3個測試濃度(相對供試品溶液濃度50%、100%、150%)的平均回收率分別為99.5%、99.5%、99.3%，綜合回收率為99.4%，12份測試樣品的回收率測試結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.5%，表明準(zhǔn)確度良好。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)和中間精密度實(shí)驗(yàn)的平均回收率分別為99.5%、100.2%；回收率的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.4%、0.2%；12份測試樣品回收率測試結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.5%，表明中間精密度和重復(fù)性良好。

1.4.5溶液穩(wěn)定性考察依法配制對照品溶液、供試品溶液，分別于0 h、12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h進(jìn)樣，計(jì)算溶液主峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，考察溶液穩(wěn)定性。測得對照品溶液峰面積RSD為0.21%，供試品溶液峰面積RSD為0.17%，表明對照品溶液和供試品溶液在室溫條件下72 h溶液穩(wěn)定。

1.4.6粉末含量均勻性測定分別對取樣方式1和取樣方式2獲得的樣品進(jìn)行含量均勻度測定。按照含量測定的色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，以磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-乙腈(83︰17)為流動相；柱溫30 ℃；流速每分鐘1.0 mL。取對照品約10 mg，置50 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，取50 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；精密量取供試?yán)m(xù)濾液50 μL注入液相色譜儀，同法測定記錄色譜圖；按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算每份樣品含量及RSD值。

1.5壓片將藥物總混粉末進(jìn)行壓片，通過片劑含量均勻度結(jié)果驗(yàn)證藥物粉末是否混合均勻，最終判定哪種取樣方式能夠正確評價藥物粉末混合均勻度。

使用ZP14旋轉(zhuǎn)式壓片機(jī)進(jìn)行壓片，應(yīng)壓片重100 mg，片重范圍控制±5%(95～105 mg)，在壓片過程的前段(正式壓片開始后5分鐘內(nèi))、中段(壓片中間過程)、后段(壓片結(jié)束前5分鐘內(nèi))分別取樣檢測片劑含量均勻度。

2 結(jié) 果

2.1取樣方式1、取樣方式2藥物粉末含量測定結(jié)果表3顯示，取樣方式1總混藥物粉末平均含量0.58%，含量RSD 2.3%，顯示藥物粉末混合均勻。表4顯示，取樣方式2總混粉末平均含量0.44%，超出理論含量標(biāo)準(zhǔn)范圍；含量RSD為10.3%，大于5.0%，顯示藥物粉末未混合均勻。

表3 取樣方式1樣品含量測定結(jié)果

注：理論含量為0.555%，含量標(biāo)準(zhǔn)范圍(0.499%～0.611%)，RSD≤5.0%，證明藥物粉末混合均勻。樣品測定次數(shù)n=3。

表4 取樣方式2樣品含量測定結(jié)果

注：理論含量為0.555%，含量標(biāo)準(zhǔn)范圍(0.499%～0.611%)，RSD>5.0%，證明藥物粉末未混合均勻。樣品測定次數(shù)n=3。

2.2壓片過程中片劑含量均勻度測定片劑壓片過程中前中后段含量均在99%以上，A+2.2S<15.0，片劑含量及含量均勻度合格。見表5。

表5 壓片過程中片劑含量均勻度測定結(jié)果

注：片劑含量標(biāo)準(zhǔn)范圍90.0%～110.0%，“A”為標(biāo)示含量與含量均值之差的絕對值?！癝”為含量標(biāo)準(zhǔn)差。

3 討 論

表3總混藥物粉末平均含量0.58%，含量RSD 2.3%，顯示藥物粉末混合均勻。表4總混粉末平均含量0.44%，超出理論含量標(biāo)準(zhǔn)范圍；含量RSD為10.3%，大于5.0%，顯示藥物粉末未混合均勻。表5數(shù)據(jù)顯示片劑在壓片過程中含量均勻度合格，證明藥物粉末混合均勻。由此可確定取樣方式1：將藥物粉末取至容量瓶內(nèi)全量轉(zhuǎn)移的取樣方式合適可操作。

將樣品取樣至自封袋內(nèi)再進(jìn)行分樣的方式帶來的誤差會使得本身混合均勻的樣品出現(xiàn)不均勻的假象。有多種因素會造成這一結(jié)果, 例如取樣器設(shè)計(jì)和操作、取樣技術(shù)、靜電荷以及配方中物料的物理性狀[5]。尤其對于低劑量粘附性較大的藥物混粉在取樣轉(zhuǎn)移過程中容易導(dǎo)致原料吸附在塑料袋上出現(xiàn)含量偏低。從自封袋內(nèi)將藥物進(jìn)行稱量分樣的過程也可能使藥物粉末發(fā)生分離或者脫混。由此可知取樣方式對評價藥物混合均勻性有較大影響，需要從取樣量、轉(zhuǎn)移方式等方面考察選擇最合適的取樣方式[10]。對于小規(guī)格藥物粉末混合均勻性評價取樣方式可綜合參考FDA《粉末混合和單位成品制劑分層取樣和評估的工業(yè)指導(dǎo)原則》、2010版《口服固體制劑GMP實(shí)施指南》、國際制藥工程協(xié)會ISPE推薦的取樣方法[11-13]，同時結(jié)合藥物本身的性質(zhì)選用合適的取樣器取樣并將藥物粉末全量轉(zhuǎn)移，取樣量一般為1～3倍藥物單位劑量。