乙酰螺旋霉素糖衣片含量測(cè)定方法探討

潘揚(yáng)

摘 要：本實(shí)驗(yàn)對(duì)乙酰螺旋霉素糖衣片含量測(cè)定方法進(jìn)行研究。方法：采用奧泰公司 C18 色譜柱（218 mm×4.6mm，5μm），乙腈一0.1mol/L醋酸銨溶液（用冰醋酸調(diào)PH值7.3）（60：40），檢測(cè)波長(zhǎng)為232nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。乙酰螺旋霉平均回收率分別為99.3%。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于乙酰螺旋霉素糖衣片中乙酰螺旋霉的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：乙酰螺旋霉素糖衣片；含量；測(cè)定

乙酰螺旋霉素為螺旋霉素的乙?；苌铮瑢?6元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類。乙酰螺旋霉素為單乙酰螺旋霉素Ⅱ、單乙酰螺旋霉素Ⅲ、雙乙酰螺旋霉素Ⅱ和雙乙酰螺旋霉素Ⅲ四個(gè)組分為主的混合物。乙酰螺旋霉素片，適應(yīng)癥為適用于敏感葡萄球菌、鏈球菌屬和肺炎鏈球菌所致的輕、中度感染，可用于隱孢子蟲病、或作為治療妊娠期婦女弓形體病的選用藥物。乙酰螺旋霉素常用于治療孕期弓形蟲感染、牙周炎、急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作、肺炎、年人牙周炎、小兒急性化膿性扁桃體炎、小兒呼吸道感染等[1-6]。糖衣片可令片劑美觀、還能掩蓋中藥的不良?xì)馕?，從而使得病人樂于服用。本?shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)乙酰螺旋霉素糖衣片中的乙酰螺旋霉的進(jìn)行了含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：iChrom 5100高效液相色譜儀（大連依利特分析儀器有限公司）；KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；723PC掃描型可見分光光度計(jì)（上海虔鈞科學(xué)儀器有限公司）； JDS-2B 雙功能冷凍水浴恒溫振蕩器（常州金壇精達(dá)儀器制造有限公司）；Plus-E3超純水機(jī)實(shí)驗(yàn)室級(jí)超純水機(jī)（南京易普易達(dá)科技發(fā)展有限公司）；分析天平（常州市幸運(yùn)電子設(shè)備有限公司）；PC-220色譜柱恒溫箱（天津艾維歐科技發(fā)展有限公司）；SP-1920紫外可見分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）；SPR-BW200 液相色譜進(jìn)樣瓶專用洗瓶機(jī)（北京銘成基業(yè)科技有限公司）；pH610 WIGGENS PH610 臺(tái)式酸度計(jì)（北京桑翌實(shí)驗(yàn)儀器研究所）；；SYZ-A石英亞沸蒸餾器（常州迅生儀器有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司 C18 色譜柱（218 mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對(duì)照品：乙酰螺旋霉 購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.4 試劑：甲醇（南京化學(xué)試劑股份有限公司）、醋酸銨（青島春宇化工有限公司）、乙腈（南京化學(xué)試劑股份有限公司）、磷酸（南京化學(xué)試劑股份有限公司）、冰醋酸（南京化學(xué)試劑股份有限公司）、磷酸二氫鉀（南京化學(xué)試劑股份有限公司）。

2 測(cè)定方法確定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。流動(dòng)相：乙腈一0.1mol/L醋酸銨溶液（用冰醋酸調(diào)PH值7.3）（60：40），檢測(cè)波長(zhǎng)：232nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按乙酰螺旋霉峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取乙酰螺旋霉對(duì)照品適量，置容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每lml中約含1mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取乙酰螺旋霉素糖衣片，研碎，稱取，置具塞錐形瓶中，加入70%甲醇適量，密塞，超聲處理10分鐘，放冷，過濾，揮干70%甲醇提取液殘?jiān)恿鲃?dòng)相溶解并定量稀釋制成每lml中約含lmg的溶液，搖勻，濾過。取續(xù)濾液，即得。

2.4 專屬性試驗(yàn)

依照處方取乙酰螺旋霉素糖衣片輔料，按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，依上述方法測(cè)定，結(jié)果在單乙酰螺旋霉素Ⅱ、單乙酰螺旋霉素Ⅲ、雙乙酰螺旋霉素Ⅱ和雙乙酰螺旋霉素Ⅲ出峰處陰性液無(wú)色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密稱取乙酰螺旋霉對(duì)照品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果單乙酰螺旋霉素Ⅱ、單乙酰螺旋霉素Ⅲ、雙乙酰螺旋霉素Ⅱ和雙乙酰螺旋霉素ⅢRSD分別為0.76%、0.81%、0.91%、0.85%，表明本方法精密度良好。

2.6 對(duì)照品的線性考察

精密稱取乙酰螺旋霉對(duì)照品溶液分別精密吸取2μL、4μL、6μL、8μL、10μL、12μL、14μL、16μL、18μL、20μL，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，乙酰螺旋霉單乙酰螺旋霉素Ⅱ、單乙酰螺旋霉素Ⅲ、雙乙酰螺旋霉素Ⅱ和雙乙酰螺旋霉素Ⅲ均呈良好的線性關(guān)系。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的乙酰螺旋霉素糖衣片樣品6份，按測(cè)定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.93%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的乙酰螺旋霉對(duì)照品，上述方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，平均回收率為99.3%，RSD=0.81%。結(jié)果表明此方法的回收率良好。

3 討論

分別考察乙腈一0.085%磷酸溶液（10：90），乙腈一0.1mol/L醋酸銨溶液（用冰醋酸調(diào)PH值7.3）（50：50），水：乙腈：甲醇：冰醋酸（77∶10∶11∶2），乙腈：0.2%醋酸水溶液（15：85），乙腈一0.1mol/L醋酸銨溶液（用冰醋酸調(diào)PH值7.3）（60：40），乙腈一0.1mol/L醋酸銨溶液（用冰醋酸調(diào)PH值7.3）（40：60），乙腈-0.033 mol/L磷酸二氫鉀溶液（40：60）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈一0.1mol/L醋酸銨溶液（用冰醋酸調(diào)PH值7.3）（60：40）為流動(dòng)相為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈一0.1mol/L醋酸銨溶液（用冰醋酸調(diào)PH值7.3）（60：40）為流動(dòng)相。

參考文獻(xiàn)

[1]乙酰螺旋霉素配伍阿奇霉素治療孕期弓形蟲感染的探討[J].魏敏，匡軍秀，段自珍，楊連弟，陳昌源，魯敏.中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志.2004（03）.

[2]甲硝唑聯(lián)合乙酰螺旋霉素與牙周寧治療成年人牙周炎的臨床治療效果比較[J].王珺，歐龍，羅蕓，楊婷，謝瀟.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展.2016（35）.

[3]乙酰螺旋霉素聯(lián)合阿奇霉素治療孕期弓形蟲感染的臨床效果[J].唐宏霞，熊學(xué)峰，秦志強(qiáng). 中國(guó)血吸蟲病防治雜志.2013（05）.

乙酰螺旋霉素片聯(lián)合涼膈散治療小兒急性化膿性扁桃體炎效果觀察[J].孫萌萌中國(guó)鄉(xiāng)村醫(yī)藥.2007（13）.

[4]乙酰螺旋霉素聯(lián)合阿奇霉素治療孕期弓形蟲感染效果觀察[J].羅靖.中國(guó)鄉(xiāng)村醫(yī)藥.2017（07）.

[5]阿奇霉素、乙酰螺旋霉素及青蒿琥酯抗小鼠弓形蟲感染的研究[J].王衛(wèi)群，田春林，申繼清，杜海娟，劉曉泉.中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2013（02）.

[6]乙酰螺旋霉素治療小兒呼吸道感染的療效觀察[J].陳坤華、熊大慧、何佳敏、歐克琳、符州、高武紅.中國(guó)藥房[1].1992（03）.