某血站8種酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況調(diào)查

秦小林

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的一種酶聯(lián)免疫測(cè)定技術(shù)，因其敏感度和特異度較高、操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于疾病診斷、科研等醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。目前血站使用ELISA法和核酸檢測(cè)法（nucleic acid testing，NAT）進(jìn)行血液篩查，并發(fā)布血液檢測(cè)的最終結(jié)果，醫(yī)院不再進(jìn)行復(fù)查。因此，為保障患者用血安全，血站應(yīng)重視試劑的選擇和檢測(cè)過程中關(guān)鍵控制點(diǎn)的掌握。現(xiàn)將本站2017—2018年血液檢測(cè)待查標(biāo)本再檢情況報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集2017—2018年本站8種ELISA檢測(cè)試劑檢測(cè)的待查標(biāo)本1 402份，均為單邊陽性標(biāo)本。兩種不同廠家試劑檢測(cè)同一項(xiàng)目時(shí)，只要檢測(cè)結(jié)果不相符即判為待查標(biāo)本。

1.2 儀器與試劑 全自動(dòng)酶聯(lián)免疫一體機(jī)Uranus AE180（深圳愛康生物科技有限公司），EVO全自動(dòng)加樣儀（瑞士TECAN公司），后處理FAME 24/20（煙臺(tái)澳斯邦生物工程公司）；核酸檢測(cè)系統(tǒng)及其試劑盒（中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司），核酸檢測(cè)系統(tǒng)及其試劑盒（蘇州華益美生物科技有限公司）；乙型肝炎（乙肝）表面抗原〔（hepatitis B surface antigen，HBsAg），英國(guó)雅培和北京萬泰〕，梅毒抗體（北京萬泰和上?？迫A），丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）抗體（上?？迫A和廈門英科新創(chuàng)），人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）抗體（法國(guó)伯樂和北京金豪），所有試劑均通過中國(guó)藥品生物制品檢定所批檢。

1.3 方法 分析本站8種ELISA檢測(cè)試劑檢測(cè)待查情況，對(duì)相應(yīng)待查項(xiàng)目用同種試劑進(jìn)行兩孔再檢。只要有一孔呈反應(yīng)性即判為陽性，兩孔均為無反應(yīng)性則判為陰性。對(duì)待查檢測(cè)陰性的標(biāo)本再采用熒光聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）方法進(jìn)行核酸8份標(biāo)本混樣檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 HBsAg試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況 雅培HBsAg試劑總待查率高于萬泰，其中雅培待查陽性率低（15.77%），待查陰性率高（84.23%）；萬泰待查陽性率高（64.69%），待查陰性率低（35.31%）。見表1。

表1 某血站1 402份待查標(biāo)本HBsAg試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況

2.2 抗-HCV試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況 科華抗-HCV試劑待查數(shù)約為新創(chuàng)HCV待查數(shù)的2倍，待查陽性率相差不大。見表2。

表2 某血站1 402份待查標(biāo)本抗-HCV試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況

2.3 抗-HIV試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況 金豪抗-HIV試劑待查陽性率高（67.57%），伯樂待查陽性率較低（39.45%）。見表3。

表3 某血站1 402份待查標(biāo)本抗-HIV試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況

2.4 梅毒抗體試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況 萬泰梅毒抗體試劑待查數(shù)是科華梅毒抗體試劑待查數(shù)的3倍，且待查陽性率也比科華高。見表4。

表4 某血站1 402份待查標(biāo)本梅毒抗體試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況

2.5 ELISA待查陰性標(biāo)本核酸檢測(cè)結(jié)果情況 雅培HBsAg試劑待查陰性標(biāo)本核酸檢測(cè)陽性率最高（0.84%）。見表5。

表5 HBsAg、抗-HCV、抗-HIV ELISA待查陰性核酸檢測(cè)情況

3 討論

相關(guān)調(diào)查顯示，我國(guó)乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）攜帶者約為1.2億，感染率高達(dá)60%，HBsAg攜帶者亦高達(dá)10%～15%[1]。本研究顯示，HBsAg總待查率達(dá)待查總數(shù)的70.61%，可能與我國(guó)是HBV高發(fā)區(qū)有關(guān)。8種ELISA檢測(cè)試劑檢測(cè)待查中雅培HBsAg試劑待查數(shù)最多，占待查總數(shù)的50.21%，但其再檢陽性符合率僅15.77%；而金豪抗-HIV試劑、萬泰HBsAg試劑和萬泰梅毒抗體試劑再檢陽性符合率均大于60%；新創(chuàng)抗-HCV、伯樂抗-HIV、科華抗-HCV和科華梅毒抗體試劑再檢陽性符合率為30%～40%。雅培HBsAg試劑再檢符合率低可能與雅培檢測(cè)試劑盒的諸多影響因素有關(guān)。雅培試劑敏感度高，截?cái)嘀递^低（約0.090），洗板不干凈即可出現(xiàn)花板，其次加樣、孵育溫度和時(shí)間、顯色、試劑、環(huán)境、操作、類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體以及離心速度和時(shí)間等因素也會(huì)導(dǎo)致結(jié)果呈假陽性和假陰性[2-3]。有研究表明，以3 600 r/min（2 898 g）離心10 min分離血清，血清中HBsAg含量假陽性率為9.82%；以8 819 r/min（10 000 g）離心10 min分離血清，不會(huì)導(dǎo)致假陰性標(biāo)本出現(xiàn)[4]?？梢娡慌鷺?biāo)本可以通過提高標(biāo)本離心速度減少假陽性結(jié)果，而本室常規(guī)ELISA檢測(cè)標(biāo)本的離心時(shí)間為5 min、速度為3 000 r/min，因此為減少HBsAg待查標(biāo)本數(shù)，必須在檢測(cè)前將標(biāo)本以足夠的時(shí)間和速度離心。萬泰HBsAg試劑、萬泰梅毒抗體試劑和金豪抗-HIV試劑再檢陽性率高可能還與試劑本身有關(guān)，國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒的敏感度較進(jìn)口試劑盒稍差，但特異度和重復(fù)檢出率均高[5]。相關(guān)文獻(xiàn)顯示，ELISA篩查單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者中，潛在合適獻(xiàn)血者占較大比例，廣西南寧及河南新鄉(xiāng)地區(qū)的追蹤調(diào)查結(jié)果顯示，單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者中潛在合適獻(xiàn)血者比例分別為86.6%、58.3%[6-7]。也有文獻(xiàn)報(bào)道，ELISA檢測(cè)HBV、HCV單試劑陽性，其假陽性率較高，單試劑檢測(cè)陽性標(biāo)本及抗-HCV灰區(qū)標(biāo)本中均未檢出核酸反應(yīng)性標(biāo)本，171例HBsAg灰區(qū)標(biāo)本中檢出HBV-DNA反應(yīng)性標(biāo)本6例，247例HCV未檢出HCV-RNA反應(yīng)性標(biāo)本[8]。因而萬泰HBsAg、萬泰梅毒抗體試劑和金豪抗-HIV試劑存在假陽性率較高的情況。新創(chuàng)抗-HCV、伯樂抗-HIV、科華抗-HCV和科華梅毒抗體試劑再檢陽性符合率均在30%～40%，特異度比較符合本站血液篩查要求。另外，表5數(shù)據(jù)顯示，雅培HBsAg再檢陰性標(biāo)本核酸檢測(cè)陽性率高達(dá)0.84%，而我國(guó)經(jīng)NAT法檢測(cè)后 HBsAg（-）NAT（+）檢出率約為 1：2 000，其中約80%為隱匿性乙肝病毒感染（occult hepatitis B virus infection，OBI），20% 為窗口期標(biāo)本[9-10]。本血站所用雅培HBsAg在再檢陰性標(biāo)本中，核酸檢測(cè)陽性率遠(yuǎn)高于我國(guó) HBsAg（-）NAT（+）檢出率，因而在雅培HBsAg單邊待查標(biāo)本中極可能存在高風(fēng)險(xiǎn)OBI感染。有研究表明，乙肝核心抗體陽性健康體檢人群中，HBV-DNA陽性率為6.8%[11]，盡管繼HBsAg檢測(cè)之后已引入NAT檢測(cè)，但在抗-HBc（+）合格獻(xiàn)血者血液中仍有一定機(jī)率含微量HBV-DNA，故需進(jìn)一步提高核酸檢測(cè)的敏感度。

血站實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行血液篩查的目的是為防止通過輸血感染病原體，而非進(jìn)行診斷，故對(duì)檢測(cè)方法敏感度的要求高于特異度。然而敏感度和特異度本身就是一對(duì)矛盾的變量，兩者隨診斷臨界值的變化而變化，過高的檢測(cè)敏感度勢(shì)必會(huì)削弱其特異度，導(dǎo)致誤診率上升[12]。對(duì)血站而言，就會(huì)導(dǎo)致因假陽性被屏蔽的獻(xiàn)血者數(shù)量增多，造成獻(xiàn)血人群的流失。而我國(guó)尚未要求對(duì)單邊陽性或核酸陽性的結(jié)果作進(jìn)一步驗(yàn)證，對(duì)于檢測(cè)出現(xiàn)的陽性結(jié)果，本站未開展確證試驗(yàn)而無法及時(shí)得到證實(shí)。單試劑假陽性不僅直接導(dǎo)致了血液資源的浪費(fèi)，削弱了無償獻(xiàn)血者的隊(duì)伍，還對(duì)因假陽性結(jié)果遭拒的獻(xiàn)血者身心造成了傷害，對(duì)無償獻(xiàn)血事業(yè)的健康發(fā)展造成了不利影響。因此，血站應(yīng)對(duì)ELISA檢測(cè)單邊陽性或核酸陽性獻(xiàn)血者進(jìn)行追蹤調(diào)查，為之后獻(xiàn)血者的歸隊(duì)問題作出前瞻性統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析，避免上述情況的發(fā)生。