2013—2017年安徽省部分豬場偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查

李春芬，李東風(fēng)，耿鶴鳴，李 郁

（1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，安徽 合肥 230036；2.巢湖市畜牧獸醫(yī)局，安徽 巢湖 238000；3.安徽省獸藥飼料監(jiān)察所，安徽 合肥 230036）

偽狂犬?。≒seudorabies,PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的一種高度接觸性、急性傳染病[1]。PR屬于自然疫源性疾病，我國將其列為二類動(dòng)物疫病，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為須通報(bào)動(dòng)物疫病[2]。PRV可以感染家畜和野生動(dòng)物，豬是PRV的天然宿主和貯存宿主，不同階段的豬感染PRV后臨床表現(xiàn)不同[3]。新生仔豬感染PRV可導(dǎo)致高死亡率和神經(jīng)系統(tǒng)疾病，成年豬感染后易發(fā)呼吸系統(tǒng)疾病，懷孕母豬群則易發(fā)生生殖系統(tǒng)疾病[4]。1813年P(guān)R首次在美國發(fā)生，20世紀(jì)50年代在我國首次暴發(fā)，隨著PRV弱毒疫苗的使用以及部分規(guī)?；N豬場實(shí)施PR的根除凈化計(jì)劃，PR在我國得到有效的控制，但自2011年10月以來，我國有超過20個(gè)省市區(qū)的豬場暴發(fā)了PR，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[5-8]。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是國際上公認(rèn)的檢測PR的常規(guī)方法之一，具有快捷、簡便、特異、敏感、可靠性好等優(yōu)點(diǎn)[9]。為了解和掌握安徽省豬群中PRV的感染與流行情況，本調(diào)查應(yīng)用ELISA，對2013—2017年送檢的血清樣品進(jìn)行PRV野毒（PRV-gE）抗體檢測，并對檢測結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)與分析，為PR的防控提供了參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 血清樣品的來源和制備

樣品來源：22 130份血清樣品來源于2013—2017年安徽省16個(gè)地級(jí)市594個(gè)不同規(guī)模化豬場。

血清的制備：將送檢血清置入1.5 mL的離心管中以8 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心3～5 min，取上清液于新離心管中，置-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

豬只生長劃為6個(gè)階段，即新生仔豬（1～3周齡）、保育豬（4～8周齡）、肥育豬（9周齡及以上）、后備母豬、母豬和種公豬。

自繁自養(yǎng)型基礎(chǔ)母豬大于3 000頭為大型豬場，小于1 000頭為中型豬場，小于100頭為小型豬場，小于10頭為散養(yǎng)戶。

1.2 主要儀器與試劑

冷凍高速離心機(jī)（BECKMAN公司），全自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國伯騰儀器有限公司），PRV-gE抗體ELISA試劑盒（美國IDEXX公司）。

1.3 方法與結(jié)果判定

按照PRV-gE抗體ELISA試劑盒中提供的說明書進(jìn)行操作。在陰、陽性對照均成立的情況下對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行有效性判定，具體判定標(biāo)準(zhǔn)為：S/N≤0.6時(shí)，判為陽性；S/N＞0.7時(shí)，判為陰性；0.60＜S/N≤0.7時(shí)，判為可疑并重測。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS statistics 20.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。利用單因素方差分析LSD多重比較與卡方檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)間比對，將數(shù)據(jù)進(jìn)行分類，進(jìn)而將每一類別數(shù)據(jù)中的數(shù)據(jù)組進(jìn)行單因素方差分析，當(dāng)P≥0.05時(shí)說明數(shù)據(jù)中不存在顯著性差異，P＜0.05時(shí)說明比較的兩組數(shù)據(jù)間存在顯著性差異，若P＜0.01時(shí)則兩組數(shù)據(jù)間差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同年份PRV-gE抗體檢測結(jié)果

又再次上升，且高于2015年水平。2013年、2014年、2015年、2016年與2017年之間PRV-gE抗體陽性率差異均顯著（P＜0.05）。見表 1。

表1 不同年份PRV-gE抗體檢測結(jié)果

2.2 不同生長階段豬群PRV-gE抗體檢測結(jié)果

2013年、2014年、2015年、2016年與2017年的PRV-gE抗體陽性率分別為 5.12%（214/4 179）、11.61%（259/2 231）、26.61%（1 160/4 359）、14.35%（798/5 562）、33.63%（1 950/5 799）。2013—2015 年期間PRV-gE抗體陽性率呈上升趨勢，但2016年與2015年比較，其PRV-gE抗體陽性率出現(xiàn)了小幅的回落。2017年與2016年比較，PRV-gE抗體陽性率

選取豬日齡明確的7 189份血清樣品的PRV-gE抗體檢測結(jié)果進(jìn)行分析。仔豬、保育豬、肥育豬、母豬、后備母豬與種公豬的陽性率分別為27.38%（239/873）、25.39%（244/961）、28.37%（404/1 424）、29.39%（930/3 164）、27.48%（130/473）、25.51%（75/294）。不同生長階段豬群血清PRV-gE抗體的陽性率之間差異均不顯著（P＞0.05）。見表2。

表2 不同生長階段豬群PRV-gE抗體陽性率

2.3 不同規(guī)模養(yǎng)殖場豬群PRV-gE抗體檢測結(jié)果

從不同規(guī)模養(yǎng)殖場豬群的PRV-gE抗體檢測結(jié)果可知（表3），安徽地區(qū)不同規(guī)模養(yǎng)殖場中均存在PRV的野毒感染，小型豬場及散養(yǎng)戶的PRV-gE抗體陽性率最高，為32.40%（1 227/3 787）；大型豬場和中型豬場PRV-gE抗體陽性率分別為16.55%（1 978/11 951）、18.40%（1 176/6 392）。小型豬場及散養(yǎng)戶與大型豬場、中型豬場之間PRV-gE抗體陽性率差異極顯著（P＜0.01），而大型豬場與中型豬場之間PRV-gE抗體陽性率差異不顯著（P＞0.05）。

表3 不同規(guī)模養(yǎng)殖場PRV-gE抗體的檢測情況

3 分析與討論

PR是當(dāng)前我國規(guī)?；i場主要的威脅性疫病之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[10]。目前我國豬場大多應(yīng)用PRV-gE基因缺失活疫苗來控制該病，因此豬血清中檢出PRV-gE抗體可確診為野毒感染[2]。本調(diào)查對2013—2017年安徽省16個(gè)地級(jí)市594個(gè)不同規(guī)?；i場的22 130份血清樣品進(jìn)行PRV-gE抗體檢測，結(jié)果顯示受檢血清樣品的PRV-gE抗體陽性率為19.80%。相較于黨占國等[11]報(bào)道的2012—2015年河南省部分地區(qū)規(guī)?；i場血清樣品陽性率58.38%，楊珊珊等[4]報(bào)道的2016年江蘇省部分豬場血清樣品陽性率43.2%，段群棚等[12]報(bào)道的2013—2016年廣西部分規(guī)模豬場血清樣本陽性率22.56%，唐小明等[13]報(bào)道的2014—2015年湖南省規(guī)模豬場豬偽狂犬病血清樣品陽性率23.56%等偏低，說明安徽省豬場PRV野毒感染在我國PRV感染省份中還處于相對較低水平。但安徽省PRV的野毒感染基本呈逐年上升趨勢，這表明安徽省PRV的感染壓力很大。其原因可能有以下幾方面：一是PRV新毒株的出現(xiàn)，有研究已確定在我國出現(xiàn)了PRV的變異毒株[14]，傳統(tǒng)的疫苗無法起到很好的免疫作用；二是免疫抑制性疾病的干擾，導(dǎo)致豬群免疫能力下降；三是種豬場存在野毒感染，通過引種傳播[4]；四是豬場對PR免疫不夠重視，免疫程序混亂。

不同生長階段豬群血清PRV-gE抗體的陽性率之間差異不顯著。從不同生長階段豬群PRV-gE抗體檢測結(jié)果來看，受檢仔豬、保育豬、肥育豬、母豬、后備母豬和種公豬血清中均有PRV-gE野毒抗體檢出，說明不同生長階段豬對PRV均易感。其中母豬感染率最高（29.39%），表明母豬的帶毒現(xiàn)象嚴(yán)重，PRV野毒感染依然是導(dǎo)致母豬繁殖障礙的主要原因之一。本次調(diào)查種公豬感染率為25.51%，相較于母豬感染率偏低。但因公豬飼養(yǎng)周期較長，一旦感染PRV野毒，可長期帶毒排毒，引起持續(xù)性感染。且PRV可通過精液進(jìn)行傳播，攜帶PRV的公豬把PRV傳染給母豬，造成PRV在種母豬群中擴(kuò)散。攜帶病毒的母豬可通過哺乳或環(huán)境、鼠等途徑將病毒傳播給仔豬[12]，而后備母豬通常又是從肥育豬中挑選的，從而造成循環(huán)感染[6]。豬場要控制和凈化偽狂犬病，應(yīng)為種豬建立詳細(xì)的檔案，進(jìn)行嚴(yán)格的免疫防控，同時(shí)對后備母豬進(jìn)行PRV-gE抗體篩查，淘汰有PRV感染的公豬和母豬，保障新生仔豬的品質(zhì)[15]。

不同豬場飼養(yǎng)管理?xiàng)l件差異大，偽狂犬病疫苗免疫程序也不盡相同[16]。從不同規(guī)模豬場PRV-gE抗體檢測結(jié)果來看，大中型規(guī)模豬場感染壓力相對較低，小型豬場及散養(yǎng)戶感染壓力相對較高。這是因?yàn)榇笾行鸵?guī)模豬場多堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，強(qiáng)化飼養(yǎng)管理，盡力做到全進(jìn)全出，定期對環(huán)境進(jìn)行消毒，嚴(yán)格落實(shí)生物安全措施，嚴(yán)格隔離檢疫，嚴(yán)格執(zhí)行豬調(diào)運(yùn)及引種制度，加強(qiáng)陽性種豬淘汰，及時(shí)根除陰性感染豬，重點(diǎn)關(guān)注車輛、人員、老鼠等對PRV的傳播擴(kuò)散[9]。而多數(shù)小型豬場及散養(yǎng)戶引豬時(shí)不檢疫，不從PR陰性場引入，免疫程序不合理或防疫意識(shí)薄弱不免疫，消毒設(shè)施疏于管理，消毒效果低下，養(yǎng)殖環(huán)境較差，生物安全措施和管理不到位。

本次調(diào)查表明2013—2017年間PR在安徽省持續(xù)流行，豬群中PRV-gE抗體陽性率基本呈逐年上升趨勢，各生長階段均有PRV感染。因此，安徽省的PR凈化和綜合防控工作勢在必行。

制定科學(xué)的控制和凈化方案是預(yù)防豬偽狂犬病的根本措施，《國家中長期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》中已明確豬偽狂犬病的根除計(jì)劃，到2015年原種豬場達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)，到2020年全國所有種豬場達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。PRV感染與豬場的生產(chǎn)管理水平、生物安全管理、區(qū)域病毒變異及豬群自身免疫水平等密切相關(guān)。建議養(yǎng)殖場（戶）實(shí)際生產(chǎn)中采取加強(qiáng)日常管理、提高生物安全防護(hù)意識(shí)、實(shí)時(shí)野毒抗體監(jiān)測、強(qiáng)化疫苗免疫等一系列綜合措施進(jìn)行PR防控，逐步達(dá)到根除和消滅PR的目標(biāo)。