中藥材中常見真菌毒素污染狀況及分析方法研究進(jìn)展

雷 燕

（浙江省麗水市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，浙江麗水 323000）

0 引言

中藥材的安全性在國內(nèi)外引起了越來越多的關(guān)注。作為湯劑和中成藥的基本原料，其質(zhì)量直接影響臨床用藥的安全性和療效，加強(qiáng)其質(zhì)量控制具有重要意義。中草藥在種植、收獲、運(yùn)輸、貯存過程中，由于方法不當(dāng)，容易引起大量真菌生長和毒素積累，直接影響中草藥的質(zhì)量和療效。目前，糧食、食品中真菌及其毒素的污染已引起廣泛關(guān)注，并提出了防治措施、法規(guī)和限量標(biāo)準(zhǔn)。然而，對中藥材真菌污染的系統(tǒng)研究還不夠深入。

1 中藥材中常見真菌毒素種類及污染狀況

1.1 黃曲霉毒素

黃曲霉、寄生曲霉、生曲霉和擬酒石酸曲霉可產(chǎn)生黃曲霉毒素。是一類化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的二呋香豆素衍生物。目前已分離鑒定出12種化合物，包括AFB1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q、H1、GM、B2A和有毒醇。4種主要的毒素包括AFB1、AFB2、AFG1和AFG2，可以直接污染食品、飼料和中藥材。1993年，AF被世界衛(wèi)生組織的癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）劃定為Ⅰ類致癌物，屬于劇毒物質(zhì)。在天然污染的食品中以AFB1最為多見，其毒性和致癌性也最強(qiáng)。研究表明，中藥材中真菌毒素污染較為普遍，尤其是AF檢出率很高。對當(dāng)歸、黨參、黃芪等30多種中藥進(jìn)行了檢測。在杏仁、龍膽、生煎曲、生麥芽和柴胡中均發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素。大量調(diào)查結(jié)果表明，國產(chǎn)中藥AFB1的污染率為82%-100%，污染水平為0.12～202.00 μg·kg-1。其中，桔皮、麥冬、當(dāng)歸、椰殼、肥海、神曲污染報道較多。國外檢測到19種中藥，其中3種含有黃曲霉毒素，有的甚至高達(dá)28μg·kg-1。對意大利市場上的103份香料、香料、藥用茶和藥用植物樣品進(jìn)行了測試。發(fā)現(xiàn)7個含有黃曲霉毒素的樣本。

1.2 單端抱霉烯族類毒素

單端丙烯醛毒素是鐮刀菌真菌產(chǎn)生的一類化合物。根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為T-2毒素和脫氧雪腐鐮刀菌醇（DON）。T-2毒素是由禾谷鐮刀菌、三絲鐮刀菌和馬鐮刀菌產(chǎn)生的一種真菌毒素。主要影響血液、肝臟、腎臟、胰腺肌肉和淋巴細(xì)胞的功能。唐，又稱嘔吐毒素，主要由禾谷鐮刀菌和黃鐮刀菌產(chǎn)生。它能在人體內(nèi)產(chǎn)生食物中毒性白細(xì)胞減少癥。

2 中藥材中真菌毒素分析方法概況

2.1 提取凈化

提取即采用合適的提取液和提取方式，將目標(biāo)成分如真菌毒素從樣品中充分地轉(zhuǎn)移到溶劑中并均質(zhì)化的過程，為以后的凈化和定量檢測的前提。為了獲得更高的選擇性和靈敏度，通常需要進(jìn)一步純化提取物。凈化是指在檢測前去除提取物中的脂肪、蛋白質(zhì)和色素等雜質(zhì)，以避免干擾真菌毒素的檢測。有些學(xué)者為減少基質(zhì)效應(yīng)和凈化過程對目標(biāo)成分造成損失，采取直接稀釋法，樣品用84%乙腈提取后，用甲醇溶解上清液，稀釋4次，用LC-MS/MS直接測定，高、中、低濃度時赭曲霉素A的絕對回收率為89.6%～95.2%。在中藥及其相關(guān)產(chǎn)品中多種真菌毒素同步檢測研究中，將樣品經(jīng)甲醇-水-甲酸（79∶20∶1，v/v/v）提取后，上清液氮吹復(fù)溶，直接上LC-MS/MS檢測，8種真菌毒素的回收率在71.0%～106.0%之間，線性相關(guān)系數(shù)（R2）為0.9977～0.9999。

2.2 檢測方法

近年來針對真菌毒素的化學(xué)檢測方法不斷趨于完善，檢測方法主要分為兩類：快速篩選法和確認(rèn)法。目前較為普遍使用的真菌毒素快速篩選法主要是酶聯(lián)免疫法（ELISA）和膠體金標(biāo)記技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）適用于大量樣品的快速篩選，但存在假陽性的缺點，不能準(zhǔn)確定量。比較了酶聯(lián)免疫吸附法和高效液相色譜法測定20種藥材中AFB1的結(jié)果。酶聯(lián)免疫吸附試驗假陽性率為70%。陽性樣品中AFB1的含量也與高效液相色譜法有顯著差異。膠體金標(biāo)記技術(shù)是一種新型的固相免疫標(biāo)記技術(shù)，與ELISA法同屬于免疫學(xué)方法，具有操作簡單、快速、穩(wěn)定性好、單個現(xiàn)場檢測成本低等特點，為目前研究應(yīng)用比較廣泛的一種方法。等將己確定污染值的玉米、小麥樣品制備為不同毒素含量的驗證樣品，對膠體金免疫層析法的準(zhǔn)確性、誤差范圍等項目進(jìn)行了驗證實驗，其檢測結(jié)果與ELISA法基本一致。另外，基于免疫反應(yīng)的生物感應(yīng)技術(shù)和蛋白芯片技術(shù)也是近年來新興的真菌毒素快速檢測技術(shù)。

3 結(jié)語

中藥是我國優(yōu)秀文化遺產(chǎn)的一部分，在疾病預(yù)防、治療及保健等方面做出了卓越的貢獻(xiàn)。隨著人們對中藥的廣泛應(yīng)用，其安全問題也引起人們高度重視，真菌污染導(dǎo)致的中藥霉變是影響中藥質(zhì)量與使用安全的主要問題之一。