包蟲病免疫及疫苗的研究進(jìn)展

丁劍冰， 李玉嬌， 張峰波

(新疆醫(yī)科大學(xué)1基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院， 烏魯木齊 830011; 2第一附屬醫(yī)院, 烏魯木齊 830054;3省部共建中亞高發(fā)病成因與防治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 烏魯木齊 830011)

包蟲病(Hydatidosis)是棘球絳蟲的幼蟲寄生于宿主體內(nèi)引起的人獸共患寄生蟲病，為我國優(yōu)先防治的動物疫病之一[1]。包蟲感染最重要的危害是導(dǎo)致肝臟的持續(xù)進(jìn)行性損害，影響宿主的健康。在牧區(qū)，終末宿主犬類體內(nèi)的蟲卵污染草原和食物，能夠?qū)е轮虚g宿主羊和人的大面積傳播，對牧區(qū)人民的健康和經(jīng)濟(jì)發(fā)展造成影響。包蟲病是世界范圍的公共衛(wèi)生問題之一，在牧業(yè)發(fā)達(dá)的國家如澳大利亞等國家流行，我國以偏遠(yuǎn)地區(qū)新疆、青海、內(nèi)蒙等牧區(qū)最為嚴(yán)重，人群發(fā)病率可高達(dá)5%～10%[2]。包蟲病的總體患病率為8.1%，其中細(xì)粒棘球絳蟲(Echinococcosis granulosus，Eg)引起囊型包蟲病(CE)的患病率為4.2%，多房棘球絳蟲(Echinococcus multilocularis，Em)引起的泡型包蟲病(AE)的患病率為3.9%，在中國約有5 000萬人存在被感染的風(fēng)險，目前已經(jīng)有38萬例包蟲病患者。 新疆和青藏高原是畜牧業(yè)分布較廣的區(qū)域，受文化、宗教和風(fēng)俗的影響，包蟲病的防治效果不顯著。干擾包蟲病的致病機(jī)制，或避免接觸有傳染性棘球絳蟲的蟲卵，或控制傳染源和切斷傳播途徑是預(yù)防棘球蚴病較為理想的措施。因此很有必要開展包蟲病免疫機(jī)制研究，探尋包蟲病的免疫治療靶點(diǎn)，同時積極尋找有效的保護(hù)性抗原及抗原表位，開發(fā)研制有效疫苗，是廣大牧區(qū)人民群眾和當(dāng)前西部大開發(fā)政策的迫切需要[3]。

1 包蟲感染的免疫細(xì)胞和分子機(jī)制

棘球絳蟲(Eg或Em)在長期的生活史中，進(jìn)化出復(fù)雜的生活機(jī)制，維持其繁殖和生存[4]。包蟲誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生多種調(diào)節(jié)蛋白，這些蛋白能夠改變宿主的免疫功能，從而干擾機(jī)體針對寄生蟲產(chǎn)生的固有免疫反應(yīng)和獲得性免疫反應(yīng)，致使包蟲逃避免疫防御在機(jī)體長期寄生。Eg和Em寄生于人體肝臟器官，通過誘導(dǎo)免疫抑制來逃避宿主的免疫殺傷作用，使蟲體順利生長，刺激肝臟細(xì)胞纖維化，形成病灶，比如包囊的產(chǎn)生，對肝臟組織造成不可逆的損傷[5]。

1.1固有免疫細(xì)胞在包蟲感染中的作用機(jī)體抵御病原體入侵的第一道防線是固有免疫(非特異性免疫)，其中固有免疫細(xì)胞在機(jī)體抗包蟲感染的免疫反應(yīng)中發(fā)揮了重要的作用。包蟲感染的免疫特點(diǎn)是早期Th1細(xì)胞漂移為晚期的Th2細(xì)胞為主的免疫作用，這種漂移與巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞(抗原提呈細(xì)胞，APC)的功能變化有關(guān)。徐巖等[6]在研究Em慢性感染的進(jìn)程中，發(fā)現(xiàn)泡球蚴感染模型的樹突狀細(xì)胞(Dendritic cell, DC)作為抗原提呈細(xì)胞，通過激活T細(xì)胞功能，參與機(jī)體抵抗泡球蚴的免疫活動。Em相關(guān)抗原會直接刺激并影響DC的分化模式和功能，AE感染早期表現(xiàn)為mDC增多，發(fā)揮主導(dǎo)作用，刺激機(jī)體大量分泌細(xì)胞因子γ-干擾素(IFN-γ)和IL-12，有利于誘導(dǎo)宿主體內(nèi)Th1為主的免疫應(yīng)答，參與抗泡球蚴寄生的過程。但在Em感染的中晚期，mDC減少及功能下降，宿主不能對Em產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答，誘導(dǎo)了Em的免疫逃避機(jī)制，促進(jìn)了AE的形成。單驕宇等[7]在研究中發(fā)現(xiàn)機(jī)體感染Eg后吲哚胺2,3-雙加氧酶(indoleamin 2,3-dioxygenase，IDO)對體內(nèi)DC的功能影響較大，與寄生蟲的免疫逃避有關(guān)。IDO升高的免疫機(jī)制是下調(diào)DC抗原提呈能力，避免在免疫應(yīng)答起始階段對T細(xì)胞的有效激活，進(jìn)而阻礙了機(jī)體抗感染的功能，為寄生蟲逃離機(jī)體的免疫監(jiān)視進(jìn)入體內(nèi)打開了通道。李瑩瑩等[8]在綜述中總結(jié)HLA-G有通過抑制DC的成熟和自然殺傷細(xì)胞(Natural killer Cell， NK)的功能，不能有效啟動特異性T細(xì)胞免疫應(yīng)答，這一機(jī)制有利于Eg逃避宿主的免疫作用，引起寄生器官微環(huán)境免疫狀態(tài)的一系列改變，甚至參與重要臟器的Eg囊性灶形成。在機(jī)體固有免疫應(yīng)答中單核-巨噬細(xì)胞(Macrophage，Mo/Mφ) 不僅與免疫防御密切相關(guān)，也參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)。檢測CE患者肝臟病灶局部的免疫應(yīng)答發(fā)現(xiàn)，在感染后抗原提呈細(xì)胞(APC)CD11b+Mφ和CD11c+DC表達(dá)的人類組織相容性復(fù)合物Ⅱ(MHCⅡ)下調(diào)明顯，表明T細(xì)胞缺少足夠的活化信號產(chǎn)生。在感染和腫瘤發(fā)生時，不同的環(huán)境條件可以刺激巨噬細(xì)胞分化為經(jīng)典巨噬細(xì)胞(M1細(xì)胞)和替代巨噬細(xì)胞(M2細(xì)胞)[9-11]。在小鼠的包蟲感染模型中，M1和M2在感染中均有不同程度的升高，宿主通過增強(qiáng)M1分泌白介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素12(IL-12)等炎癥因子，產(chǎn)生復(fù)雜的炎癥反應(yīng)或誘導(dǎo)一系列免疫反應(yīng)，積極清除入侵病原體；另一方面棘球蚴死亡或寄生時均會釋放一些蟲體抗原作用于宿主免疫系統(tǒng)，誘導(dǎo)出現(xiàn)M2為主的巨噬細(xì)胞極化，白介素10(IL-10)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)等因子水平升高，參與抗炎反應(yīng)和組織修復(fù)的功能，不利于宿主對棘球蚴發(fā)揮免疫殺傷作用。因此維持機(jī)體內(nèi)兩型巨噬細(xì)胞免疫動態(tài)平衡在抗包蟲感染中有重要意義，一旦M1和M2失衡，會使機(jī)體免疫功能紊亂，甚至喪失殺傷包蟲的能力[12]。

1.2CD4+T細(xì)胞亞群及其因子在包蟲感染中的作用機(jī)體感染棘球蚴后，通過APC提成抗原，誘導(dǎo)CD4+T/CD8+T細(xì)胞免疫，亦可刺激B細(xì)胞活化產(chǎn)生特異性的抗體體液免疫，最重要的是棘球蚴抗原影響CD4+T細(xì)胞免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用。包蟲感染不僅有輔助性T細(xì)胞(Th)相關(guān)Th1/Th2細(xì)胞失衡[13]，亦有輔助性T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)相關(guān)的Th17/Treg失衡，為避免包蟲對人體的感染，感染早期機(jī)體產(chǎn)生以Th1為主導(dǎo)的細(xì)胞免疫和以Th17為主導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，有利于抗包蟲的免疫保護(hù)作用；感染晚期由于蟲體持續(xù)生長，機(jī)體免疫反應(yīng)偏向Th2介導(dǎo)的體液免疫，甚至出現(xiàn)Treg細(xì)胞負(fù)調(diào)控，免疫功能受抑制，不利于蟲體的清除。研究發(fā)現(xiàn)隨著Em感染的進(jìn)展，促凋亡和抗凋亡機(jī)制也參與了T細(xì)胞亞群的改變，Bcl-2 mRNA等抗調(diào)亡相關(guān)基因表達(dá)下調(diào)，TNF-β、C-myc mRNA等促凋亡分子在局部的感染病灶中表達(dá)均上調(diào)，造成效應(yīng)性CD4+T細(xì)胞凋亡，降低CD4+T/CD8+T細(xì)胞比值，不能對Em形成有效免疫應(yīng)答[14]。

近年來，CD4+T細(xì)胞亞群的研究增多，濾泡輔助性T細(xì)胞(Tfh)是在外周器官淋巴濾泡中新發(fā)現(xiàn)的一群CD4+T細(xì)胞，其功能是促進(jìn)B細(xì)胞成熟、產(chǎn)生抗體類型轉(zhuǎn)變和淋巴濾泡生發(fā)中心的形成。CD4+T細(xì)胞激活后除了分化為Th1(T-bet)、Th2(GATA-3)、Treg(Foxp3)和Th17(ROR-γt)細(xì)胞，還可產(chǎn)生新的亞群Tfh細(xì)胞(Bcl-6)和Th9細(xì)胞(PU.1)。Tfh細(xì)胞升高與IgG抗體類型改變有關(guān)，在包蟲患者中Tfh細(xì)胞數(shù)量和其細(xì)胞因子IL-21明顯增加，循環(huán)型Tfh細(xì)胞表現(xiàn)為PD-1和CXCR5高表達(dá)，影響了患者IgG水平和IgG1/4亞類，參與棘球蚴感染的發(fā)生發(fā)展。Th9細(xì)胞是一群新的CD4+T細(xì)胞亞群，分泌IL-9發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，Pang等[15]首次發(fā)現(xiàn)包蟲病患者Th9細(xì)胞、IL-9及其轉(zhuǎn)錄因子PU.1(spleen focus forming virus proviral integration oncogene，PU.1)表達(dá)均增加。TGF-β及IL-4聯(lián)合刺激Th0分化產(chǎn)生Th9細(xì)胞，進(jìn)而分泌IL-9，也存在TGF-β誘導(dǎo)效應(yīng)性Th2/Tm(記憶T細(xì)胞)產(chǎn)生IL-9分化為Th9細(xì)胞。棘球蚴感染小鼠模型中發(fā)現(xiàn)Th9、轉(zhuǎn)錄因子PU.1和IL-9均升高，共同參與了免疫應(yīng)答和調(diào)控，Th9細(xì)胞在感染晚期保持高水平，表明棘球蚴感染除了導(dǎo)致Th1/Th2和Th17/Treg細(xì)胞之間的失衡，Th9細(xì)胞可能在維持棘球蚴持續(xù)性感染中起重要作用。Pang等[16]深入研究發(fā)現(xiàn)包蟲抗原激活Th0細(xì)胞中TGF-β/Smads通路促進(jìn)了Th9分化，包蟲病患者中TGF-β/Smads通路活化了轉(zhuǎn)錄因子PU.1表達(dá)，促進(jìn)Th9分泌大量IL-9，參與肝細(xì)胞纖維化和病灶形成，有助于包蟲病慢性化或進(jìn)行性發(fā)展。IL-9表達(dá)水平上調(diào)，與包蟲肉芽腫形成有關(guān)，有利于蟲體逃避免疫清除功能在宿主體內(nèi)寄生[17]。包蟲感染導(dǎo)致的免疫逃避作用和Treg細(xì)胞相關(guān)聯(lián)，促進(jìn)外周免疫耐受功能的形成。包蟲感染激活Th9細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子PU.1和IL-9時，能加劇體內(nèi)Treg細(xì)胞的抑制功能，進(jìn)而導(dǎo)致宿主發(fā)生Th17/Treg偏移，不利于免疫清除包蟲[18]。龐楠楠[19-20]等和馬秀敏等[21]前期研究發(fā)現(xiàn)在繼發(fā)感染小鼠模型中，宿主感染早期以Th1型和Th17型細(xì)胞免疫為主，在晚期Th17細(xì)胞數(shù)量大幅減少，在CE患者Th17和IL-17中降低，說明可能是逐漸增多的Th9和IL-9促進(jìn)棘球蚴感染的炎癥反應(yīng)。在包蟲感染中Th9細(xì)胞和Tfh細(xì)胞等亞群變化特點(diǎn)的新發(fā)現(xiàn)，打破了長期認(rèn)為Eg感染初期以Th1為主，晚期漂移為Th2型的固定模式[22]。在包蟲病患者和模型中Tfh通過調(diào)控抗體類型改變、TGF-β/Smads通路活化Th9細(xì)胞及IL-9參與病灶形成，促進(jìn)了包蟲的寄生與發(fā)展，這些新發(fā)現(xiàn)為包蟲免疫細(xì)胞研究開辟了新途徑。

1.3免疫負(fù)性共刺激分子在包蟲感染中的作用負(fù)性共刺激分子包括PD-1(programmed death 1)/PD-L1(B7-H1)/PD-L2(B7-DC)、CTLA-4(cytotoxic T lymphocyte antigen-4)/B7-1等，抑制或下調(diào)T細(xì)胞的活化和某些細(xì)胞因子的產(chǎn)生，在抗感染免疫中起負(fù)調(diào)節(jié)作用，增強(qiáng)機(jī)體對病原體的耐受，或降低機(jī)體對病原體的清除能力，或促進(jìn)免疫抑制[23]。寄生蟲與宿主之間需要通過一些協(xié)同刺激分子來維持機(jī)體的平衡，這些分子在平衡宿主的免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要的作用，有利于Eg和Em在機(jī)體內(nèi)的慢性感染和寄生。李艷華等[24]研究發(fā)現(xiàn)Em能在宿主體內(nèi)長期寄生，可能與PD-1和CTLA-4等負(fù)性分子高表達(dá)，通過影響宿主Th1/Th2免疫應(yīng)答平衡或免疫抑制CD8+T細(xì)胞攻蟲作用及促效應(yīng)性免疫細(xì)胞的凋亡等，發(fā)揮其免疫抑制性調(diào)節(jié)作用，使泡球蚴逃避宿主免疫細(xì)胞的致死性攻擊。因此PD-1和CTLA-4在宿主的復(fù)雜免疫調(diào)節(jié)中有重要的意義，但是在Em感染過程中是如何進(jìn)行調(diào)節(jié)來參加免疫作用的機(jī)制尚不明確。有可能在某些趨化性細(xì)胞因子的作用下，免疫細(xì)胞高表達(dá)PD-1與CTLA-4和分泌細(xì)胞因子作用于效應(yīng)T細(xì)胞，抑制分泌IL-2和IFN-γ 等，阻礙效應(yīng)細(xì)胞的增殖和功能，抑制了機(jī)體對入侵病原體的免疫清除作用，直接加劇了機(jī)體包蟲的慢性感染[25]。近幾年，免疫共刺激分子 (T cell immunoglobulin and mucin domain containing molecule-3, Tim-3)在腫瘤免疫和感染免疫研究中成為新的研究熱點(diǎn)。Tim-3通過抑制活化信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)，發(fā)揮抑制性免疫調(diào)節(jié)作用，使機(jī)體無法產(chǎn)生對包蟲的免疫應(yīng)答作用，或Tim-3通過調(diào)節(jié)效應(yīng)T細(xì)胞的凋亡，導(dǎo)致機(jī)體對包蟲發(fā)生免疫耐受[26]。Galectin-9 (半乳糖凝集素9)作為Tim-3分子的配體，在包蟲慢性感染的進(jìn)展中有重要作用[27]。包蟲感染免疫中Tim-3和配體Galectin-9結(jié)合形成通路可抑制Th1細(xì)胞增殖和產(chǎn)生相關(guān)細(xì)胞因子，或產(chǎn)生抑制信號誘導(dǎo)Th1細(xì)胞凋亡，干擾素-γ(IFN-γ)、IL-12下降，影響機(jī)體清除蟲體的能力。本課題組趙慧等[28]發(fā)現(xiàn)可溶Tim-3(s Tim-3)在CE患者血清中明顯升高，促進(jìn)了Th1相關(guān)細(xì)胞因子IFN-γ和IL-12下降，IL-4顯著升高，加重Th1/Th2細(xì)胞的失衡。Eg感染過程中負(fù)性分子Tim-3和Galectin-9表達(dá)的上調(diào)促進(jìn)IL-4的分泌，抑制IL-2的產(chǎn)生，高表達(dá)Tim-3 的CD4+T細(xì)胞下調(diào)Th1和Th17等相關(guān)細(xì)胞因子的產(chǎn)生[29]。Tim-3/Galectin-9通路參與了包蟲感染宿主的Th1型向Th2型轉(zhuǎn)變，使Eg逃避機(jī)體的免疫清除作用，在肝臟內(nèi)慢性寄生[30-31]。

2 包蟲候選疫苗和抗原表位的特點(diǎn)

Eg和Em為逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的攻擊，在寄生的宿主體內(nèi)形成包囊性結(jié)構(gòu)，包囊內(nèi)的囊液有豐富的特異性抗原，正是該結(jié)構(gòu)把包蟲囊液與宿主免疫系統(tǒng)分隔開，就順利的逃避了機(jī)體的免疫清除功能。疫苗預(yù)防接種是有效的抵制包蟲感染的途徑之一，但針對包蟲病的天然保護(hù)性抗原極少能在機(jī)體中產(chǎn)生針對Eg和Em的抗感染免疫[32]。研究者們借助分子生物學(xué)的發(fā)展，篩選出一系列的包蟲病疫苗候選分子。

2.1重組EG95疫苗EG95是提取細(xì)粒棘球蚴六鉤蚴RNA后擴(kuò)增出相應(yīng)的cDNA，編碼的相應(yīng)基因片段，在細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)、六鉤蚴和成蟲的生長周期中，EG95基因均有不同程度的表達(dá)[33]。在澳洲等畜牧業(yè)為主的地區(qū)，研究者們用EG95重組蛋白對羊進(jìn)行免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)，研究結(jié)果證明EG95重組蛋白具有良好的免疫保護(hù)作用，不僅能有效的抑制Eg對機(jī)體的感染，還能抑制感染蟲體的發(fā)育[34]，對綿羊的保護(hù)率可達(dá)96%～100%，一年后復(fù)測其抗體保護(hù)率也能達(dá)到86.3%[35-36]。經(jīng)過生信學(xué)軟件對Eg95抗原進(jìn)行表位分析，研究結(jié)果為其包含6個優(yōu)勢T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位以及2個T-B聯(lián)合優(yōu)勢表位[37]。提取AE患者中Em的mRNA并克隆擴(kuò)增出Em95基因，經(jīng)過生信學(xué)軟件的分析，該抗原也存在T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位[38]。Lin等[39]用新疆種屬的細(xì)粒棘球蚴作為模板篩選出新疆株的Eg95抗原，在新疆開展后續(xù)的免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)證實(shí)其具有良好的免疫保護(hù)性。

2.2EgM家族重組蛋白在世界范圍內(nèi)，中間宿主比終末宿主的數(shù)量要龐大數(shù)十倍，在新疆，羊與犬的比例也差距巨大，研究者們嘗試用Eg感染犬后發(fā)現(xiàn)幼犬感染包蟲時體內(nèi)生長的成蟲數(shù)量遠(yuǎn)高于曾感染過包蟲的大齡犬，這一現(xiàn)象說明了犬的免疫系統(tǒng)在受到包蟲的刺激后能抵抗再次感染。如果能控制終末宿主犬的感染，那么就能更好的控制包蟲病的蔓延。Zhang等[40]發(fā)現(xiàn)了EgM家族重組蛋白能夠有效的保護(hù)犬免受包蟲的攻擊。從Eg成蟲和蟲卵發(fā)育過程中分離出3種差異表達(dá)序列(egM4、egM9和egM123)，分別用這3種蛋白免疫犬，再用Eg原頭節(jié)感染攻擊犬，實(shí)驗(yàn)證明該抗原對犬有免疫保護(hù)作用，保護(hù)率高達(dá)97%～100%。

2.3EgA31蛋白疫苗EgA31基因是Fu[41]發(fā)現(xiàn)的由Eg編碼在成蟲體內(nèi)高表達(dá)的類似副肌球蛋白的66kDa纖維蛋白。對EgA31蛋白疫苗在免疫后做的攻毒試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)重組EgA31蛋白在淋巴結(jié)節(jié)處有明顯的細(xì)胞免疫反應(yīng)，在動物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭心苷T導(dǎo)宿主產(chǎn)生強(qiáng)烈的體液免疫反應(yīng)。EgA31蛋白可以與肌球蛋白相互作用，參與吸盤上肌纖維收縮，磷酸化后可參與蟲體的免疫逃避[42]。李玉嬌等[43]通過生信學(xué)軟件對EgA31抗原進(jìn)行表位分析，在該抗原上存在4個優(yōu)勢T細(xì)胞表位和5個B細(xì)胞表位及一個T-B聯(lián)合表位[44]。在摩洛哥和突尼斯，有研究者們將EgA31和Eg Trp蛋白聯(lián)合構(gòu)成口服疫苗對犬進(jìn)行免疫，研究證明該聯(lián)合蛋白的免疫能夠讓犬抵抗Eg的感染。犬口服蛋白，隔21 d一次，共兩次，第二次免疫20 d后以75 000個原頭節(jié)對犬進(jìn)行攻擊感染，感染26～29 d后剖檢犬，進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)其荷蟲量減少70%～80%，該蛋白的免疫有效的減緩了蟲體發(fā)育的速度，說明犬的體內(nèi)產(chǎn)生了抗Eg成蟲的免疫保護(hù)效果[45]。

2.4Eg14-3-3蛋白Eg14-3-3序列因含有磷酸化的絲氨酸或蘇氨酸殘基，能夠形成同源或異源復(fù)合物，在機(jī)體發(fā)生免疫反應(yīng)時與特定的蛋白質(zhì)進(jìn)行結(jié)合，它作為高保守的蛋白家族調(diào)節(jié)機(jī)體蛋白的硫酸化作用。Eg14-3-3蛋白在機(jī)體參與免疫應(yīng)答的包括信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、酶激活，細(xì)胞分裂和細(xì)胞凋亡等過程都能夠發(fā)揮相應(yīng)的免疫作用。用Eg14-3-3蛋白與QuliA佐劑結(jié)合免疫BALB/c鼠，進(jìn)行免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)，免疫后再以2 000枚包蟲蟲卵攻擊感染小鼠，經(jīng)過后期的剖殺檢測，感染小鼠荷蟲量下降了97.35%[46]。

2.5EMY162和EgG1Y162抗原Kouguchi等[47]在研究中篩選針對Em疫苗候選蛋白時發(fā)現(xiàn)了EMY162抗原，該蛋白是分泌型蛋白質(zhì)，具有膜表面錨定抗原的作用，與早期寄生蟲進(jìn)入機(jī)體誘導(dǎo)一系列免疫反應(yīng)有關(guān)。Li等[46]通過表位分析發(fā)現(xiàn)該蛋白通常有跨膜區(qū)域，說明蛋白的折疊性和柔韌性較好，成為疫苗候選蛋白的可能性很高?？缒^(qū)域的存在和跨膜蛋白質(zhì)的存在也保證了微生物和寄生蟲感染機(jī)體后通過細(xì)胞膜進(jìn)行免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。本課題組曹春寶等[48]在研究細(xì)粒棘球蚴(Eg)中發(fā)現(xiàn)了新基因egG1Y162抗原基因，該抗原基因已送登基因庫(Genebank)。蛋白免疫印跡檢測結(jié)果顯示，egG1Y162重組抗原能夠與感染犬血清發(fā)生反應(yīng)，說明該抗原在機(jī)體免疫反應(yīng)中存在高度的敏感性和特異性反應(yīng)。通過生信學(xué)軟件分析，egG1Y162抗原有6個T細(xì)胞和B細(xì)胞抗原優(yōu)勢表位，這些表位在抗棘球蚴感染的保護(hù)性作用中起著至關(guān)重要的作用。本課題組對egG1Y162基因進(jìn)行分子克隆，蛋白的誘導(dǎo)和表達(dá)，在動物保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，重組蛋白疫苗能夠激活小鼠對包蟲感染的免疫保護(hù)作用，結(jié)構(gòu)中存在能有效地刺激特異性抗體的抗原表位。在后期的實(shí)驗(yàn)中MA[49]對該基因進(jìn)行深入的分析后，用電穿孔法構(gòu)建的BCG-egG1Y162聯(lián)合疫苗免疫小鼠，進(jìn)一步證明egG1Y162對宿主有免疫保護(hù)作用，在疫苗研究中可以作為包蟲病疫苗良好的候選分子[50]。

包蟲病的感染是一個復(fù)雜的免疫過程，機(jī)體免疫的平衡對預(yù)防包蟲的感染有重要的意義，只有及時的糾正細(xì)胞之間的失衡才能有效的避免寄生蟲免疫逃避。免疫預(yù)防也是控制包蟲病傳播的重要措施之一，針對后期包蟲疫苗的研制，本文涉及了多個候選疫苗分子，在逐一的介紹過程中，更清晰的了解了它們的特性和表位信息。這些疫苗候選分子都與棘球蚴病的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)，對其深入研究將會為針對性地開發(fā)抗棘球蚴疫苗提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。